利福昔明在肝性脑病中的微生物耐药性

方法 纳入和排除标准 2015 年 1 月至 2018 年 12 月期间，从埃及开罗国家肝脏病学和热带医学研究所 (NHTMRI) 招募了完全清醒的患者。 纳入标准为 HCV 感染引起的肝硬化，年龄在 18 至 75 岁之间，至少经历过一次 OHE，并且 MELD 评分≤ 25.13 患有神经或沟通问题、肝细胞癌、糖尿病、活动性感染、血清肌酐 > 2 的患者mg/dl、Hg < 8 g/dL、血清 Na < 125 mmol/L 或血清 K < 2.5 mmol/L 被排除在外。 还排除了在上个月内先前摄入利福昔明作为预防或任何抗生素的患者。

研究设计 该开放标签、平行、前瞻性干预研究的方案得到了 NHTMRI 机构审查委员会 (IRB) 和开罗大学药学院 (CL(1173)) 的批准。 所有患者和/或那些因之前的 HE 发作而具有弱/受损认知和/或思维能力的患者和/或患者的护理人员在研究登记前被咨询并解释以提供书面知情同意书。

患者被随机分配到干预组（利福昔明组）或对照组（仅乳果糖组）。 两组均接受乳果糖浆 30-45 ml，每日 3 次，干预组加用利福昔明 400 mg，每日 3 次，持续 6 个月。 两组患者均按医院方案给予利尿剂、质子泵抑制剂、熊去氧胆酸、水飞蓟素等其他常规治疗。

研究随访 所有招募的患者在基线时和每 2 周进行一次临床和生化评估，持续 6 个月。 Conn 评分、扑翼样震颤分级、带分类的全血图片、血清胆红素（总胆红素和直接胆红素）、血清天冬氨酸转氨酶 (AST) 和丙氨酸转氨酶 (ALT)、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶 (GGT)、血清白蛋白、凝血酶原时间和浓度、尿素和血清肌酐、血清钠 (Na) 和钾 (K)、尿液和粪便分析。

疗效结果 主要疗效终点是 OHE 第一次突破性事件的时间（定义为从研究药物的第一次给药到从基线 Conn 评分 0 或 1 增加到 2 或更高的评分或从基线 Conn 评分为 0 至 Conn 评分为 1 加上扑翼样震颤等级增加 1 个单位。 13 次要疗效终点是到第一次住院的时间，涉及 HE（定义为因疾病住院或住院期间发生 HE）。 14 研究期间患者的存活百分比也被视为次要结果。

安全结果 所有招募的患者都被要求报告在研究期间经历的任何不良事件。 每 2 周进行一次门诊访问，直至治疗期结束。 在没有临床访问的几周内，患者通过电话进行随访。

利福昔明微生物耐药性从临床粪便样本中分离革兰氏阴性菌在开始治疗之前和研究结束时从所有参与者收集粪便样本。 将 1 克粪便悬浮在 10 毫升盐水中并剧烈涡旋。 将 1 ml 粪便悬浮液等分试样在 MacConkey 琼脂平板表面划线以分离革兰氏阴性乳糖发酵菌。 然后将板在 37⁰C 下孵育 24 小时。 挑取粉红色菌落并再次划线，然后悬浮在脑心浸液肉汤 (BHI) 中的 30% 甘油（体积/体积）中，并储存在 -80 ⁰C 下直至进一步分析。

确定利福昔明对乳糖发酵分离物的最低抑制浓度 (MIC) 根据临床和实验室标准协会 (CLSI) 指南，采用连续两倍连续稀释肉汤程序。 15 在 Muller Hinton 肉汤 (MHB) 中从 256 μ g/ml 开始制备十个利福昔明稀释液，并等分到圆底 96 孔板的孔中的 200 μ 1 等分试样中。 包括对照孔，其使用接种有20μl制备的细菌接种物的200μl MHB制备。

通过调整来自过夜培养物的细胞来制备接种物以匹配 McFarland 标准 0.5 (OD600 = 0.125)。 将悬浮液在 MHB 中进一步稀释 1:20，并将 20 μl 调整后的接种物添加到每个孔中。 然后将板在 37°C 下孵育 24 小时。 实验重复两次，导致完全抑制可见生长的最低利福昔明浓度代表 MIC 值。 如果 MIC 值相差超过两倍稀释度，则认为它们不同。 16