Resistencia microbiana a la rifaximina en la encefalopatía hepática

Metodología Criterios de inclusión y exclusión Se inscribieron pacientes plenamente conscientes del Instituto Nacional de Investigación de Hepatología y Medicina Tropical (NHTMRI), El Cairo, Egipto, entre enero de 2015 y diciembre de 2018. Los criterios de inclusión fueron cirrosis por infección por VHC, edad de 18 a 75 años, haber presentado al menos un episodio de EHS y puntuación MELD ≤ 2513. Pacientes con problemas neurológicos o de comunicación, hepatocarcinoma, diabetes mellitus, infección activa, creatinina sérica > 2 mg/dl, Hg < 8 g/dL, Na sérico < 125 mmol/L o K sérico < 2,5 mmol/L fueron excluidos. También se excluyeron los pacientes con toma previa de rifaximina como profilaxis o algún antibiótico en el último mes.

Diseño del estudio El protocolo de este estudio de intervención prospectivo, paralelo y abierto fue aprobado por la junta de revisión institucional (IRB) del NHTMRI y la de la Facultad de Farmacia de la Universidad de El Cairo (CL(1173)). Se consultó a todos los pacientes y/o cuidadores de pacientes con capacidad cognitiva y/o de pensamiento débil/deteriorada debido a un episodio anterior de HE y se les explicó por escrito el consentimiento informado antes de la inscripción en el estudio.

Los pacientes fueron asignados aleatoriamente al grupo de intervención (grupo de rifaximina) o al grupo de control (grupo de lactulosa sola). Ambos grupos recibieron 30-45 ml de jarabe de lactulosa tres veces al día, mientras que al grupo de intervención se le añadió rifaximina 400 mg tres veces al día durante 6 meses. Se administró a los pacientes de ambos grupos otra terapia convencional, incluidos diuréticos, inhibidores de la bomba de protones, ácido ursodesoxicólico y silimarina, de acuerdo con el protocolo del hospital.

Seguimiento del estudio Todos los pacientes reclutados fueron evaluados clínica y bioquímicamente al inicio del estudio y cada 2 semanas durante 6 meses. Conn score, grado de asterixis, cuadro sanguíneo completo con diferencial, bilirrubina sérica (total y directa), aspartato transaminasa sérica (AST) y alanina transaminasa (ALT), fosfatasa alcalina, gamma-glutamiltransferasa (GGT), albúmina sérica, tiempo y concentración de protrombina Se midió urea y creatinina sérica, sodio (Na) y potasio (K) sérico, análisis de orina y heces.

Resultados de eficacia El criterio principal de valoración de eficacia fue el tiempo transcurrido hasta el primer episodio importante de OHE (definido como el tiempo desde la primera dosis del fármaco del estudio hasta un aumento de una puntuación de Conn inicial de 0 o 1 a una puntuación de 2 o más o de una puntuación de Conn inicial de 0 a una puntuación de Conn de 1 más un aumento de 1 unidad en el grado de asterixis.13 La variable secundaria de eficacia fue el tiempo transcurrido hasta la primera hospitalización por EH (definida como hospitalización a causa del trastorno u hospitalización durante la cual se produjo un episodio de EH)14. El porcentaje de supervivencia de los pacientes durante el estudio también se consideró un desenlace secundario.

Resultados de seguridad Se solicitó a todos los pacientes reclutados que informaran cualquier evento adverso experimentado durante el período de estudio. Las visitas a la clínica se realizaron cada 2 semanas hasta el final del período de tratamiento. En las semanas sin visitas clínicas, los pacientes fueron seguidos por llamadas telefónicas.

Resistencia microbiana a la rifaximina Aislamiento de bacterias Gram negativas a partir de muestras clínicas de heces Se recogieron muestras de heces de todos los participantes antes de comenzar el tratamiento y al final del estudio. Se suspendió un gramo de heces en 10 ml de solución salina y se agitó vigorosamente. Se sembró una alícuota de un ml de la suspensión de heces sobre la superficie de placas de agar MacConkey para aislar fermentadores de lactosa gramnegativos. A continuación, las placas se incubaron a 37 ⁰C durante 24 horas. Las colonias rosadas se recogieron y se volvieron a sembrar una vez más, luego se suspendieron en glicerol al 30 % (vol/vol) en caldo de infusión de cerebro y corazón (BHI) y se almacenaron a -80 ⁰C hasta análisis posteriores.

Determinación de la concentración inhibitoria mínima (MIC) de rifaximina para aislados de fermentadores de lactosa Se adoptó un procedimiento de caldo de dilución en serie doble secuencial de acuerdo con las pautas del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI).15 Se prepararon diez diluciones de rifaximina a partir de 256 μg/ml en caldo Muller Hinton (MHB) y se dividieron en alícuotas de 200 μl en los pocillos de una placa de 96 pocillos de fondo redondo. Se incluyó un pozo de control que se preparó usando 200 μl de MHB inoculado con 20 μl del inóculo bacteriano preparado.

El inóculo se preparó ajustando las células de un cultivo durante la noche para que coincidieran con el estándar de McFarland 0,5 (OD600 = 0,125). La suspensión se diluyó adicionalmente 1:20 en MHB y se agregaron 20 μl del inóculo ajustado a cada pocillo. A continuación, las placas se incubaron a 37 °C durante 24 horas. El experimento se repitió dos veces y la concentración más baja de rifaximina que resultó en la inhibición completa del crecimiento visible representó el valor de MIC. Los valores de MIC se consideraron diferentes si diferían en más de una dilución doble.16