Mikrobiel resistens af Rifaximin i hepatisk encefalopati

Metode Inklusions- og eksklusionskriterier Fuldt bevidste patienter blev indskrevet fra National Hepatology and Tropical Medicine Research Institute (NHTMRI), Cairo, Egypten mellem januar 2015 og december 2018. Inklusionskriterierne var skrumpelever på grund af HCV-infektion, alder 18 til 75 år, der oplevede mindst én episode af OHE, og en MELD-score ≤ 25,13 Patienter med neurologiske eller kommunikationsproblemer, hepatocellulært karcinom, diabetes mellitus, aktiv infektion, serumkreatinin > 2 mg/dl, Hg < 8 g/dL, serum Na < 125 mmol/L eller serum K < 2,5 mmol/L blev udelukket. Patienter med tidligere indtagelse af rifaximin som profylakse eller ethvert antibiotikum inden for den sidste måned blev også udelukket.

Undersøgelsesdesign Protokollen for denne åbne, parallelle, prospektive interventionelle undersøgelse blev godkendt af det institutionelle revisionsudvalg (IRB) for NHTMRI og det for Farmaceutiske Fakultet, Cairo University (CL(1173)). Alle patienter og/eller patienters plejere for dem med svage/svækket kognitive og/eller tænkeevner på grund af tidligere episode af HE blev konsulteret og forklaret for givet skriftligt informeret samtykke før tilmelding til studiet.

Patienterne blev tilfældigt fordelt i enten interventionsgruppe (rifaximin gruppe) eller kontrolgruppe (kun laktulose gruppe). Begge grupper modtog lactulosesirup 30-45 ml tre gange dagligt, mens rifaximin 400 mg tre gange dagligt blev tilføjet til interventionsgruppen i 6 måneder. Anden konventionel behandling inklusive diuretika, protonpumpehæmmere, ursodeoxycholsyre og silymarin blev givet til patienterne i begge grupper i henhold til hospitalsprotokollen.

Studieopfølgning Alle rekrutterede patienter blev vurderet klinisk og biokemisk ved baseline og hver anden uge i 6 måneder. Conn score, asterixis grad, komplet blodbillede med differential, serum bilirubin (total og direkte), serum aspartat transaminase (AST) og alanin transaminase (ALT), alkalisk phosphatase, gamma-glutamyltransferase (GGT), serum albumin, protrombin tid og koncentration , urinstof og serumkreatinin, serumnatrium (Na) og kalium (K), urin og afføringsanalyse blev målt.

Effektresultater Det primære effektmål var tiden til den første gennembrudsepisode af OHE (defineret som tiden fra den første dosis af undersøgelseslægemidlet til en stigning fra en baseline Conn-score på 0 eller 1 til en score på 2 eller mere eller fra en baseline Conn-score på 0 til en Conn-score på 1 plus en stigning på 1 enhed i asterixis-graden.13 Det sekundære effektmål var tiden til den første indlæggelse, der involverede HE (defineret som hospitalsindlæggelse på grund af lidelsen eller hospitalsindlæggelsen, hvorunder en episode af HE opstod).14 Procentdelen af ​​patientens overlevelse under undersøgelsen blev også betragtet som et sekundært resultat.

Sikkerhedsresultater Alle rekrutterede patienter blev anmodet om at rapportere alle uønskede hændelser oplevet i løbet af undersøgelsesperioden. Klinikbesøg fandt sted hver anden uge indtil afslutningen af ​​behandlingsperioden. I uger uden kliniske besøg blev patienterne fulgt op af telefonopkald.

Rifaximin mikrobiel resistens Isolering af gramnegative bakterier fra kliniske afføringsprøver Afføringsprøver blev indsamlet fra alle deltagerne før påbegyndelse af behandlingen og ved afslutningen af ​​undersøgelsen. Et gram afføring blev suspenderet i 10 ml saltvand og vortexet kraftigt. En ml alikvot af afføringssuspensionen blev strøget på overfladen af ​​MacConkey-agarplader for at isolere Gram-negative lactose-fermentorer. Pladerne blev derefter inkuberet ved 37°C i 24 timer. Lyserøde kolonier blev plukket og gen-stribet en gang mere og derefter suspenderet i 30% glycerol (vol/vol) i Brain Heart Infusion bouillon (BHI) og opbevaret ved -80 ⁰C indtil yderligere analyser.

Bestemmelse af den minimale hæmmende koncentration (MIC) af rifaximin til laktosefermentor-isolater En sekventiel to-fold seriel fortyndingsbouillon-procedure blev vedtaget i henhold til retningslinjerne fra Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).15 Ti fortyndinger af rifaximin blev fremstillet startende fra 256 μg/ml i Muller Hinton bouillon (MHB) og alikvoteret i 200 μl alikvoter i brøndene på en rundbundet 96-brønds plade. Der blev inkluderet en kontrolbrønd, som blev fremstillet ved anvendelse af 200 μl MHB podet med 20 μl af det forberedte bakteriepodestof.

Podestoffet blev fremstillet ved at justere celler fra en kultur natten over til at matche McFarland-standarden 0,5 (OD600 = 0,125). Suspensionen blev yderligere fortyndet 1:20 i MHB, og 20 μl af det justerede inokulum blev tilsat til hver brønd. Pladerne blev derefter inkuberet ved 37°C i 24 timer. Forsøget blev gentaget to gange, og den laveste koncentration af rifaximin, der resulterede i fuldstændig inhibering af synlig vækst, repræsenterede MIC-værdien. MIC-værdierne blev betragtet som forskellige, hvis de adskilte sig med mere end en dobbelt fortynding.16