Poszerzenie naszej wiedzy na temat skuteczności szczepionek przeciw grypie wczesnej i późnej (BELIEVE)

Rekrutacja, weryfikacja i ocena kwalifikowalności

Potencjalni uczestnicy (University Hospitals of Leicester NHS Trust, personel UHL) zostaną powiadomieni e-mailem w celu ogłoszenia i wyjaśnienia badania. Wiadomość e-mail będzie częścią rutynowych wiadomości e-mail dotyczących szczepień przeciwko grypie sezonowej, które są wysyłane co roku w celu przypomnienia personelowi UHL o szczepieniach. Ponadto śledczy będą reklamować się za pomocą plakatów w miejscach o dużym natężeniu ruchu personelu, m.in. restauracji, a nasz zespół ds. medycyny pracy będzie pomagał w reklamowaniu badania. Badacze spodziewają się, że niektórzy pracownicy służby zdrowia (HCW) dowiedzą się o badaniu pocztą pantoflową.

Badanie będzie miało dwa etapy rekrutacji. We wrześniu dla grupy „wczesnych” szczepień oraz od połowy listopada do połowy grudnia dla grupy „późnych” szczepień – dokładne terminy mogą się różnić w zależności od tego, kiedy otrzymano inaktywowane szczepionki przeciw grypie i sezonowości wirusa , ponieważ cała rekrutacja zostanie zakończona przed rozpoczęciem sezonu grypowego. Przydział do dwóch grup szczepień nie będzie losowy; będzie to decyzja pracowników służby zdrowia, czy będą chcieli zaszczepić się wcześniej, czy później. Do każdej grupy będzie obowiązywał limit 200 pracowników służby zdrowia.

Osoby, które wyrażą zainteresowanie udziałem w badaniu, otrzymają ulotkę informacyjną osobiście lub pocztą elektroniczną. Następnie badacze dadzą im tyle czasu, ile potrzebują na podjęcie decyzji, czy wziąć udział w badaniu. Jeśli dana osoba zgodzi się na udział, członek zespołu badawczego sprawdzi i potwierdzi kwalifikowalność. Uczestnicy zostaną zatrudnieni tylko po spełnieniu wszystkich kryteriów. W tym czasie zostaną podjęte ustalenia dotyczące obecności członków personelu na pierwszym spotkaniu w Przestrzeni Badawczej w LRI. Rekrutacja w obszarze badawczym będzie zgodna z obecnymi środkami dystansowania społecznego obowiązującymi w UHL.

Na tym wstępnym spotkaniu badanie zostanie wyjaśnione członkom personelu w grupach. Następnie członek zespołu badawczego zwróci się do każdego pracownika służby zdrowia z osobna o pisemną świadomą zgodę, jak opisano poniżej. Jeśli dana osoba ma więcej pytań dotyczących badania, inny członek zespołu badawczego będzie mógł wesprzeć i ułatwić świadomą zgodę.

Rekrutacja pacjentów hospitalizowanych Klinicyści na oddziałach intensywnej terapii zostaną powiadomieni przed rozpoczęciem sezonu grypowego za pośrednictwem poczty elektronicznej i plakatów w obszarach klinicznych o badaniu z udziałem pacjentów hospitalizowanych z (chorobą grypopodobną) ILI. Oddziały wirusologii szpitali uniwersyteckich w Leicester rutynowo dzwonią do zespołu klinicznego z dodatnimi przypadkami grypy u pacjentów hospitalizowanych w sezonie grypowym. Kiedy zespół kliniczny udaje się następnie wyjaśnić pacjentowi tę diagnozę, informuje go również o badaniu i dostarcza mu ulotkę informacyjną dla uczestnika. Następnie badacze dadzą pacjentowi tyle czasu, ile potrzeba na podjęcie decyzji, czy wziąć udział w badaniu. Jeśli dana osoba zgodzi się na udział, poinformuje o tym członka zespołu klinicznego, który następnie powiadomi zespół badawczy. Członek zespołu badawczego pojawi się na oddziale w celu sprawdzenia i potwierdzenia uprawnień. Uczestnicy zostaną zatrudnieni tylko po spełnieniu wszystkich kryteriów. Wykorzystując wyniki badań laboratoryjnych, dwudziestu pacjentów hospitalizowanych z potwierdzonymi wymazami grypowo-ujemnymi zostanie również zrekrutowanych w ten sam sposób, jako grupa kontrolna.

Wizyty studyjne

Następujące czynności będą wykonywane podczas każdej wizyty i rejestrowane w CRF:

Wizyta 1: Wizyta wyjściowa

• Uczestnicy zostaną zarejestrowani pod warunkiem, że spełnią kryteria włączenia i wyłączenia oraz wyrażą w pełni świadomą pisemną zgodę.
• Następnie uczestnikom zostanie nadany numer badania
• Uczestnicy wypełnią krótki kwestionariusz, który będzie zawierał informacje demograficzne: wiek, płeć, pochodzenie etniczne, stanowisko zawodowe, choroby współistniejące, regularnie przyjmowane leki, historię palenia tytoniu, historię infekcji grypowych i szczepionkę przeciw grypie.
• Zbierz 10 ml skrzepniętej krwi z wstępnej immunizacji na przeciwciała wyjściowe. Przetwarzaj krew i przechowuj surowicę do testów serologicznych. Szczepionka przeciw grypie zostanie podana w normalny sposób.
• Uczestnicy otrzymają termometr, dwa zestawy do samodzielnego pobierania próbek na obecność grypy (tj. wymazówkę i probówkę z podłożem do transportu wirusów z torebką na próbki mikrobiologiczne) oraz dwa formularze informacyjne, które wypełnią w przypadku wystąpienia u nich choroby grypopodobnej ( ILI). ILI zostanie zdefiniowana zgodnie z definicją przypadku WHO jako gorączka > 37,8oC i kaszel rozpoczynający się w ciągu ostatnich 10 dni. Zostaną pokazane, jak obsługiwać termometr, jak samodzielnie pobrać wymaz (czyli wymaz z gardła) oraz jak zamocować wymazówkę w probówce. Zostaną również pokazane, jak wypełnić formularz zdarzenia ILI (ILIef) – krótko zapisując czas i charakter objawów/oznak objawów ILI.

Wizyta 2: 3 tygodnie po wizycie wyjściowej (+ lub - 7 dni)

• Pobierz 10 ml skrzepniętej krwi do badań serologicznych. Przetwarzaj krew i przechowuj surowicę.
• Uczestnicy zostaną poproszeni o dostarczenie próbek oddechu, co posłuży jako kontrola, z którą zostaną porównane próbki oddechu pobrane podczas ILI Wizyta 3: Szczyt sezonu grypowego, zwykle od stycznia do lutego (+ lub - 30 dni)
• Pobierz 10 ml skrzepniętej krwi do badań serologicznych. Przetwarzaj krew i przechowuj surowicę. Wizyta 4: Koniec sezonu grypowego, zwykle od kwietnia do maja (+ lub - 30 dni)
• Pobierz 10 ml skrzepniętej krwi do badań serologicznych. Przetwarzaj krew i przechowuj surowicę. Wizyta badawcza w przypadku zdarzenia ILI Uczestnicy badania skontaktują się z zespołem badawczym za pośrednictwem poczty elektronicznej lub telefonu, aby powiadomić ich o wystąpieniu zdarzenia ILI oraz umówić członka zespołu badawczego na pobranie od nich wymazu i ILIef tak szybko, jak to możliwe pobrane, w celu odpowiedniego przechowywania (w zamrażarce -80oC) do czasu badania. Jeśli uczestnicy badania będą w domu, gdy rozwinie się u nich ILI, zostaną poproszeni o samodzielne pobranie wymazu i ILef. Wymaz zostanie podwójnie zapakowany i pobrany przez członka zespołu badawczego zgodnie z wytycznymi dotyczącymi transportu wydanymi w rządowych wytycznych dotyczących COVID-19: bezpieczne postępowanie i przetwarzanie próbek w laboratoriach zgodnie z UN3373, instrukcje pakowania 650. Wymazy zostaną dostarczone do laboratorium wirusologicznego UHL i przetworzone zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi (patrz sekcja 8.7.1).

Uczestnikowi badania zostanie powtórzone, że wyniki tych wymazów zostaną mu przesłane pocztą elektroniczną i telefonicznie wraz z najnowszymi poradami dotyczącymi zdrowia w miejscu pracy. Otrzymają poradę, aby podczas oczekiwania na wyniki wymazu postępowali zgodnie z polityką BHP dotyczącą ILI, zgłaszali chorobę w normalny sposób i kontaktowali się ze swoim lekarzem rodzinnym, jeśli potrzebna jest dalsza porada medyczna dotycząca obecnego okresu choroby.

Treść ILIef zostanie wprowadzona do formularza opisu przypadku uczestnika (CRF), żadne dane osobowe nie zostaną uwzględnione. Te szczegóły zostaną wykorzystane w interpretacji sekwencjonowania wirusów i mian przeciwciał, wykonanych w WHO w Melbourne.

Jeśli uczestnik badania jest w pracy, gdy rozwinie się u niego ILI, zostanie poproszony o dostarczenie próbki oddechu i próbki maski w celu wykrycia grypy przy użyciu nowatorskich metod przed opuszczeniem pracy. Materiały do ​​pobierania próbek zostaną dostarczone do miejsca, w którym znajduje się pracownik służby zdrowia, ale jeśli nie będzie to możliwe od razu, pracownikowi zostanie poinstruowany, aby postępował zgodnie z poradami medycyny pracy i udał się do domu. Próbki pobrane z tych procesów są szczegółowo opisane w sekcji 8.7.

Próbka oddechu pacjenta w szpitalu Pacjenci hospitalizowani będą przyjmowani zgodnie ze zwykłą polityką kontroli zakażeń UHL. Zostaną przyjęci tylko pacjenci, którzy mają dostępne wyniki niedawnego wymazu z gardła przebadanego pod kątem powszechnych patogenów układu oddechowego. Oddziały z dodatnim wynikiem COVID-19 nie będą zaangażowane w rekrutację, zamiast tego pacjenci hospitalizowani z grypą i innymi wirusami układu oddechowego będą rekrutowani z oddziałów z ujemnym wynikiem COVID-19. Pacjenci, u których potwierdzono obecność wirusa grypy, są zwykle leczeni w bocznych pokojach zgodnie z polityką. We wszystkich przypadkach pacjent nie będzie musiał wchodzić w kontakt ze sprzętem do analizy, ponieważ procesy wychwytywania oddechu i analizy są oddzielne. Próbki z maski nie będą pobierane od pacjentów wymagających tlenoterapii przez maskę na twarz. Po uzyskaniu zgody na badanie jeden z członków zespołu badawczego podejdzie do pacjenta z maskami, strzykawkami i ustnikami potrzebnymi do pobrania próbki oddechu. W tym czasie zostanie również pobrany powtórny wymaz z gardła, aby można było dokładnie porównać nowe metody diagnostyczne z obecną praktyką. Tam, gdzie to możliwe, zostaną zastosowane wszystkie trzy metody pobierania próbek oddechu. Po pobraniu próbki zostaną umieszczone w worku zagrożenia biologicznego i przetransportowane do maszyn analitycznych. Wymazy i próbki masek zostaną przetransportowane do laboratorium wirusologicznego w Leicester Royal Infirmary w celu przetworzenia. Sprzęt do wychwytywania oddechu (strzykawki i jednorazowe ustniki) zostanie zutylizowany w normalny sposób wraz z odpadami klinicznymi. Probówki TD i próbnik Bio-VOC zostaną zapakowane podwójnie i zostaną odkażone. Jest to jedyna wizyta studyjna wymagana przez pacjentów hospitalizowanych i nie jest wymagana dalsza obserwacja.

Waciki do samodzielnego pobrania Wymazówki zostaną dostarczone do Oddziału Mikrobiologii Klinicznej Szpitali Uniwersyteckich Leicester NHS Trust, gdzie będą traktowane w warunkach kategorii 2 (BSL-2). Zostaną one worteksowane, a wymazy wyrzucone, pozostawiając zaszczepioną pożywkę transportową wirusa (VTM). Probówki VTM zostaną przetestowane przy użyciu standardowego testu diagnostycznego (rutynowo stosowanego w badaniach pacjentów szpitalnych) w celu wykrycia grypy (ponieważ wiele różnych wirusów układu oddechowego może wywołać „chorobę grypopodobną”). W przypadku wykrycia grypy podwielokrotność tego VTM zostanie wysłana do WHO Melbourne wraz z próbkami surowicy w celu sekwencjonowania wirusa grypy. VTM zostanie przetransportowany do laboratorium WHO zgodnie z przepisami UN3733/kategoria B.

Analiza wydychanego powietrza LZO Wszystkie trzy platformy analityczne będą korzystać z tego samego podstawowego podejścia do zbierania danych. Uczestnicy zostaną poproszeni o powstrzymanie się od jedzenia i picia co najmniej 30 minut przed pobraniem próbki oddechu. Przed pobraniem próbki przepłucz usta wodą, którą mogą następnie połknąć, a następnie pobierz trzy niewymuszone próbki oddechu, wydychając je do jednorazowych ustników przez 3-5 sekund. Naukowcy będą nosić środki ochrony indywidualnej podyktowane przez lokalną politykę zaufania w UHL do pobierania wymazów z nosa i jamy ustnej. Do wszystkich zabiegów będą używane jednorazowe rękawiczki kliniczne. Urządzenia analityczne będą przechowywane na oddziale lub w obszarze badawczym z dala od bezpośredniego kontaktu z pacjentem.

Do analizy GC-IMS ustnik jest przymocowany do plastikowej rurki o długości 10 cm. Gdy pacjent wydycha powietrze do rurki, badacz pobiera próbkę oddechu do 5 ml strzykawki w dół rurki.

Próbka zostanie następnie wstrzyknięta ze strzykawki przez badacza do urządzenia BreathSpecTM GC-IMS w celu analizy. Jakikolwiek materiał zakaźny zawarty w próbce zostanie zniszczony przez podgrzanie do temperatury ponad 60°C w ramach procesu analitycznego.

eNose wykorzystuje komercyjną jednostkę wychwytującą oddech oznaczoną znakiem CE, Markes Bio-VOC. Urządzenie mieści 129 ml oddechu, jest zapieczętowane i otwierane tylko wtedy, gdy jest gotowe do użycia, i jest jednorazowego użytku. Użytkownik dopasowuje kartonowy ustnik do urządzenia przed pobraniem próbki. Gdy pacjent wykona wdech do urządzenia, ustnik jest usuwany i zakładany jest łącznik strzykawki, który łączy się z eNosem. Strzykawka jest następnie wciskana i próbka jest analizowana. Czas analizy poniżej 5 minut. Urządzenie eNose będzie odkażane na koniec każdego dnia użytkowania zgodnie z wytycznymi producenta.

Do analizy GC-MS ponownie pobiera się kolejną próbkę oddechu przy użyciu urządzenia Markes Bio-VOC, jak powyżej. Po pobraniu próbki zostanie ona przeniesiona do probówki do desorpcji termicznej (TD) (zwykle 89 mm x 6,4 mm). Wewnętrzne ścianki rurki są pokryte warstwą chłonną, do której przylegają chemikalia oddechowe. Rurka TD jest umieszczana na końcu jednostki Bio-VOC i wychwycone powietrze jest przepychane przez rurkę. Po zakończeniu, końce rur są uszczelnione zaślepkami. Następnie przeprowadzany jest zatwierdzony proces odkażania próbnika Bio-VOC i probówek TD w długim/wysokim cyklu cieplnym, aby upewnić się, że wirus został zabity. Odkażone probówki TD będą przechowywane w pudełkach do przechowywania w obszarze badawczym Leicester Royal Infirmary w celu transportu do University of Warwick w celu analizy i ostatecznej utylizacji, zgodnie z wcześniej określoną Umową o przekazaniu materiałów.

Wyniki analizy GC-IMS będą regularnie przesyłane z BreathSpecTM na współdzielony dysk DataSync i pobierane przez analityków z University of Warwick. Z tymi danymi nie będą powiązane żadne dane umożliwiające identyfikację, a jedynie numer badania.

Próbkowanie masek Pobieranie masek polega na tym, że uczestnicy noszą zmodyfikowaną maskę na twarz (płaską chirurgiczną, kaczy dziób lub FFP1), która zawiera do 5 pasków polialkoholu winylowego (PVA) wydrukowanego w 3D przez maksymalnie 60 minut, podczas obserwacji przez członka zespołu badawczego. Badacze zapewnią szkolenie, wsparcie i środki ochrony osobistej dla personelu badawczego pobierającego próbki i uzgodnią protokoły dotyczące lokalnego przetwarzania. Przed użyciem maski są sterylizowane i przechowywane w zapieczętowanych torebkach na próbki, po zużyciu są ponownie umieszczane w tych torebkach i zamykane. Zostaną przewiezione do Laboratorium Wirusologicznego UHL zgodnie z aktualnymi Ocenami Ryzyka i Standardowymi Procedurami Operacyjnymi dotyczącymi transportu materiałów niebezpiecznych. Wirusowe RNA zostanie wyekstrahowane i oznaczone ilościowo z pasków PVA w maskach za pomocą ilościowego PCR w czasie rzeczywistym. Obróbka pasków PVA wymaga rozpuszczenia ich w wodzie, z której ekstrahuje się wirusa RNA i analizuje metodami molekularnymi. Maseczki i torby zostaną zniszczone.

Badanie surowicy i sekwencjonowanie wirusa W każdy z zaplanowanych dni, w których wymagane jest pobranie próbek surowicy, skrzepnięta krew będzie przechowywana w temperaturze od 2oC do 8oC i odwirowana w ciągu 24 godzin w Przestrzeni Badawczej, LRI. Surowice będą przechowywane w kriofiolkach, przy czym wszystkie kriofiolki będą oznaczone numerem badania uczestnika, numerem wizyty i datą pobrania w Przestrzeni Badawczej, LRI. Do momentu wysyłki próbki będą przechowywane w stanie zamrożonym w temperaturze -80 oC. Jeden zestaw kriofiolek zostanie wysłany do laboratorium referencyjnego WHO w Melbourne po zebraniu wszystkich próbek. Drugi zestaw kriofiolek będzie przechowywany jako środek bezpieczeństwa na wypadek problemów z transportem. Za zgodą uczestnika wszelkie niewykorzystane próbki surowicy będą przechowywane do przyszłych etycznie zatwierdzonych badań i udostępniane innym współpracownikom naukowym w innych instytucjach akademickich i partnerom przemysłowym w Wielkiej Brytanii i poza nią w celu przyszłych badań. Surowica zostanie wykorzystana do testów hamowania hemaglutynacji i mikroneutralizacji, a po przetworzeniu wszystkich próbek wyniki zostaną odesłane do zespołu badawczego w Leicester.

Testy hamowania hemaglutynacji (HAI) i mikroneutralizacji (MN) wraz z sekwencjonowaniem wirusa grypy zostaną przeprowadzone w WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Influenza (VIDRL), Peter Doherty Institute for Infection and Immunity, 792 Elizabeth Street, Melbourne, VIC 3000, Australia.