Ampliando nuestra comprensión de la efectividad de la vacuna contra la influenza temprana versus la tardía (BELIEVE)

Reclutamiento, selección y evaluación de elegibilidad

Los participantes potenciales (University Hospitals of Leicester NHS Trust, personal de UHL) serán contactados por correo electrónico para anunciar y explicar el estudio. El correo electrónico formará parte de los correos electrónicos de vacunación contra la influenza estacional de rutina que se envían cada año para recordar al personal de UHL que se vacune. Además, los investigadores anunciarán mediante carteles en las áreas de alto tráfico de personal, p. el restaurante, y nuestro Equipo de Salud Ocupacional asistirá con esta publicidad del estudio. Los investigadores esperan que algunos trabajadores de la salud (TS) se enteren del estudio a través del boca a boca.

El estudio tendrá dos fases de reclutamiento. Para el mes de septiembre para el grupo de vacunación 'temprana', y desde mediados de noviembre hasta mediados de diciembre para el grupo de vacunación 'tardía', los tiempos exactos pueden variar según cuándo se reciban las vacunas inactivadas contra la influenza y la estacionalidad del virus. , ya que todo el reclutamiento se completará antes del comienzo de la temporada de influenza. La asignación a los dos grupos de vacunación no será aleatoria; será la decisión de los trabajadores sanitarios si les gustaría recibir la vacunación antes o después. Habrá un límite de 200 HCW reclutados para cada grupo.

Las personas que expresen interés en participar en el estudio recibirán una hoja de información personalmente o por correo electrónico. A continuación, los investigadores les darán el tiempo que necesiten para decidir si participan o no en el estudio. Si la persona acepta participar, un miembro del equipo de investigación evaluará y confirmará la elegibilidad. Los participantes solo serán reclutados si se cumplen todos los criterios. En este momento se harán arreglos para que los miembros del personal asistan a una cita inicial en el Espacio de Investigación en el LRI. El reclutamiento en el área de investigación cumplirá con las medidas actuales de distanciamiento social vigentes en UHL.

En esta cita inicial, se explicará el estudio a los miembros del personal en grupos. Luego, un miembro del equipo de investigación solicitará el consentimiento informado por escrito de cada HCW individualmente, como se detalla a continuación. Si una persona tiene más preguntas sobre el estudio, se permitirá que otro miembro del equipo del estudio apoye y facilite el consentimiento informado.

Reclutamiento de pacientes hospitalizados Los médicos de las salas médicas agudas serán notificados antes del inicio de la temporada de influenza por correo electrónico y carteles, en áreas clínicas, del estudio que involucra a pacientes hospitalizados con (enfermedad similar a la influenza) ILI. El departamento de Virología de los Hospitales Universitarios de Leicester llama rutinariamente al equipo clínico de casos positivos de influenza en pacientes hospitalizados durante la temporada de influenza. Cuando el equipo clínico vaya a explicar este diagnóstico al paciente, también le informarán sobre el estudio y le proporcionarán un folleto de información para el participante. Después de esto, los investigadores le darán al paciente el tiempo que necesiten para decidir si participar o no en el estudio. Si la persona acepta participar, informará a un miembro del equipo clínico, quien luego notificará al equipo de investigación. Un miembro del equipo de investigación asistirá a la sala para evaluar y confirmar la elegibilidad. Los participantes solo serán reclutados si se cumplen todos los criterios. Usando datos de resultados de laboratorio, también se reclutarán veinte pacientes hospitalizados con frotis negativos para influenza confirmados de la misma manera, como grupo de control.

Visitas de estudio

Las siguientes actividades se llevarán a cabo en cada visita y se registrarán en el CRF:

Visita 1: visita de referencia

• Los participantes se inscribirán siempre que cumplan con los criterios de inclusión y exclusión y den su consentimiento por escrito totalmente informado.
• A los participantes se les asignará un número de estudio.
• Los participantes completarán un breve cuestionario que incluirá información demográfica: edad, sexo, etnia, función laboral, comorbilidades médicas, medicamentos regulares, antecedentes de tabaquismo, antecedentes de infecciones por influenza y vacuna contra la influenza.
• Recoja 10 ml de sangre coagulada antes de la inmunización para los anticuerpos de referencia. Procese sangre y almacene suero para ensayos serológicos. La vacuna antigripal se administrará de la forma habitual.
• Los participantes recibirán un termómetro, dos kits de automuestreo de influenza (es decir, un hisopo y un tubo de medio de transporte viral con una bolsa de muestra de microbiología) y dos formularios de información que completarán en caso de que desarrollen una enfermedad similar a la influenza ( ETI). Una ILI se definirá según la definición de caso de la OMS como una fiebre de >37,8oC y tos con aparición en los últimos 10 días. Se les mostrará cómo operar el termómetro, tomar un hisopo (es decir, un hisopo de garganta) y cómo asegurar el hisopo en el tubo de muestreo. También se les mostrará cómo completar un formulario de evento de ILI (ILIef), registrando brevemente el momento y la naturaleza de sus síntomas/signos de ILI.

Visita 2: 3 semanas después de la visita inicial (+ o - 7 días)

• Recoja 10 ml de sangre coagulada para serología. Procesar sangre y almacenar suero.
• Se les pedirá a los participantes que proporcionen muestras de aliento, esto actuará como un control contra el cual se compararán las muestras de aliento que ocurrieron durante ILI Visita 3: temporada alta de influenza, generalmente de enero a febrero (+ o - 30 días)
• Recoja 10 ml de sangre coagulada para serología. Procesar sangre y almacenar suero. Visita 4: Fin de la temporada de influenza, generalmente de abril a mayo (+ o - 30 días)
• Recoja 10 ml de sangre coagulada para serología. Procesar sangre y almacenar suero. Visita de estudio de evento de ILI Los participantes del estudio se comunicarán con el equipo de estudio por correo electrónico o por teléfono para alertarlos de que se ha producido un evento de ILI y para hacer arreglos para que un miembro del equipo de estudio recolecte el hisopo y la ILIef de ellos, tan pronto como sea posible después de que haya ocurrido. tomadas, para su almacenamiento apropiado (en un congelador a -80oC) hasta que se analicen. Si los participantes del estudio están en casa cuando desarrollan ILI, se les pedirá que completen el hisopo y la ILef. El hisopo se empacará en una bolsa doble y lo recogerá un miembro del equipo de investigación de acuerdo con la guía de transporte emitida en la guía del gobierno sobre COVID-19: manejo y procesamiento seguro de muestras en laboratorios de acuerdo con UN3373, instrucciones de empaque 650. Los hisopos se entregarán al laboratorio de virología de UHL y se procesarán de acuerdo con los procedimientos operativos estándar (consulte la Sección 8.7.1).

Se le reiterará al participante del estudio que los resultados de estos hisopos se le enviarán por correo electrónico y por teléfono junto con los últimos consejos de salud ocupacional. Se les recomendará que sigan la política de salud ocupacional para ILI mientras esperan los resultados del hisopo, informen la enfermedad de la manera habitual y se comuniquen con su médico de cabecera si se necesita más asesoramiento médico con respecto a este período actual de enfermedad.

El contenido del ILIef se ingresará en el formulario de informe de caso (CRF) de los participantes, no se incluirá información personal. Estos detalles se utilizarán en la interpretación de la secuenciación viral y los títulos de anticuerpos, realizados en la OMS de Melbourne.

Si el participante del estudio está en el trabajo cuando desarrolla ILI, se le pedirá que proporcione una muestra de aliento y una muestra de máscara para la detección de influenza utilizando métodos novedosos antes de salir del trabajo. Los materiales de muestreo se llevarán al lugar donde se encuentra el HCW, pero si esto no puede suceder de inmediato, se le indicará al HCW que siga los consejos de salud ocupacional y se vaya a casa. Las muestras recolectadas de estos procesos se detallan en la sección 8.7.

Muestra de aliento de paciente hospitalizado Los pacientes hospitalizados serán abordados según la política habitual de control de infecciones de UHL. Solo se abordará a los pacientes que tengan resultados disponibles de un frotis de garganta reciente analizado para detectar patógenos respiratorios comunes. Los pabellones positivos para COVID-19 no participarán en el reclutamiento, sino que se reclutarán pacientes hospitalizados con influenza y otros virus respiratorios de los pabellones negativos para COVID-19. Los pacientes con influenza positiva confirmada generalmente se manejan en habitaciones laterales según la política. En todos los casos, no se requerirá que el paciente entre en contacto con el equipo de análisis, ya que los procesos de captura de aliento y análisis son independientes. No se realizarán muestreos de máscaras en pacientes que requieran oxigenoterapia a través de una máscara facial. Una vez que haya dado su consentimiento para el estudio, un miembro del equipo de investigación se acercará al paciente con las máscaras, jeringas y boquillas necesarias para la recolección de muestras de aliento. En este momento, también se tomará un frotis de garganta repetido para que se pueda realizar una comparación precisa entre los métodos de diagnóstico novedosos y la práctica actual. Se utilizarán los tres métodos de muestreo de aliento, cuando sea posible. Una vez recogidas las muestras, se colocarán en una bolsa de riesgo biológico y se llevarán a las máquinas de análisis. Las muestras de hisopos y máscaras se transportarán al laboratorio de virología en Leicester Royal Infirmary para su procesamiento. El equipo de captura de aliento (jeringas y boquillas desechables) se desechará de la forma habitual como residuos clínicos. Los tubos TD y el muestreador Bio-VOC se empaquetarán en doble bolsa y se descontaminarán. Esta es la única visita de estudio requerida por los pacientes hospitalizados y no se requiere más seguimiento.

Auto-hisopos Los hisopos se entregarán al Departamento de Microbiología Clínica de los Hospitales Universitarios de Leicester NHS Trust, donde se manipularán en condiciones de Categoría 2 (BSL-2). Se agitarán en vórtex y se descartarán los hisopos dejando el medio de transporte de virus (VTM) inoculado. Los tubos VTM se probarán en un ensayo de diagnóstico estándar (usado de forma rutinaria para pruebas de pacientes en hospitales) para verificar la presencia de influenza (ya que muchos virus respiratorios diferentes pueden causar una 'enfermedad similar a la influenza'). Si se detecta influenza, se enviará una alícuota de este VTM a la OMS de Melbourne, junto con las muestras de suero, para la secuenciación viral de la influenza. El VTM se transportará al laboratorio de la OMS según las normas UN3733/Categoría B.

Análisis de aliento de VOC Las tres plataformas de análisis utilizarán el mismo enfoque básico de recolección. Se pedirá a los participantes que no hayan comido ni bebido nada al menos 30 minutos antes de la muestra de aliento. Antes de la toma de muestras, enjuáguese la boca con agua, que luego podrá tragar, y luego proporcione tres muestras de aliento no forzado exhalando en boquillas desechables durante 3-5 segundos. Los investigadores usarán el PPE dictado por la política de confianza local en UHL para recolectar hisopos nasales y orales. Se utilizarán guantes clínicos desechables para todos los procedimientos. Los dispositivos analíticos se mantendrán en la sala o en un área de investigación lejos del contacto directo con el paciente.

Para el análisis GC-IMS, la boquilla se conecta a un tubo de plástico de 10 cm de largo. A medida que el paciente exhala en el tubo, el investigador extraerá una muestra de aliento en una jeringa de 5 ml en la mitad del tubo.

Luego, el investigador inyectará la muestra desde la jeringa en el dispositivo BreathSpecTM GC-IMS para su análisis. Cualquier material infeccioso contenido en la muestra se destruirá calentándolo a más de 60 °C como parte del proceso analítico.

El eNose utiliza una unidad comercial de captura de aliento con marca CE, Markes Bio-VOC. La unidad contiene 129 ml de aliento, viene sellada y solo se abre cuando está lista para usar, y es desechable. El usuario ajusta una boquilla de cartón a la unidad antes de la toma de muestras. Una vez que el paciente ha respirado en la unidad, se retira la boquilla y se agrega un accesorio de jeringa que se conecta a la eNose. Luego se presiona la jeringa y se analiza la muestra. El tiempo de análisis es inferior a 5 minutos. La máquina eNose se descontaminará al final de cada día de uso de acuerdo con las pautas del fabricante.

Para el análisis de GC-MS, se recolecta otra muestra de aliento usando la unidad Markes Bio-VOC como se indicó anteriormente. Una vez recolectada la muestra, se transferirá a un tubo de desorción térmica (TD) (normalmente de 89 mm x 6,4 mm). Las paredes internas del tubo están recubiertas con una capa absorbente a la que se adhieren los químicos del aliento. El tubo TD se coloca al final de la unidad Bio-VOC y el aire capturado se empuja a través del tubo. Una vez completados, los extremos de los tubos se sellan con tapas de extremo. Luego se lleva a cabo un proceso de descontaminación validado para el muestreador Bio-VOC y los tubos TD a través de un ciclo de calor largo/alto para garantizar que el virus se elimine. Los tubos TD descontaminados se mantendrán en cajas de almacenamiento en el área de investigación de Leicester Royal Infirmary para su transporte a la Universidad de Warwick para su análisis y disposición final, según un Acuerdo de Transferencia de Material predefinido.

Los resultados del análisis GC-IMS se cargarán regularmente desde BreathSpecTM en una unidad compartida de DataSync y los analistas de la Universidad de Warwick los descargarán. No se asociará ningún dato identificable a estos datos, solo un número de estudio.

Muestreo de máscaras El muestreo de máscaras consiste en que los participantes usen una máscara facial modificada (quirúrgica plana, de pico de pato o FFP1) que contiene hasta 5 tiras de alcohol polivinílico (PVA) impresas en 3D durante un máximo de 60 minutos mientras son observados por un miembro del equipo de investigación. Los investigadores brindarán capacitación, apoyo y equipo de protección personal al personal de investigación que obtenga muestras y acordará protocolos para el procesamiento local. Antes de su uso, las máscaras se esterilizan y guardan en bolsas de muestra selladas, una vez que se usan, se vuelven a colocar en estas bolsas y se sellan. Serán transportados al laboratorio de virología de UHL de acuerdo con las evaluaciones de riesgos y los procedimientos operativos estándar actuales relacionados con el transporte de materiales peligrosos. El ARN viral se extraerá y cuantificará de las tiras de PVA dentro de las máscaras mediante PCR cuantitativa en tiempo real. El procesamiento de las tiras de PVA requiere que se disuelvan en agua, de la cual se extrae el virus de ARN y se analiza mediante métodos moleculares. Las mascarillas y bolsas serán destruidas.

Pruebas de suero y secuenciación viral En cada uno de los días programados que requieran muestras de suero, la sangre coagulada se almacenará entre 2 °C y 8 ​​°C y se centrifugará dentro de las 24 horas en Research Space, LRI. Los sueros se almacenarán en crioviales, con todos los crioviales etiquetados con el número de estudio del participante, el número de visita y la fecha de recolección en Research Space, LRI. Las muestras se almacenarán congeladas a -80 oC hasta su envío. Se enviará un juego de crioviales al laboratorio de referencia de la OMS en Melbourne una vez que se hayan recolectado todas las muestras. El otro juego de crioviales se almacenará como medida de seguridad en caso de problemas de transporte. Con el consentimiento del participante, las muestras de suero no utilizadas se almacenarán para futuras investigaciones éticamente aprobadas y se compartirán con otros colaboradores de investigación en otras instituciones académicas y socios de la industria dentro y fuera del Reino Unido para futuras investigaciones. El suero se utilizará para los ensayos de inhibición de la hemaglutinación y microneutralización y, una vez que se hayan procesado todas las muestras, los resultados se enviarán al equipo de investigación de Leicester.

Los ensayos de inhibición de la hemaglutinación (HAI) y microneutralización (MN), junto con la secuenciación viral de la influenza, se realizarán en el Centro Colaborador de la OMS para Referencia e Investigación sobre la Influenza (VIDRL), Instituto Peter Doherty para Infecciones e Inmunidad, 792 Elizabeth Street, Melbourne, VIC 3000, Australia.