Evaluación de un Suplemento de Agave Tequilana Weber Azul vs Psyllium Plantago en Pacientes con Constipación Funcional (SATWAVPP)

Se trata de un estudio prospectivo, aleatorizado, controlado y simple ciego para determinar la eficacia fase III de la ingesta de fructanos de agave azul Tequilana Weber en sujetos con estreñimiento funcional.

Para lograrlo, se prevé incluir a pacientes mayores de 18 años que cumplan con los criterios de inclusión de la OMS y los criterios de Roma III para el estreñimiento funcional. (Vea la tabla de abajo).

La fase de nuestro estudio se designa con base en el artículo 66 del capítulo II “De la Investigación Farmacológica” del Reglamento de la Ley General de Salud en Investigación Que define la FASE III de los estudios Sigue como: Es la administración de un medicamento en investigación a grandes grupos de Pacientes (generalmente externos), para definir su utilidad terapéutica e identificar reacciones adversas, interacciones y factores externos que puedan alterar el efecto farmacológico.

Los pacientes del instituto serán convocados previa invitación a Participar en la Colocación de un protocolo para Pacientes Con estreñimiento. También podrán participar los pacientes que no hayan sido registrados y cumplan con los criterios de inclusión.

Se explicará y leerá el estudio a realizar y, en su caso, se firmará el consentimiento informado por parte del Paciente Durante la visita inicial (Visita 1) de elegibilidad, donde se le entregarán al sujeto 2 cuestionarios (ver anexos), uno Cumplen para determinar si cumple criterios ROME III de estreñimiento funcional (FC) y otro para VALORAR si el paciente no cumple criterios de síndrome de intestino irritable ROME III (SII) y se le realizará una prueba de aliento basal.

Además, se EVALUARÁ el uso previo de suplementos de fibra y laxantes, que deberá suspenderse al menos 2 meses antes de la aleatorización.

El sujeto volverá a una segunda visita (Visita 2) (que dependerá de si el paciente está tomando laxantes o suplementos de fibra) para una evaluación física completa y se evaluará el diario de ingesta de fibra para determinar la cantidad de ingesta de fibra en la dieta. así como se le entregará el diario de evacuaciones y la SmartPill© y de esa forma el paciente regresará al hospital para registrar los datos luego de haber evacuado la cápsula.

El paciente regresará a la semana (Visita 3) en ayuno de 12 horas, se volverá a EVALUAR la ingesta de fibra y los diarios de evacuación y serán nuevamente EVALUADOS por un nutricionista. Se realizará una nueva prueba de aliento. Se le pedirá al sujeto que complete el Cuestionario de calidad de vida SF-36. Se recolectará una muestra de heces para el análisis de ITS, además de una muestra de sangre para determinar la glucosa en ayunas, la hemoglobina glicosilada A1c, la insulina y el perfil lipídico completo.

Los sujetos serán aleatorizados para recibir uno de cuatro tratamientos que pueden ser Psyllium plantago 15g, agave azul Tequilana Weber fructanos a dosis de 5, 10g y agave azul Tequilana Weber fructanos a dosis de 5 g + 10 g de excipiente para una concentración de 33 % de fructanos de agave azul Tequilana Weber.

La aleatorización será generada por computadora con un número de participación y la asignación del tratamiento será consecutiva.

El producto se suministrará en frascos idénticos con la misma cantidad de polvo en un envase que únicamente será identificable con el nombre del protocolo así como el número del paciente.

Se le proporcionará al paciente una cuchara dosificadora para administrar la cantidad de producto necesaria para cada una de las dosis (5, 10 y 15g respectivamente) o sobres con las cantidades exactas pesadas.

Se le indicará al paciente que lleve un diario de la dieta, de las evacuaciones y una hoja para EVALUAR efectos adversos. El sujeto regresará (Visita 4) al cabo de un mes ± 5 días en ayuno de 12 horas y se Evaluará su adherencia por el peso del producto en el envase restando los gramos diarios requeridos SEGÚN la asignación del tratamiento.

Los diarios de ingesta de fibra serán nuevamente EVALUADOS por el nutricionista, el diario de evacuación también será EVALUADO. Se realizará una evaluación médica que incluye interrogatorio y evaluación física. Posteriormente, se tomará una muestra de sangre para determinar la glucosa en ayunas obtenida, la hemoglobina glicosilada A1c, la insulina y el perfil lipídico y se obtendrá una muestra completa de heces y se administrará SmartPill®.

El paciente seguirá con el complemento en el mismo envase y se programará para un mes después. En la visita de fin de tratamiento (visita 5), ​​se EVALUARA diario el consumo de fibra nuevamente por un nutricionista y también se EVALUARA diario la evacuación.

Se realizará una valoración médica que incluye interrogatorio y evaluación física y se valorará su adherencia pesando el producto en el envase, restando el número de gramos que requiere diariamente SEGÚN la asignación del tratamiento o entrega por parte del paciente de los sobres vacíos. usado.

Posteriormente se tomará una muestra de sangre para determinar glucosa en ayunas obtenida, hemoglobina glicosilada A1c, insulina y perfil lipídico y se tomará muestra completa de heces y al finalizar se realizará prueba de aliento.

Para finalizar la visita, que se realizará un mes después de finalizar el tratamiento, se EVALUARÁ diariamente la evacuación y se tomará una muestra de heces y con ella finalizará la intervención en la parte del estudio. Total La duración del seguimiento de cada paciente será de 3 meses, tiempo suficiente para observar y comparar el efecto de las fibras a utilizar. Es importante mencionar que en estudios recientes realizados por el mismo equipo y con fructanos de agave azul Tequilana Weber, se han observado efectos en el tránsito intestinal desde la primera semana de ingesta, de hecho esta es una de las razones para enfocar el estudio. estreñimiento funcional y tránsito intestinal.

Test de respiración:

Se realizará una prueba de aliento para medir las concentraciones de hidrógeno y metano previamente exhaladas en pacientes aleatorizados en las visitas 1 y 5.

Para la realización de la prueba de aliento se utilizará un equipo de cromatografía de gases, marca Quintron® Breath-tracker.

Para eso, se les preguntará a los pacientes:

• No tomar antibióticos semanas previas Al menos a la prueba.
• Suspender la ingesta de alimentos ricos en fibras y almidones 24 h antes de la prueba.
• No tomar alcohol, ni fumar.
• Tener un mínimo de 8 horas de ayuno.
• Realizar higiene bucal antes de iniciar la prueba y durante la realización de las mediciones.

Esta prueba tiene una duración de 3 horas, durante las cuales el paciente no puede salir de las instalaciones del laboratorio con movilidad, no puede hablar demasiado ni dormir. Las muestras de aire exhalado se toman cada 15 minutos durante este período.

SmartPill®:

La prueba SmartPill® se realizará en las visitas 2 y 4.

Colonoscopia:

Es una herramienta que será objeto de escrutinio de pacientes ≥ 55 años con estreñimiento de nuevo diagnóstico o aquellos en los que se observen cambios en los hábitos intestinales en este grupo de edad. Este objetivo fundamental, descartar enfermedades potencialmente graves y no retrasar el diagnóstico de estas durante el estudio de investigación. Se utilizará un estudio colonoscópico a todos los pacientes que presenten estreñimiento y alguna de las siguientes características:

1. Diagnóstico de estreñimiento menor de 1 año
2. Sujetos ≥55 años que no hayan tenido una evaluación colonoscópica en los últimos 3 años antes del ingreso al estudio
3. Crónico pero con datos de alarma (: pérdida de peso inexplicable, sangrado transrectal reciente <6 meses, cambios recientes en el patrón defecatorio ejemplo) Estreñimiento

Los pacientes incluyen:

Estudios con suplementos de fibra (Psyllium, Ciruelas8) Se han incluido de 25 a 30 pacientes por grupo para encontrar diferencias entre grupos.

En total se planea incluir 60 pacientes aleatorizados de la siguiente manera: 15 pacientes reciben dosis de 5 g de fructanos de agave azul Tequilana Weber, 15 pacientes reciben la dosis de 10 g, 15 pacientes reciben la dosis de 5 g de agave azul de fructanos Tequilana Weber + 10 g de excipiente y 15 pacientes recibieron 15 g de plantago psyllium.

Cromatografía de gases: (determinación de AGCC de ácidos grasos de cadena corta)

Se utilizará AGCC para determinar la llama del detector de iones. Se realizan los siguientes pasos:

1. Se añaden 50 uL de butirato de etilo a 1 g de heces.
2. Se añadió 1 mL de ácido clorhídrico.
3. Se centrifuga a 3000 g durante 10 minutos. Se eliminó el sobrenadante.
4. Posteriormente se adiciona 300 uL de N-Metil dibutil sililtrifluoroacetamida (MTBSTFA).
5. solución a 80 ° C durante 20 min calentamiento.
6. Se dejó reposar a temperatura ambiente durante 24 horas para asegurar la derivatización completa del ácido láctico.
7. Se realizará el análisis de muestras por cromatografía de gases de acuerdo con el método desarrollado para muestras específicas.

Extracción de ADN de heces, amplificación por PCR y secuenciación de ARNr 16S bacteriano:

La secuenciación de RRNA es el método de elección para determinar relaciones taxonómicas altas (nivel de género superior). Debido a que la molécula de ARNr 16S contiene regiones muy variables, generalmente es posible encontrar regiones de 20 a 30 bases que son completamente únicas para una sola especie de bacteria.

Para realizar el análisis, se recogerán muestras fecales en recipientes de plástico estériles. Inmediatamente después de la recolección, las muestras serán transportadas al laboratorio en hieleras 2 a 8 y luego congeladas a -73 °C hasta su procesamiento.

La extracción de ADN se realizó siguiendo las instrucciones del método automatizado NucliSENS® easyMAG® (BioMerieux, Durham, NC, EE. UU.) con una breve modificación inicial antes del proceso automatizado. Se pesa y suspende 200 mg de materia fecal de cada muestra en 0,3 mL de solución salina tamponada con fosfato-(Na2HPO4 8 mM, NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, KH2PO4 1,5 mM y) agitación vigorosa durante 30 segundos. 100 μl de la suspensión se colocaron en ebullición 15 min e inmediatamente se congelaron a 0°C en hielo. El homogeneizado bacteriano se centrifugó a 13.000 g durante 10 min y el sobrenadante se recogerá en tubos de 500 μl.

Esta muestra se utilizará para el aislamiento de ADN en equipos automatizados. La amplificación por PCR en tiempo real de 16S rRNA bacteriano se llevará a cabo como se describe en informes anteriores utilizando un equipo Light Cycler-(Roche).

Cuantificación de filos bacterianos en las principales categorías descritas: 1) Firmicutes, 2) Bacteroidetes, 3) Actinobacterias, 4) Proteobacterias. Se llevará a cabo mediante el método de PCR cuantitativa en tiempo real utilizando los cebadores y las condiciones descritas anteriormente, amplificando pR fragmentos específicos de los grupos poblacionales 16S rRNA bacterianos descritos. Usaremos cebadores llamados código de barras 967 F (CNACGCGAAGAACCTTANC) y 1046R (CGACAGCCATGCANCACCT) para amplificar los fragmentos 16S rRNA V6 bacteriano.

La secuenciación y el análisis de los fragmentos amplificados se realiza mediante un equipo de secuenciación fluorescente terminador 3130/analizador genético (Applied Biosystems).

Los productos de PCR se secuenciaron y analizaron y se enviarán a GenBank para la identificación de especies.

Extracción de ADN bacteriano y cuantificación de especies bacterianas utilizadas para demostrar el efecto prebiótico de la fibra de agave, ya que se espera un crecimiento selectivo de la población de bifidobacterias y lactobacilos y la aparición de ácidos grasos de cadena corta en heces.

Así además de las propiedades funcionales y sus efectos sobre el estreñimiento, se podrá comprobar el efecto prebiótico de los fructanos del agave.