A rifaximin mikrobiális rezisztenciája hepatikus encephalopathiában

Módszertan Bevételi és kizárási kritériumok 2015 januárja és 2018 decembere között a kairói Nemzeti Hepatológiai és Trópusi Orvostudományi Kutatóintézetből (NHTMRI) vettek fel teljesen tudatos betegeket. A felvételi kritériumok a következők voltak: HCV-fertőzés okozta májzsugor, 18-75 év közötti életkor, legalább egy OHE-epizódban szenvedő betegek és a MELD-pontszám ≤ 25,13 Neurológiai vagy kommunikációs problémákkal küzdő betegek, hepatocelluláris karcinóma, diabetes mellitus, aktív fertőzés, szérum kreatinin > 2 mg/dl, Hg < 8 g/dl, szérum Na < 125 mmol/L vagy szérum K < 2,5 mmol/L nem szerepelt. Szintén kizárták azokat a betegeket, akik korábban rifaximint vettek profilaxisként vagy bármilyen antibiotikumot az elmúlt hónapban.

A vizsgálat felépítése Ennek a nyílt elrendezésű, párhuzamos, prospektív intervenciós vizsgálatnak a protokollját az NHTMRI intézményi felülvizsgálati bizottsága (IRB) és a Kairói Egyetem Gyógyszerésztudományi Karának (CL(1173)) jóváhagyta. Valamennyi beteggel és/vagy a betegek gondozóival, akiknek a korábbi HE epizódja miatt gyenge/csökkent kognitív és/vagy gondolkodási képességük van, konzultáltak, és elmagyarázták, hogy a vizsgálatba való beiratkozás előtt írásos beleegyezést kaptak.

A betegeket véletlenszerűen besorolták az intervenciós csoportba (rifaximin csoport), vagy a kontrollcsoportba (csak laktulóz csoport). Mindkét csoport 30-45 ml laktulóz szirupot kapott naponta háromszor, míg a rifaximint 400 mg naponta háromszor adták hozzá a beavatkozási csoporthoz 6 hónapig. A kórházi protokollnak megfelelően mindkét csoportban más hagyományos terápiát is kaptak, beleértve a diuretikumokat, protonpumpa-gátlókat, ursodeoxikólsavat és szilimarint.

A vizsgálat nyomon követése Minden felvett beteget klinikailag és biokémiailag értékeltek kiinduláskor és 6 hónapon keresztül kéthetente. Conn pontszám, asterixis fokozat, teljes vérkép különbséggel, szérum bilirubin (teljes és közvetlen), szérum aszpartát transzamináz (AST) és alanin transzamináz (ALT), alkalikus foszfatáz, gamma-glutamiltranszferáz (GGT), szérum albumin, protrombin idő és koncentráció , karbamid és szérum kreatinin, szérum nátrium (Na) és kálium (K), vizelet és széklet analízist mértek.

Hatékonysági eredmények Az elsődleges hatásossági végpont az OHE első áttöréséig eltelt idő volt (a vizsgálati gyógyszer első dózisától eltelt idő a 0 vagy 1-es kiindulási Conn-pontszám 2-es vagy annál magasabb pontszámára való növekedésig, vagy a kiindulási Conn-pontszám 0-tól az 1-es Conn-pontszámig, valamint az asterixis fokozat 1-egységgel történő növekedése.13 A másodlagos hatékonysági végpont az első, HE-vel kapcsolatos kórházi kezelésig eltelt idő volt (a definíció szerint olyan betegség miatti kórházi kezelés, amely során HE-epizód fordult elő).14 A beteg túlélési arányát a vizsgálat során szintén másodlagos eredménynek tekintették.

Biztonsági eredmények Minden felvett beteget felkérték, hogy jelentse a vizsgálati időszak alatt tapasztalt nemkívánatos esemény(eke)t. A klinikai látogatások 2 hetente történtek a kezelési időszak végéig. Azokon a heteken, amikor nem volt klinikai látogatás, a betegeket telefonhívásokkal követték nyomon.

Rifaximin mikrobiális rezisztencia Gram-negatív baktériumok izolálása klinikai székletmintákból A kezelés megkezdése előtt és a vizsgálat végén minden résztvevőtől székletmintát vettünk. Egy gramm székletet 10 ml sóoldatban szuszpendáltunk, és erőteljesen vortexeltünk. A székletszuszpenzió 1 ml-es aliquot részét MacConkey agarlemezek felületére csíkozzuk, hogy izoláljuk a Gram-negatív laktóz-fermentorokat. A lemezeket ezután 37 °C-on 24 órán át inkubáltuk. A rózsaszín telepeket kiszedtük, és még egyszer átcsíkoztuk, majd 30%-os glicerinben (V/V) szuszpendáltuk Brain Heart Infusion broth-ban (BHI) és -80 °C-on tároltuk a további elemzésekig.

A rifaximin minimális gátló koncentrációjának (MIC) meghatározása laktóz-fermenter izolátumok esetén A Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) irányelvei szerint szekvenciális kétszeres sorozathígítási eljárást alkalmaztak.15 A rifaximin tíz hígítását 256 μg/ml-ről Muller Hinton táplevesben (MHB) állítottuk elő, és 200 µl-es aliquot részeket osztottak ki egy kerek fenekű 96 lyukú lemez lyukaiba. Egy kontroll lyukat helyeztünk el, amelyet 200 µl MHB-vel készítettünk, amelyet 20 µl elkészített bakteriális oltóanyaggal oltottak be.

Az oltóanyagot úgy állítottuk elő, hogy egy éjszakán át tartó tenyészetből származó sejteket úgy állítottunk elő, hogy megfeleljenek a McFarland 0,5-ös standardnak (OD600 = 0,125). A szuszpenziót tovább hígítottuk 1:20 arányban MHB-vel, és 20 μl beállított oltóanyagot adtunk minden egyes lyukba. A lemezeket ezután 37 °C-on 24 órán át inkubáltuk. A kísérletet kétszer megismételtük, és a rifaximin legalacsonyabb koncentrációja, amely a látható növekedés teljes gátlását eredményezte, a MIC értéket jelentette. A MIC értékeket akkor tekintettük eltérőnek, ha több mint kétszeres hígításban különböztek.16