Valutazione di un supplemento di Agave Tequilana Weber Azul vs Psyllium Plantago in pazienti con costipazione funzionale (SATWAVPP)

Questo è uno studio prospettico, randomizzato, controllato e in singolo cieco per determinare l'efficacia di fase III dell'assunzione di fruttani di agave blu Tequilana Weber in soggetti con costipazione funzionale.

Per raggiungere questo obiettivo, si prevede di includere oltre 18 anni di età dei pazienti Soddisfare i criteri dell'OMS e di inclusione I criteri di Roma III per la costipazione funzionale. (Vedi tabella sotto).

La fase del nostro studio è designata sulla base dell'articolo 66 del capitolo II "Sulla ricerca farmacologica" del regolamento della legge generale sulla salute nella ricerca che definisce gli studi di FASE III Segue come: È la somministrazione di un farmaco di ricerca a grandi gruppi di I pazienti (solitamente esterni), per definire l'utilità terapeutica e l'identificazione dell'ITS, identificano reazioni avverse, interazioni e fattori esterni che possono alterare l'effetto farmacologico.

I pazienti dell'istituto saranno chiamati dopo gli inviti a partecipare all'inserimento di un protocollo per i pazienti con stitichezza. Possono partecipare anche i pazienti che non sono stati registrati e soddisfano i criteri di inclusione.

Lo studio da effettuare sarà spiegato e letto e, se del caso, il consenso informato sarà firmato dal paziente durante la visita iniziale (Visita 1) di idoneità, dove al soggetto verranno consegnati 2 questionari (vedi allegati), uno Si incontrano per determinare se i criteri ROME III per la costipazione funzionale (FC) e un altro per VALUTARE se il paziente non soddisfa i criteri per la sindrome dell'intestino irritabile ROME III (IBS) e verrà eseguito un test del respiro di base.

Inoltre, sarà VALUTATO il precedente uso di integratori di fibre e lassativi, che devono essere sospesi almeno 2 mesi prima della randomizzazione.

Il soggetto tornerà a una seconda visita (Visita 2) (che dipenderà dal fatto che il paziente stia assumendo lassativi o integratori di fibre) per una valutazione fisica completa e verrà valutato il diario dell'assunzione di fibre per determinare la quantità di assunzione di fibre nella dieta così come il diario delle evacuazioni e la SmartPill © saranno consegnati e in questo modo il paziente tornerà in ospedale per registrare i dati dopo che la capsula è stata evacuata.

Il paziente tornerà una settimana dopo (Visita 3) con un digiuno di 12 ore, l'assunzione di fibre e i diari di evacuazione saranno RIVALUTATI e saranno VALUTATI nuovamente da un nutrizionista. Verrà effettuato un nuovo test del respiro. Al soggetto verrà chiesto di completare il questionario sulla qualità della vita SF-36. Verrà raccolto un campione di feci per l'analisi ITS in aggiunta a un campione di sangue per la determinazione del glucosio a digiuno, dell'emoglobina glicosilata A1c, dell'insulina e del profilo lipidico completo.

I soggetti saranno randomizzati per ricevere uno dei quattro trattamenti che possono essere Psyllium plantago 15g, blue agave Tequilana Weber fructans alle dosi di 5, 10g e blue agave Tequilana Weber fructans alla dose di 5 g + 10 g di eccipiente per una concentrazione di 33 % di fruttani di agave blu Tequilana Weber.

La randomizzazione sarà generata dal computer con un numero di partecipazione e l'assegnazione del trattamento sarà consecutiva.

Il prodotto verrà fornito in flaconi identici con la stessa quantità di polvere in un contenitore che sarà identificabile solo con il nome del protocollo e il numero del paziente.

Al paziente verrà fornito un misurino per somministrare la quantità di prodotto necessaria per ciascuna delle dosi (rispettivamente 5, 10 e 15 g) o buste contenenti le esatte quantità pesate.

Il paziente sarà istruito a tenere un diario della dieta, delle evacuazioni e un foglio per VALUTARE gli effetti avversi. Il soggetto tornerà (Visita 4) alla fine di un mese ± 5 giorni a digiuno di 12 ore e la loro aderenza sarà valutata in base al peso del prodotto nel contenitore sottraendo il numero di grammi richiesti giornalmente SECONDO l'assegnazione del trattamento.

I diari di assunzione di fibre saranno VALUTATI nuovamente dal nutrizionista, anche l'evacuazione sarà diario VALUTATO. Verrà effettuata una valutazione medica che include interrogatorio e valutazione fisica. Successivamente, verrà prelevato un campione di sangue per determinare la glicemia a digiuno ottenuta, l'emoglobina glicosilata A1c, l'insulina e il profilo lipidico e verrà prelevato un campione completo di escrementi e verrà somministrato SmartPill®.

Il paziente continuerà con il supplemento nello stesso contenitore e sarà programmato per un mese dopo. Nella visita di fine trattamento (visita 5), ​​la fibra sarà VALUTATA di nuovo il consumo da un nutrizionista e anche l'evacuazione sarà VALUTATA diario.

Verrà effettuata una valutazione medica che comprende l'interrogatorio e la valutazione fisica e la loro aderenza sarà valutata pesando il prodotto nel contenitore, sottraendo il numero di grammi che richiede giornalmente SECONDO l'assegnazione del trattamento o la consegna da parte del paziente delle buste vuote usato.

Successivamente, verrà effettuato un prelievo di sangue per determinare la glicemia a digiuno ottenuta, l'emoglobina glicosilata A1c, l'insulina e il profilo lipidico e verrà raccolto un campione completo delle feci e al termine verrà effettuato il test del respiro.

Al termine della visita, che verrà effettuata un mese dopo l'interruzione del trattamento, verrà VALUTATA diariamente l'evacuazione e verrà prelevato un campione di feci e con esso terminerà l'intervento nella parte dello studio. Totale La durata del follow-up per ciascun paziente sarà di 3 mesi, tempo sufficiente per osservare e confrontare l'effetto delle fibre da utilizzare. È importante menzionare che in studi recenti condotti dallo stesso team e con agave blu Tequilana Weber fructans, sono stati osservati effetti sul transito intestinale dalla prima settimana di assunzione, infatti questo è uno dei motivi per focalizzare lo studio su costipazione funzionale e transito intestinale.

Test del respiro:

Verrà eseguito un test del respiro per misurare le concentrazioni di idrogeno e metano precedentemente espirate nei pazienti randomizzati nelle visite 1 e 5.

Per l'esecuzione del breath test verrà utilizzata un'apparecchiatura gascromatografica, marca Quintron® Breath-tracker.

Per questo, ai pazienti verrà chiesto:

• Non prendere antibiotici settimane precedenti Almeno al test.
• Interrompere l'assunzione di alimenti ricchi di fibre e amidi 24 h prima del test.
• Non prendere alcool, o fumare
• Avere un minimo di 8 ore di digiuno
• Eseguire l'igiene orale prima di iniziare il test e durante l'esecuzione delle misurazioni.

Questo test dura 3 ore, durante le quali il paziente non può lasciare le strutture del laboratorio di motilità, non può parlare troppo o dormire. I campioni di aria espirata vengono prelevati ogni 15 minuti durante questo periodo.

SmartPill®:

Il test SmartPill® sarà condotto nelle visite 2 e 4.

Colonscopia:

È uno strumento che sarà oggetto di esame dei pazienti ≥55 anni con costipazione di nuova diagnosi o quelli in cui sono stati osservati cambiamenti nelle abitudini intestinali in questa fascia di età. Questo obiettivo fondamentale, escludere malattie potenzialmente gravi e non ritardare la diagnosi di queste durante lo studio di ricerca. uno studio colonscopico verranno utilizzati tutti i pazienti che hanno stitichezza e una qualsiasi delle seguenti caratteristiche:

1. Diagnosi di costipazione meno di 1 anno
2. - Soggetti di età ≥55 anni che non hanno ricevuto una valutazione colonscopica negli ultimi 3 anni prima dell'ingresso nello studio
3. Cronico ma con dati di allarme (: perdita di peso inspiegabile, sanguinamento transrettale recente <6 mesi, esempio di cambiamenti recenti nel modello di defecazione) Stitichezza

I pazienti includono:

Studi con integratori di fibre (psillio, prugne8) Hanno incluso da 25 a 30 pazienti per gruppo per trovare le differenze tra i gruppi.

In totale si prevede di includere 60 pazienti randomizzati come segue: 15 pazienti ricevono la dose di 5 g di agave fruttani blu Tequilana Weber, 15 pazienti hanno ricevuto la dose di 10 g, 15 pazienti hanno ricevuto la dose di 5 g di agave fruttani blu Tequilana Weber + 10 g di eccipiente e 15 pazienti hanno ricevuto 15 g di plantago psyllium.

Gascromatografia: (determinazione dell'AGCC degli acidi grassi a catena corta)

Verrà utilizzato l'AGCC per determinare la fiamma del rivelatore di ioni. Vengono eseguiti i seguenti passaggi:

1. 50 uL di etil butirrato vengono aggiunti a 1 g di feci
2. È stato aggiunto 1 mL di acido cloridrico.
3. Si centrifuga a 3000 g per 10 minuti. Il surnatante è stato rimosso.
4. Successivamente si aggiungono 300 uL di N-metil dibutil sililtrifluoroacetammide (MTBSTFA).
5. soluzione a 80°C per 20 min riscaldare.
6. Si lascia indisturbato a temperatura ambiente per 24 ore per garantire la completa derivatizzazione dell'acido lattico.
7. verrà eseguita l'analisi dei campioni mediante gascromatografia secondo il metodo sviluppato per campioni specifici.

Estrazione del DNA dalle feci, amplificazione PCR e sequenziamento del 16S rRNA batterico:

Il sequenziamento dell'RRNA è il metodo di scelta per determinare relazioni tassonomiche elevate (livello di genere superiore). Poiché la molecola di rRNA 16S contiene regioni altamente variabili, di solito è possibile trovare regioni da 20 a 30 basi che sono completamente uniche per una singola specie di batteri.

Per eseguire l'analisi, raccoglierà in campioni fecali sono contenitori di plastica sterili. Immediatamente dopo la raccolta, i campioni saranno trasportati al laboratorio in secchielli di ghiaccio da 2 a 8 e poi congelati a -73°C fino al trattamento.

L'estrazione del DNA è stata eseguita seguendo le istruzioni del metodo automatizzato NucliSENS® easyMAG® (BioMerieux, Durham, NC, USA) con una breve modifica iniziale prima del processo automatizzato. Si pesano e si sospendono 200 mg di materia fecale di ciascun campione in 0,3 mL di soluzione salina tamponata con fosfato (8 mM Na2HPO4, 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1,5 mM KH2PO4 e) vigorosa agitazione per 30 secondi. 100 microlitri della sospensione sono stati posti in ebollizione per 15 minuti e immediatamente congelati a 0°C su ghiaccio. L'omogenato batterico è stato centrifugato a 13.000 g per 10 min e il surnatante sarà raccolto in provette da 500 .mu.l.

Questo campione verrà utilizzato per l'isolamento del DNA su apparecchiature automatizzate. L'amplificazione della PCR in tempo reale 16S rRNA batterico deve essere eseguita come descritto da precedenti rapporti utilizzando un'apparecchiatura Light Cycler- (Roche).

Quantificazione dei phyla batterici nelle principali categorie descritte: 1) Firmicutes, 2) Bacteroidetes, 3) Actinobacterias, 4) Proteobacteria. Sarà condotto con il metodo della PCR quantitativa in tempo reale utilizzando i primer e le condizioni descritte in precedenza, pR amplifica frammenti specifici di gruppi di popolazione batterica 16S rRNA descritti. Useremo primers chiamati barcode 967 F (CNACGCGAAGAACCTTANC) e 1046R (CGACAGCCATGCANCACCT) per amplificare i frammenti di rRNA 16S V6 V6 batterico.

Il sequenziamento e l'analisi dei frammenti amplificati avviene mediante dispositivo di sequenziamento fluorescente terminatore 3130 / analizzatore genetico (Applied Biosystems).

I prodotti di PCR sono stati sequenziati e analizzati e saranno inviati a GenBank per l'identificazione delle specie.

Estrazione del DNA batterico e quantificazione delle specie batteriche utilizzate per dimostrare l'effetto prebiotico della fibra di agave, poiché è prevista la crescita selettiva della popolazione di bifidobatteri e lattobacilli e la presenza di acidi grassi a catena corta nelle feci.

Quindi, oltre alle proprietà funzionali e ai loro effetti sulla stitichezza, è possibile verificare l'effetto prebiotico dei fruttani di agave.