간성뇌증에서 Rifaximin의 미생물 내성

방법론 포함 및 제외 기준 완전히 의식이 있는 환자는 2015년 1월부터 2018년 12월 사이에 이집트 카이로의 National Hepatology and Tropical Medicine Research Institute(NHTMRI)에서 등록했습니다. 포함 기준은 18세에서 75세 사이의 HCV 감염으로 인한 간경변증으로 최소 1회 이상의 OHE 에피소드를 경험하고 MELD 점수 ≤ 25.13 신경학적 또는 의사소통 문제가 있는 환자, 간세포 암종, 진성 당뇨병, 활동성 감염, 혈청 크레아티닌 > 2 mg/dl, Hg < 8g/dL, 혈청 Na < 125mmol/L 또는 혈청 K < 2.5mmol/L는 제외되었습니다. 지난 한 달 이내에 예방 또는 항생제로 리팍시민을 이전에 섭취한 환자도 제외되었습니다.

연구 설계 이 오픈 라벨, 병렬, 전향적 개입 연구의 프로토콜은 NHTMRI의 기관 검토 위원회(IRB)와 카이로 대학교 약학부(CL(1173))의 승인을 받았습니다. HE의 이전 에피소드로 인해 인지 및/또는 사고 능력이 약한/손상된 환자를 위한 모든 환자 및/또는 환자의 간병인은 연구 등록 전에 제공된 서면 사전 동의에 대해 상담하고 설명했습니다.

환자는 개입군(리팍시민군) 또는 대조군(락툴로스 단독군)으로 무작위로 배정되었습니다. 두 그룹 모두 락툴로스 시럽 30-45ml를 매일 3회 투여받았고 리팍시민 400mg을 매일 3회 중재 그룹에 6개월 동안 추가했습니다. 이뇨제, 양성자 펌프 억제제, 우르소데옥시콜산 및 실리마린을 포함한 다른 기존 요법이 병원 프로토콜에 따라 두 그룹의 환자에게 제공되었습니다.

연구 후속 조치 모집된 모든 환자는 기준선에서 그리고 6개월 동안 2주마다 임상적 및 생화학적으로 평가되었습니다. Conn 점수, 자세고정불능증 등급, 감별이 있는 완전한 혈액 사진, 혈청 빌리루빈(총 및 직접), 혈청 아스파르테이트 트랜스아미나제(AST) 및 알라닌 트랜스아미나제(ALT), 알칼리 포스파타제, 감마-글루타밀트랜스퍼라제(GGT), 혈청 알부민, 프로트롬빈 시간 및 농도 , 요소 및 혈청 크레아티닌, 혈청 나트륨(Na) 및 칼륨(K), 소변 및 대변 분석을 측정하였다.

효능 결과 1차 효능 종점은 OHE의 첫 돌발 에피소드까지의 시간(연구 약물의 첫 번째 투여부터 기준선 Conn 점수 0 또는 1에서 점수 2 이상 또는 기본 Conn 점수 0에서 Conn 점수 1에 자세고정불능 등급의 1단위 증가.13 2차 유효성 종점은 HE와 관련된 첫 번째 입원까지의 시간이었습니다(질병으로 인한 입원 또는 HE 에피소드가 발생한 동안의 입원으로 정의됨).14 연구 중 환자의 생존율도 이차 결과로 간주되었습니다.

안전성 결과 모집된 모든 환자는 연구 기간 동안 경험한 부작용을 보고하도록 요청받았습니다. 클리닉 방문은 치료 기간이 끝날 때까지 2주마다 이루어졌습니다. 임상 방문이 없는 몇 주 동안 환자는 전화 통화로 후속 조치를 받았습니다.

임상 대변 샘플에서 그람 음성 박테리아의 리팍시민 미생물 내성 단리 대변 샘플은 치료를 시작하기 전과 연구가 끝날 때 모든 참가자로부터 수집되었습니다. 대변 ​​1g을 식염수 10ml에 현탁하고 격렬하게 휘젓습니다. 그람 음성 유당 발효체를 분리하기 위해 대변 현탁액 1ml 분취량을 MacConkey 한천 플레이트 표면에 줄무늬로 표시했습니다. 그런 다음 플레이트를 37⁰C에서 24시간 동안 배양했습니다. 분홍색 콜로니를 골라 한 번 더 줄무늬를 만든 다음 BHI(Brain Heart Infusion broth)의 30% 글리세롤(vol/vol)에 현탁하고 추가 분석까지 -80 ⁰C에 보관했습니다.

락토스 발효기 분리물에 대한 리팍시민의 최소 억제 농도(MIC) 결정 임상 및 실험실 표준 연구소(CLSI) 지침에 따라 순차적인 2중 연속 희석 배지 절차를 채택했습니다.15 Muller Hinton Broth(MHB)에서 256 μg/ml부터 시작하여 리팍시민의 10개 희석액을 준비하고 둥근 바닥 96-웰 플레이트의 웰에서 200 μl 분취량으로 분주했습니다. 준비된 박테리아 접종물 20μl로 접종된 200μl MHB를 사용하여 준비된 대조군 웰이 포함되었습니다.

밤새 배양한 세포를 McFarland 표준 0.5(OD600 = 0.125)와 일치하도록 조정하여 접종물을 준비했습니다. 현탁액을 MHB에서 1:20으로 더 희석하고 조정된 접종물 20μl를 각 웰에 첨가했습니다. 그런 다음 플레이트를 37°C에서 24시간 동안 배양했습니다. 실험을 2회 반복하였고 가시적 성장의 완전한 억제를 초래한 가장 낮은 농도의 리팍시민이 MIC 값을 나타내었다. MIC 값은 2배 이상 희석된 경우 다른 것으로 간주되었습니다.16