功能性便秘患者龙舌兰龙舌兰酒 Weber Azul 与车前子补充剂的评价 (SATWAVPP)

这是一项前瞻性、随机、对照和单盲研究，旨在确定功能性便秘受试者摄入蓝色龙舌兰果聚糖 Tequilana Weber 的 III 期疗效。

为了实现这一点，计划包括 18 岁以上的患者年龄满足 WHO 以及功能性便秘的罗马 III 标准的纳入标准。 （见下表）。

我们研究的阶段是根据《研究健康总法》第二章“药理学研究”第 66 条指定的，该法定义了 PHASE III 研究如下：患者（通常是外部的），定义 ITS 的治疗效用和识别识别可能改变药理作用的不良反应、相互作用和外部因素。

该研究所的患者将在受邀参与为便秘患者制定协议后被召集。 尚未注册但符合纳入标准的患者也可以参加。

将对要进行的研究进行解释和阅读，并在适当的情况下，患者将签署知情同意书。一个他们满足以确定功能性便秘 (FC) 的 ROME III 标准，另一个评估如果患者不符合 ROME III 肠综合征 (IBS) 的标准，将进行基线呼吸测试。

此外，将评估之前使用的纤维补充剂和泻药（必须在随机化前至少暂停 2 个月）。

受试者将返回第二次访问（访问 2）（这将取决于患者是否正在服用泻药或纤维补充剂）以进行完整的身体评估，并且将评估纤维摄入量日记以确定饮食中的纤维摄入量以及疏散日记和 SmartPill © 将被提供，这样，患者将在胶囊疏散后返回医院登记数据。

患者将在一周后（访问 3）禁食 12 小时返回，将重新评估纤维摄入量和排空日记，并将由营养师再次评估。 将进行新的呼气测试。 受试者将被要求完成 SF-36 生活质量问卷。 除血液样本外，还将收集粪便样本用于 ITS 分析，以确定空腹血糖、糖化血红蛋白 A1c、胰岛素和全脂谱。

受试者将随机接受四种治疗中的一种，可以是洋车前子 15 克，蓝色龙舌兰威伯果聚糖 5、10 克，蓝色龙舌兰威伯果聚糖 5 克 + 10 克赋形剂，浓度为 33 % 的蓝色龙舌兰果聚糖 Tequilana Weber。

随机化将由计算机生成，并带有一个参与编号，并且治疗的分配将是连续的。

产品将装在相同的瓶子中，容器中装有相同数量的粉末，只能通过协议名称和患者编号进行识别。

将为患者提供一个量匙，用于管理每次剂量所需的产品量（分别为 5、10 和 15 克），或提供装有准确称重量的信封。

将指示患者记录饮食、疏散和评估不良反应的表格。 受试者将在月末±5 天禁食 12 小时后返回（访问 4），他们的依从性将通过容器中的产品重量减去根据治疗分配每天所需的克数来评估。

纤维摄入日记将由营养师再次评估，疏散也将被评估日记。 将进行医学评估，包括询问和身体评估。 随后，将采集血样以确定空腹血糖、糖化血红蛋白 A1c、胰岛素和血脂谱，并采集完整的粪便样本并给予 SmartPill®。

患者将继续使用同一容器中的补充剂，并安排在一个月后服用。 在治疗结束访视（访视 5）中，纤维将由营养师再次评估日志消耗，并且疏散也将被评估日志。

将进行医学评估，包括询问和身体评估，他们的依从性将通过称重容器中的产品，减去根据治疗任务或空信封的患者交付每天需要的克数来评估用过的。

随后，将采集血样以确定空腹血糖、糖化血红蛋白 A1c、胰岛素和血脂谱，并采集完整样本收集粪便，最后进行呼气测试。

对于将在停止治疗后一个月进行的访问结束，将评估疏散日记并收集粪便样本，并随之结束研究部分的干预。 总计 每个患者的随访时间为 3 个月，有足够的时间观察和比较所用纤维的效果。 值得一提的是，在最近由同一个团队使用蓝色龙舌兰龙舌兰韦伯果聚糖进行的研究中，从摄入的第一周就观察到了对肠道转运的影响，事实上，这是将研究重点放在功能性便秘和肠道转运。

呼吸测试：

将进行呼吸测试，以测量在访视 1 和 5 中随机分配的患者先前呼出的氢气和甲烷浓度。

为了进行呼气测试，将使用品牌 Quintron® Breath-tracker 的气相色谱设备。

为此，将询问患者：

• 前几周不要服用抗生素 至少要进行测试。
• 测试前 24 小时停止摄入富含纤维和淀粉的食物。
• 不要喝酒或抽烟
• 至少禁食 8 小时
• 在开始测试之前和进行测量期间执行口腔卫生。

该测试持续 3 小时，期间患者不能离开实验室设施活动，不能过多说话或睡觉。 在此期间，每 15 分钟采集一次呼出空气样本。

SmartPill®：

SmartPill® 测试将在访问 2 和 4 时进行。

结肠镜检查：

是一种工具，将对 ≥ 55 岁的新诊断便秘患者或在该年龄组观察到排便习惯改变的患者进行详细检查。 这个基本目标是排除潜在的严重疾病，而不是在研究期间延误这些疾病的诊断。 一项结肠镜检查研究将使用所有患有便秘且具有以下任何特征的患者：

1. 便秘诊断不到 1 年
2. 在研究进入前的最后 3 年中未进行结肠镜评估的≥55 岁的受试者
3. 慢性但有警报数据（：不明原因的体重减轻，近期经直肠出血 <6 个月，近期排便模式改变示例）便秘

患者包括：

纤维补充剂（洋车前子、李子8）的研究每组包括 25 至 30 名患者，以发现组间差异。

总共计划将 60 名患者随机分组如下：15 名患者接受 5 克果聚糖蓝色龙舌兰韦伯剂量，15 名患者接受 10 克剂量，15 名患者接受 5 克龙舌兰果聚糖蓝色龙舌兰韦伯剂量 + 10 g 赋形剂和 15 名患者接受 15 g 车前子。

气相色谱：（短链脂肪酸AGCC的测定）

将使用用于确定离子检测器火焰的 AGCC。 执行以下步骤：

1. 将 50 uL 丁酸乙酯添加到 1 g 粪便中
2. 加入 1 mL 盐酸。
3. 以 3000 g 离心 10 分钟。 去除上清液。
4. 随后添加300uL N-甲基二丁基硅烷三氟乙酰胺(MTBSTFA)。
5. 溶液在 80°C 下加热 20 分钟。
6. 室温静置24小时，保证乳酸完全衍生化。
7. 根据为特定样品开发的方法，通过气相色谱法分析样品。

从粪便中提取 DNA、PCR 扩增和细菌 16S rRNA 测序：

RRNA 测序是确定高分类关系（性别上层）的首选方法。 由于 16S rRNA 分子包含高度可变的区域，因此通常可以找到 20 到 30 个碱基的区域，这些区域对于单一细菌物种是完全独特的。

为了进行分析，将粪便样本收集在无菌塑料容器中。 采集后立即将标本用2～8号冰桶运至实验室，然后-73℃冷冻待处理。

DNA 提取是按照自动化方法 NucliSENS® easyMAG®（BioMerieux，Durham，NC，USA）的说明进行的，在自动化过程之前进行了简短的初始修改。 在 0.3 mL 磷酸盐缓冲盐溶液（8 ​​mM Na2HPO4、137 mM NaCl、2.7 mM KCl、1.5 mM KH2PO4 和）中称重并悬浮每个样品的 200 mg 粪便，剧烈搅拌 30 秒。将 100 μl 悬浮液置于沸腾 15 分钟并立即在 0°C 冰上冷冻。 将细菌匀浆以 13,000 g 离心 10 分钟，并将上清液收集在 500 μl 试管中。

该标本将用于在自动化设备上分离 DNA。 PCR 扩增实时 16S rRNA 细菌如先前的报告所述使用 Light Cycler-(Roche) 设备进行。

主要类别中细菌门的定量描述：1) 厚壁菌门，2) 拟杆菌门，3) 放线菌门，4) 变形菌门。 它将使用先前描述的引物和条件通过实时定量 PCR 的方法进行，pR 扩增描述的细菌 16S rRNA 种群的特定片段。 我们将使用称为条形码 967 F (CNACGCGAAGAACCTTANC) 和 1046R (CGACAGCCATGCANCACCT) 的引物来扩增细菌 V6 的 16S rRNA 片段 V6。

扩增片段的测序分析采用荧光测序仪terminator 3130/基因分析仪(Applied Biosystems)。

PCR产物经测序分析后将提交GenBank进行物种鉴定。

提取细菌 DNA 和定量细菌种类用于证明龙舌兰纤维的益生元作用，因为双歧杆菌和乳酸杆菌种群的选择性生长以及粪便中短链脂肪酸的出现是预期的。

因此，除了功能特性及其对便秘的影响外，您还可以检查龙舌兰果聚糖的益生元作用。