Микробная резистентность к рифаксимину при печеночной энцефалопатии

Методология Критерии включения и исключения Пациенты в полном сознании были зарегистрированы в Национальном научно-исследовательском институте гепатологии и тропической медицины (NHTMRI), Каир, Египет, в период с января 2015 г. по декабрь 2018 г. Критерии включения: цирроз печени, вызванный инфекцией ВГС, возраст от 18 до 75 лет, наличие по крайней мере одного эпизода ОГЭ и оценка по шкале MELD ≤ 25. мг/дл, Hg < 8 г/дл, сывороточный Na < 125 ммоль/л или сывороточный K < 2,5 ммоль/л были исключены. Пациенты, ранее принимавшие рифаксимин в качестве профилактики или любой антибиотик в течение последнего месяца, также были исключены.

Дизайн исследования Протокол этого открытого, параллельного, проспективного интервенционного исследования был одобрен институциональным наблюдательным советом (IRB) NHTMRI и фармацевтическим факультетом Каирского университета (CL(1173)). Все пациенты и/или лица, ухаживающие за пациентами со слабыми/нарушенными когнитивными и/или мыслительными способностями из-за предшествующего эпизода ПЭ, были проконсультированы и объяснены для предоставления письменного информированного согласия перед включением в исследование.

Пациенты были случайным образом распределены либо в группу вмешательства (группа рифаксимина), либо в контрольную группу (группа, принимающая только лактулозу). Обе группы получали сироп лактулозы по 30-45 мл 3 раза в день, а в экспериментальной группе в течение 6 месяцев добавляли рифаксимин по 400 мг 3 раза в день. Другая традиционная терапия, включая диуретики, ингибиторы протонной помпы, урсодеоксихолевую кислоту и силимарин, назначалась пациентам в обеих группах в соответствии с госпитальным протоколом.

Последующее наблюдение за исследованием Все набранные пациенты оценивались клинически и биохимически на исходном уровне и каждые 2 недели в течение 6 месяцев. Оценка по Конну, степень астериксиса, полная картина крови с дифференциалом, билирубин сыворотки (общий и прямой), аспартатаминотрансфераза (АСТ) и аланинтрансаминаза (АЛТ), щелочная фосфатаза, гамма-глутамилтрансфераза (ГГТ), сывороточный альбумин, протромбиновое время и концентрация , креатинин мочевины и сыворотки, натрий (Na) и калий (K) сыворотки, анализ мочи и стула.

Исходы эффективности Первичной конечной точкой эффективности было время до первого резкого эпизода СГЭ (определяемое как время от первой дозы исследуемого препарата до увеличения исходного показателя по Конну 0 или 1 до 2 или более баллов или от исходный балл по Конну от 0 до балла по Конну 1 плюс увеличение степени астериксиса на 1 единицу.13 Вторичной конечной точкой эффективности было время до первой госпитализации по поводу HE (определяемой как госпитализация из-за расстройства или госпитализация, во время которой произошел эпизод HE)14. Процент выживаемости пациентов во время исследования также считался вторичным результатом.

Показатели безопасности Всех включенных в исследование пациентов просили сообщать о любых нежелательных явлениях, возникших в течение периода исследования. Визиты в клинику происходили каждые 2 недели до конца периода лечения. В те недели, когда не было клинических посещений, пациентов сопровождали телефонными звонками.

Микробная резистентность к рифаксимину Выделение грамотрицательных бактерий из клинических образцов стула Образцы стула были взяты у всех участников до начала лечения и в конце исследования. Один грамм стула суспендировали в 10 мл физиологического раствора и энергично встряхивали. Аликвоту 1 мл суспензии стула наносили штрихом на поверхность чашек с агаром Мак-Конки для выделения грамотрицательных бактерий, ферментирующих лактозу. Затем планшеты инкубировали при 37⁰C в течение 24 часов. Розовые колонии собирали и повторно засевали штрихами еще раз, затем суспендировали в 30% глицерине (об./об.) в бульоне для инфузии мозгового и сердечного сосудов (BHI) и хранили при -80 ⁰C до дальнейших анализов.

Определение минимальной ингибирующей концентрации (МИК) рифаксимина для изолятов, ферментирующих лактозу. В соответствии с рекомендациями Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI) была принята последовательная процедура двукратного серийного разведения бульона. Готовили десять разведений рифаксимина, начиная с 256 мкг/мл в бульоне Мюллера-Хинтона (MHB), и распределяли аликвотами по 200 мкл в лунки 96-луночного круглодонного планшета. Была включена контрольная лунка, приготовленная с использованием 200 мкл MHB, инокулированного 20 мкл приготовленного бактериального инокулята.

Инокулят готовили, регулируя клетки из ночной культуры, чтобы они соответствовали стандарту McFarland 0,5 (OD600 = 0,125). Суспензию дополнительно разбавляли 1:20 в MHB и в каждую лунку добавляли по 20 мкл скорректированного инокулята. Затем планшеты инкубировали при 37°С в течение 24 часов. Эксперимент повторяли дважды, и самая низкая концентрация рифаксимина, приводившая к полному ингибированию видимого роста, представляла собой значение MIC. Значения МИК считались разными, если они различались более чем в два раза.16