Расширение нашего понимания ранней и поздней эффективности вакцин против гриппа (BELIEVE)

Набор, отбор и оценка приемлемости

С потенциальными участниками (университетскими больницами Лестера NHS Trust, персоналом UHL) свяжутся по электронной почте для рекламы и объяснения исследования. Электронное письмо будет частью обычных электронных писем о вакцинации против сезонного гриппа, которые рассылаются каждый год, чтобы напомнить сотрудникам UHL о необходимости вакцинации. Кроме того, следователи будут размещать рекламу с помощью плакатов в местах с интенсивным движением персонала, например. ресторан, а наша группа по гигиене труда поможет с этой рекламой исследования. Исследователи ожидают, что некоторые работники здравоохранения (HCW) узнают об исследовании из уст в уста.

Исследование будет состоять из двух этапов набора. В сентябре для группы «ранней» вакцинации и с середины ноября до середины декабря для группы «поздней» вакцинации — точные сроки могут варьироваться в зависимости от того, когда были получены инактивированные вакцины против гриппа, и от сезонности вируса. , так как весь набор будет завершен до начала сезона гриппа. Распределение по двум группам вакцинации не будет рандомизированным; Решение о том, хотят ли они сделать прививку рано или поздно, принимает медработник. В каждой группе будет набрано не более 200 медработников.

Лица, выразившие заинтересованность в участии в исследовании, получат информационный лист лично или по электронной почте. После этого исследователи дадут им столько времени, сколько им нужно, чтобы решить, участвовать или нет в исследовании. Если человек соглашается участвовать, член исследовательской группы проверит и подтвердит право на участие. Участники будут набраны только в том случае, если все критерии удовлетворены. В это время будут приняты меры для того, чтобы сотрудники посетили первоначальную встречу в Исследовательском пространстве в LRI. Набор в исследовательскую зону будет осуществляться в соответствии с текущими мерами социального дистанцирования, действующими в UHL.

На этом первоначальном приеме исследование будет объяснено сотрудникам в группах. Затем член исследовательской группы запросит письменное информированное согласие, как подробно описано ниже, от каждого медработника в отдельности. Если у человека есть дополнительные вопросы об исследовании, другому члену исследовательской группы будет разрешено поддержать и облегчить получение информированного согласия.

Набор стационарных пациентов Клиницисты в отделениях неотложной медицинской помощи будут уведомлены до начала сезона гриппа по электронной почте и плакатам в клинических отделениях об исследовании с участием стационарных пациентов с (гриппоподобным заболеванием) ГПЗ. Вирусологический отдел университетских больниц Лестера регулярно звонит в клиническую бригаду в случае выявления положительных случаев гриппа у стационарных пациентов в течение сезона гриппа. Когда клиническая группа затем идет, чтобы объяснить этот диагноз пациенту, они также информируют их об исследовании и предоставляют им информационный буклет для участников. После этого исследователи дадут пациенту столько времени, сколько им нужно, чтобы решить, участвовать или нет в исследовании. Если человек соглашается участвовать, он информирует члена клинической группы, который затем уведомляет исследовательскую группу. Член исследовательской группы посетит палату, чтобы проверить и подтвердить соответствие требованиям. Участники будут набраны только в том случае, если все критерии удовлетворены. Используя данные лабораторных исследований, двадцать стационарных пациентов с подтвержденными отрицательными мазками на грипп также будут набраны таким же образом, как и контрольная группа.

Учебные визиты

Следующие действия будут проводиться при каждом посещении и регистрироваться в ИРК:

Визит 1: базовый визит

• Участники будут зачислены при условии, что они соответствуют критериям включения и исключения и дадут полностью информированное письменное согласие.
• Затем участникам будет присвоен номер исследования.
• Участники заполнят короткую анкету, которая будет включать демографическую информацию: возраст, пол, этническая принадлежность, должность, сопутствующие заболевания, регулярно принимаемые лекарства, история курения, история инфекций гриппа и вакцина против гриппа.
• Соберите 10 мл свернувшейся крови перед иммунизацией для базовых антител. Обработка крови и хранение сыворотки для серологических анализов. Вакцина против гриппа будет вводиться в обычном режиме.
• Участникам выдадут термометр, два набора для самостоятельного взятия проб на грипп (т. е. мазок и пробирку с вирусной транспортной средой с пакетом для микробиологического образца) и две информационные формы, которые они должны будут заполнить в случае развития у них гриппоподобного заболевания ( ИЛИ). ГПЗ будет определяться в соответствии с определением случая ВОЗ как лихорадка> 37,8 ° C и кашель с началом в течение последних 10 дней. Им покажут, как пользоваться термометром, самостоятельно брать мазок (т. е. мазок из горла) и как закреплять тампон в пробирке для отбора проб. Им также покажут, как заполнять форму события ГПЗ (ILIef) - кратко записывая время и характер их симптомов/признаков ГПЗ.

Визит 2: через 3 недели после исходного визита (+ или - 7 дней)

• Соберите 10 мл свернувшейся крови для серологического исследования. Обработка крови и хранение сыворотки.
• Участников попросят предоставить образцы дыхания, это будет служить контролем, с которыми будут сравниваться образцы дыхания, полученные во время ГПЗ. Визит 3: Пик сезона гриппа, обычно с января по февраль (+ или - 30 дней)
• Соберите 10 мл свернувшейся крови для серологического исследования. Обработка крови и хранение сыворотки. Визит 4: конец сезона гриппа, обычно с апреля по май (+ или - 30 дней)
• Соберите 10 мл свернувшейся крови для серологического исследования. Обработка крови и хранение сыворотки. Визит для изучения события ГПЗ Участники исследования свяжутся с исследовательской группой по электронной почте или по телефону, чтобы предупредить их о том, что произошло событие ГПЗ, и договориться о том, чтобы член исследовательской группы забрал у них мазок и ГПЗ как можно скорее после того, как это произошло. взятых для соответствующего хранения (в морозильной камере -80oC) до испытаний. Если участники исследования находятся дома, когда у них разовьется ГПЗ, их попросят заполнить самостоятельный мазок и ILef. Тампон будет упакован в двойной пакет и собран членом исследовательской группы в соответствии с инструкциями по транспортировке, изданными в правительственном руководстве по COVID-19: безопасное обращение и обработка образцов в лабораториях в соответствии с UN3373, инструкции по упаковке 650. Мазки будут доставлены в вирусологическую лабораторию UHL и обработаны в соответствии со стандартными операционными процедурами (см. раздел 8.7.1).

Участникам исследования будет вновь сообщено, что результаты этих мазков будут отправлены им по электронной почте и по телефону вместе с последними рекомендациями по охране труда. Им будет рекомендовано следовать политике гигиены труда в отношении ГПЗ в ожидании результатов мазка, сообщать о болезни в обычном порядке и обращаться к своему врачу общей практики, если требуется дополнительная медицинская консультация относительно текущего периода болезни.

Содержимое ILIef будет внесено в форму отчета об участниках (CRF), личная информация не будет включена. Эти данные будут использованы при интерпретации результатов секвенирования вируса и титров антител, проведенных ВОЗ в Мельбурне.

Если участник исследования находится на работе, когда у него разовьется ГПЗ, его попросят предоставить образец дыхания и образец маски для обнаружения гриппа с использованием новых методов перед уходом с работы. Материалы для отбора проб будут доставлены туда, где находится медработник, но если это не может быть сделано немедленно, медработнику будет предложено следовать рекомендациям по охране труда и вернуться домой. Образцы, собранные в ходе этих процессов, подробно описаны в разделе 8.7.

Образец дыхания стационарного пациента К стационарным пациентам будут обращаться в соответствии с обычной политикой инфекционного контроля UHL. Будут обращаться только к пациентам, у которых есть результаты недавнего мазка из горла, проверенного на распространенные респираторные патогены. Отделения с положительным результатом на COVID-19 не будут привлекаться к набору, вместо этого стационарные пациенты с гриппом и другими респираторными вирусами будут набираться из отделений с отрицательным результатом на COVID-19. Пациенты с подтвержденным положительным результатом на грипп обычно находятся в боковых палатах в соответствии с политикой. Во всех случаях пациенту не требуется контактировать с оборудованием для анализа, поскольку процессы захвата дыхания и анализа разделены. Отбор проб через маску не будет проводиться у пациентов, которым требуется оксигенотерапия через лицевую маску. После согласия на исследование один из членов исследовательской группы подойдет к пациенту с масками, шприцами и мундштуками, необходимыми для сбора образцов дыхания. В это время также будет взят повторный мазок из горла, чтобы можно было провести точное сравнение между новыми методами диагностики и текущей практикой. Там, где это возможно, будут использоваться все три метода отбора проб дыхания. После того, как образцы будут собраны, они будут помещены в мешок биологической опасности и доставлены в машины для анализа. Образцы мазков и масок будут доставлены в вирусологическую лабораторию Королевского лазарета Лестера для обработки. Оборудование для захвата дыхания (шприцы и одноразовые мундштуки) будет утилизировано как обычные медицинские отходы. Пробирки TD и пробоотборник Bio-VOC будут упакованы в двойные пакеты и продезинфицированы. Это единственный исследовательский визит, который требуется стационарным пациентам, и дальнейшее наблюдение не требуется.

Самостоятельное взятие мазков Тампоны будут доставлены в отделение клинической микробиологии университетских больниц Лестера NHS Trust, где с ними будут обращаться в условиях категории 2 (BSL-2). Они будут встряхиваться, а мазки выбрасываются, оставляя инокулированную вирусную транспортную среду (VTM). Пробирки VTM будут протестированы с помощью стандартного диагностического анализа (обычно используемого для тестирования пациентов в больницах) на наличие гриппа (поскольку многие различные респираторные вирусы могут вызывать «гриппоподобное заболевание»). В случае выявления гриппа аликвоту этой ВТМ вместе с образцами сыворотки отправят в ВОЗ в Мельбурне для секвенирования вируса гриппа. VTM будет доставлен в лабораторию ВОЗ в соответствии с правилами UN3733/категории B.

Анализ выдыхаемого воздуха ЛОС Все три платформы анализа будут использовать один и тот же базовый подход к сбору данных. Участников попросят ничего не есть и не пить как минимум за 30 минут до взятия пробы дыхания. Перед отбором проб прополощите рот водой, которую они затем могут проглотить, а затем сделайте три нефорсированных пробы дыхания, выдыхая в одноразовые мундштуки в течение 3-5 секунд. Исследователи будут носить СИЗ в соответствии с местной политикой доверия в UHL для сбора мазков из носа и полости рта. Для всех процедур будут использоваться одноразовые медицинские перчатки. Аналитические устройства будут храниться в палате или в исследовательской зоне вдали от прямого контакта с пациентом.

Для анализа методом ГХ-ИМС мундштук прикрепляют к пластиковой трубке длиной 10 см. Когда пациент выдыхает в трубку, исследователь набирает образец дыхания в шприц объемом 5 мл на полпути вниз по трубке.

Затем исследователь вводит образец из шприца в устройство BreathSpecTM GC-IMS для анализа. Любой инфекционный материал, содержащийся в образце, будет уничтожен нагреванием до температуры выше 60°C в рамках аналитического процесса.

В eNose используется коммерческий блок захвата дыхания Markes Bio-VOC с маркировкой CE. Устройство вмещает 129 мл дыхания, поставляется запечатанным и открывается только тогда, когда готово к использованию, и является одноразовым. Пользователь устанавливает картонный мундштук на устройство перед отбором проб. После того, как пациент вдохнул в устройство, мундштук удаляется и добавляется штуцер для шприца, который соединяется с eNose. Затем шприц нажимают и анализируют образец. Время анализа менее 5 минут. Аппарат eNose будет обеззараживаться в конце каждого дня использования в соответствии с рекомендациями производителя.

Для анализа ГХ-МС снова берется еще одна проба выдыхаемого воздуха с использованием устройства Markes Bio-VOC, как указано выше. После того, как образец собран, его переносят в пробирку для термодесорбции (ТД) (обычно 89 мм x 6,4 мм). Внутренние стенки трубки покрыты абсорбирующим слоем, к которому прилипают выдыхаемые химические вещества. Трубка TD помещается в конец установки Bio-VOC, и захваченный воздух пропускается через трубку. После завершения концы трубок закрывают заглушками. Затем для пробоотборника Bio-VOC и пробирок TD проводится валидированный процесс обеззараживания с помощью длительного/высокотемпературного цикла, чтобы гарантировать уничтожение вируса. Деконтаминированные пробирки TD будут храниться в ящиках для хранения в исследовательской зоне Королевского лазарета Лестера для транспортировки в Уорикский университет для анализа и окончательной утилизации в соответствии с заранее определенным соглашением о передаче материалов.

Результаты анализа GC-IMS будут регулярно загружаться из BreathSpecTM на общий диск DataSync и загружаться аналитиками Уорикского университета. Никакие идентифицируемые данные не будут связаны с этими данными, только номер исследования.

Отбор образцов масок Отбор образцов масок состоит из участников, которые носят модифицированную маску для лица (плоскую хирургическую, утконосую или FFP1), которая содержит до 5 полосок поливинилового спирта (ПВА), напечатанных на 3D-принтере, на срок до 60 минут под наблюдением члена исследовательской группы. Исследователи проведут обучение, поддержку и средства индивидуальной защиты для исследовательского персонала, получающего образцы, и согласуют протоколы обработки на месте. Перед использованием маски стерилизуют и хранят в запечатанных пакетах для образцов, после ношения их снова помещают в эти пакеты и запечатывают. Они будут доставлены в вирусологическую лабораторию UHL в соответствии с текущими оценками рисков и стандартными операционными процедурами, касающимися перевозки опасных материалов. Вирусная РНК будет извлечена и количественно определена из полосок ПВА в масках с использованием количественной ПЦР в реальном времени. Обработка полосок ПВА требует их растворения в воде, из которой извлекается РНК-вирус и анализируется с помощью молекулярных методов. Маски и сумки будут уничтожены.

Тестирование сыворотки и секвенирование вируса В каждый из запланированных дней, когда требуются образцы сыворотки, свернувшаяся кровь будет храниться при температуре от 2°C до 8°C и центрифугироваться в течение 24 часов в Research Space, LRI. Сыворотки будут храниться в криопробирках, причем все криопробирки будут помечены номером исследования участника, номером посещения и датой сбора в Исследовательском пространстве, LRI. Образцы будут храниться в замороженном виде при температуре -80 oC до отправки. Один набор криопробирок будет отправлен в справочную лабораторию ВОЗ в Мельбурне после того, как будут собраны все образцы. Другой набор криопробирок будет храниться в качестве меры безопасности на случай проблем с транспортировкой. С согласия участников любые неиспользованные образцы сыворотки будут храниться для будущих исследований, одобренных с этической точки зрения, и передаваться другим исследователям в других академических учреждениях и отраслевым партнерам внутри и за пределами Великобритании для будущих исследований. Сыворотка будет использоваться для тестов ингибирования гемагглютинации и микронейтрализации, и как только все образцы будут обработаны, результаты будут отправлены обратно исследовательской группе в Лестере.

Анализы ингибирования гемагглютинации (HAI) и микронейтрализации (MN) вместе с секвенированием вируса гриппа будут проводиться в Сотрудничающем центре ВОЗ по справочным материалам и исследованиям гриппа (VIDRL), Институт инфекций и иммунитета Питера Доэрти, 792 Elizabeth Street, Мельбурн, Виктория. 3000, Австралия.