Microbiële resistentie van Rifaximin bij hepatische encefalopathie

Methodologie In- en uitsluitingscriteria Volledig bij bewustzijn zijnde patiënten werden tussen januari 2015 en december 2018 ingeschreven bij het National Hepatology and Tropical Medicine Research Institute (NHTMRI), Caïro, Egypte. De inclusiecriteria waren cirrose als gevolg van HCV-infectie, leeftijd van 18 tot 75 jaar, met ten minste één episode van OHE en een MELD-score ≤ 25,13 Patiënten met neurologische of communicatieproblemen, hepatocellulair carcinoom, diabetes mellitus, actieve infectie, serumcreatinine > 2 mg/dl, Hg < 8 g/dL, serum Na < 125 mmol/L of serum K < 2,5 mmol/L waren uitgesloten. Patiënten met eerdere inname van rifaximin als profylaxe of een antibioticum in de afgelopen maand werden ook uitgesloten.

Studieontwerp Het protocol van deze open-label, parallelle, prospectieve interventionele studie werd goedgekeurd door de institutionele beoordelingsraad (IRB) van NHTMRI en die van de Faculteit Farmacie, Universiteit van Caïro (CL(1173)). Alle patiënten en/of verzorgers van patiënten voor degenen met een zwak/verminderd cognitief en/of denkvermogen als gevolg van een eerdere episode van HE werden geraadpleegd en toegelicht voor schriftelijke geïnformeerde toestemming vóór deelname aan de studie.

De patiënten werden willekeurig ingedeeld in een interventiegroep (rifaximingroep) of een controlegroep (groep met alleen lactulose). Beide groepen kregen driemaal daags 30-45 ml lactulosesiroop, terwijl driemaal daags rifaximin 400 mg aan de interventiegroep werd toegevoegd gedurende 6 maanden. Andere conventionele therapieën, waaronder diuretica, protonpompremmers, ursodeoxycholzuur en silymarine, werden volgens het ziekenhuisprotocol aan de patiënten in beide groepen gegeven.

Follow-up van het onderzoek Alle gerekruteerde patiënten werden klinisch en biochemisch beoordeeld bij baseline en elke 2 weken gedurende 6 maanden. Conn-score, asterixis-graad, compleet bloedbeeld met differentiaal, serumbilirubine (totaal en direct), serumaspartaattransaminase (AST) en alaninetransaminase (ALT), alkalische fosfatase, gamma-glutamyltransferase (GGT), serumalbumine, protrombinetijd en -concentratie , ureum en serumcreatinine, serumnatrium (Na) en kalium (K), urine- en ontlastingsanalyse werden gemeten.

Werkzaamheidsresultaten Het primaire eindpunt voor werkzaamheid was de tijd tot de eerste doorbraakepisode van OHE (gedefinieerd als de tijd vanaf de eerste dosis van het onderzoeksgeneesmiddel tot een toename van een baseline Conn-score van 0 of 1 naar een score van 2 of meer of van een baseline Conn-score van 0 tot een Conn-score van 1 plus een toename van 1 eenheid in de asterixis-graad.13 Het secundaire werkzaamheidseindpunt was de tijd tot de eerste ziekenhuisopname waarbij HE betrokken was (gedefinieerd als ziekenhuisopname vanwege de aandoening of ziekenhuisopname gedurende welke een episode van HE optrad).14 Het overlevingspercentage van de patiënt tijdens het onderzoek werd ook als een secundair resultaat beschouwd.

Veiligheidsresultaten Alle gerekruteerde patiënten werd verzocht om eventuele bijwerkingen die tijdens de onderzoeksperiode waren ervaren, te melden. Klinische bezoeken vonden om de 2 weken plaats tot het einde van de behandelingsperiode. In weken zonder klinische bezoeken werden patiënten opgevolgd door middel van telefoontjes.

Rifaximine Microbiële resistentie Isolatie van Gram-negatieve bacteriën uit klinische ontlastingsmonsters Bij alle deelnemers werden ontlastingsmonsters verzameld vóór aanvang van de behandeling en aan het einde van het onderzoek. Eén gram ontlasting werd gesuspendeerd in 10 ml zoutoplossing en krachtig gevortext. Een deel van een ml van de ontlastingssuspensie werd uitgestreken op het oppervlak van MacConkey-agarplaten om Gram-negatieve lactose-fermentoren te isoleren. Vervolgens werden de platen 24 uur bij 37°C geïncubeerd. Roze kolonies werden geplukt en opnieuw uitgestreken, vervolgens gesuspendeerd in 30% glycerol (vol/vol) in Brain Heart Infusion-bouillon (BHI) en bewaard bij -80 ⁰C tot verdere analyse.

Bepaling van de minimale remmende concentratie (MIC) van rifaximine voor lactosefermenter-isolaten Een sequentiële tweevoudige seriële verdunningsbouillonprocedure werd toegepast volgens de richtlijnen van het Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).15 Er werden tien verdunningen van rifaximine bereid uitgaande van 256 ug/ml in Muller Hinton-bouillon (MHB) en verdeeld in porties van 200 ul in de putjes van een plaat met 96 putjes met ronde bodem. Er was een controleputje toegevoegd dat was bereid met behulp van 200 μl MHB geïnoculeerd met 20 μl van het bereide bacteriële inoculum.

Het inoculum werd bereid door cellen uit een kweek gedurende de nacht aan te passen zodat ze overeenkwamen met de McFarland-standaard 0,5 (OD600 = 0,125). De suspensie werd verder 1:20 verdund in MHB en 20 ul van het aangepaste inoculum werd aan elk putje toegevoegd. De platen werden vervolgens 24 uur bij 37°C geïncubeerd. Het experiment werd twee keer herhaald en de laagste concentratie rifaximine die resulteerde in volledige remming van zichtbare groei vertegenwoordigde de MIC-waarde. De MIC-waarden werden als verschillend beschouwd als ze meer dan een tweevoudige verdunning verschilden.16