Mikrobiální rezistence rifaximinu u jaterní encefalopatie

Metodika Kritéria pro zařazení a vyloučení Pacienti při plném vědomí byli zapsáni z Národního institutu pro výzkum hepatologie a tropické medicíny (NHTMRI), Káhira, Egypt v období od ledna 2015 do prosince 2018. Kritéria pro zařazení byla cirhóza způsobená infekcí HCV, věk 18 až 75 let, prodělali alespoň jednu epizodu OHE a skóre MELD ≤ 25,13 Pacienti s neurologickými nebo komunikačními problémy, hepatocelulárním karcinomem, diabetes mellitus, aktivní infekcí, sérový kreatinin > 2 mg/dl, Hg < 8 g/dl, sérový Na < 125 mmol/l nebo sérový K < 2,5 mmol/l byly vyloučeny. Pacienti s předchozím užíváním rifaximinu jako profylaxe nebo jakéhokoli antibiotika během posledního měsíce byli rovněž vyloučeni.

Návrh studie Protokol této otevřené, paralelní, prospektivní intervenční studie byl schválen institucionálním kontrolním výborem (IRB) NHTMRI a Farmaceutické fakulty Káhirské univerzity (CL(1173)). Před zařazením do studie byli konzultováni všichni pacienti a/nebo jejich pečovatelé o pacienty se slabými/narušenými kognitivními a/nebo myšlením v důsledku předchozí epizody HE, kteří jim poskytli písemný informovaný souhlas.

Pacienti byli náhodně rozděleni do intervenční skupiny (skupina s rifaximinem) nebo do kontrolní skupiny (skupina obsahující pouze laktulózu). Obě skupiny dostávaly laktulózový sirup 30–45 ml třikrát denně, zatímco intervenční skupině byl po dobu 6 měsíců přidán rifaximin 400 mg třikrát denně. Další konvenční terapie včetně diuretik, inhibitorů protonové pumpy, kyseliny ursodeoxycholové a silymarinu byla podávána pacientům v obou skupinách podle nemocničního protokolu.

Sledování studie Všichni přijatí pacienti byli hodnoceni klinicky a biochemicky na začátku studie a každé 2 týdny po dobu 6 měsíců. Conn skóre, stupeň asterixis, kompletní krevní obraz s diferenciálem, sérový bilirubin (celkový a přímý), sérová aspartáttransamináza (AST) a alanintransamináza (ALT), alkalická fosfatáza, gama-glutamyltransferáza (GGT), sérový albumin, protrombinový čas a koncentrace byla měřena močovina a sérový kreatinin, sérový sodík (Na) a draslík (K), analýza moči a stolice.

Výsledky účinnosti Primárním koncovým bodem účinnosti byla doba do první průlomové epizody OHE (definovaná jako doba od první dávky studovaného léku do zvýšení z výchozího Conn skóre 0 nebo 1 na skóre 2 nebo více nebo od základní Conn skóre 0 až Conn skóre 1 plus zvýšení o 1 jednotku ve stupni asterixy.13 Sekundárním koncovým bodem účinnosti byla doba do první hospitalizace zahrnující HE (definovaná jako hospitalizace kvůli poruše nebo hospitalizaci, během níž došlo k epizodě HE).14 Procento přežití pacienta během studie bylo také považováno za sekundární výsledek.

Výsledky bezpečnosti Všichni přijatí pacienti byli požádáni, aby hlásili jakékoli nežádoucí účinky, které se vyskytly během období studie. Návštěvy kliniky probíhaly každé 2 týdny až do konce léčebného období. V týdnech bez klinických návštěv byli pacienti sledováni telefonicky.

Mikrobiální rezistence na rifaximin Izolace gramnegativních bakterií z klinických vzorků stolice Vzorky stolice byly odebrány všem účastníkům před zahájením léčby a na konci studie. Jeden gram stolice byl suspendován v 10 ml fyziologického roztoku a intenzivně promícháván. Alikvot 1 ml suspenze stolice byl nanesen na povrch MacConkeyho agarových ploten, aby se izolovaly gramnegativní fermentory laktózy. Destičky byly poté inkubovány při 37 °C po dobu 24 hodin. Růžové kolonie byly sebrány a znovu natřeny ještě jednou, poté suspendovány ve 30% glycerolu (obj./obj.) v Brain Heart Infusion bujónu (BHI) a skladovány při -80 °C do dalších analýz.

Stanovení minimální inhibiční koncentrace (MIC) rifaximinu pro izoláty fermentoru laktózy Byl přijat postup sekvenčního dvojnásobného sériového ředění bujónu podle pokynů Institutu pro klinické a laboratorní standardy (CLSI).15 Bylo připraveno deset ředění rifaximinu počínaje 256 μg/ml v Muller Hintonově bujónu (MHB) a rozděleno na alikvoty po 200 ul do jamek 96jamkové destičky s kulatým dnem. Součástí byla kontrolní jamka, která byla připravena s použitím 200 μl MHB naočkovaného 20 μl připraveného bakteriálního inokula.

Inokulum bylo připraveno úpravou buněk z kultury přes noc tak, aby odpovídala McFarlandovu standardu 0,5 (OD600 = 0,125). Suspenze byla dále naředěna 1:20 v MHB a do každé jamky bylo přidáno 20 μl upraveného inokula. Destičky byly poté inkubovány při 37 °C po dobu 24 hodin. Experiment byl opakován dvakrát a nejnižší koncentrace rifaximinu, která vedla k úplné inhibici viditelného růstu, představovala hodnotu MIC. Hodnoty MIC byly považovány za odlišné, pokud se lišily více než dvojnásobným ředěním.16