Mikrobielle Resistenz von Rifaximin bei hepatischer Enzephalopathie

Methodik Einschluss- und Ausschlusskriterien Zwischen Januar 2015 und Dezember 2018 wurden am National Hepatology and Tropical Medicine Research Institute (NHTMRI), Kairo, Ägypten, Patienten bei vollem Bewusstsein aufgenommen. Die Einschlusskriterien waren Zirrhose aufgrund einer HCV-Infektion, Alter 18 bis 75 Jahre, Auftreten von mindestens einer OHE-Episode und ein MELD-Score ≤ 25,13 Patienten mit neurologischen oder Kommunikationsproblemen, hepatozellulärem Karzinom, Diabetes mellitus, aktiver Infektion, Serumkreatinin > 2 mg/dl, Hg < 8 g/dL, Serum-Na < 125 mmol/L oder Serum-K < 2,5 mmol/L wurden ausgeschlossen. Patienten mit vorheriger Einnahme von Rifaximin als Prophylaxe oder eines anderen Antibiotikums innerhalb des letzten Monats wurden ebenfalls ausgeschlossen.

Studiendesign Das Protokoll dieser offenen, parallelen, prospektiven Interventionsstudie wurde vom Institutional Review Board (IRB) des NHTMRI und dem der Fakultät für Pharmazie der Universität Kairo (CL(1173)) genehmigt. Alle Patienten und/oder Betreuer von Patienten mit schwachen/beeinträchtigten kognitiven und/oder Denkfähigkeiten aufgrund einer früheren HE-Episode wurden konsultiert und erklärt, um vor der Aufnahme in die Studie eine schriftliche Einverständniserklärung abzugeben.

Die Patienten wurden nach dem Zufallsprinzip entweder der Interventionsgruppe (Rifaximin-Gruppe) oder der Kontrollgruppe (Gruppe nur mit Lactulose) zugeteilt. Beide Gruppen erhielten dreimal täglich 30-45 ml Lactulose-Sirup, während die Interventionsgruppe 6 Monate lang dreimal täglich 400 mg Rifaximin erhielt. Andere konventionelle Therapien, einschließlich Diuretika, Protonenpumpenhemmer, Ursodeoxycholsäure und Silymarin, wurden den Patienten in beiden Gruppen gemäß dem Krankenhausprotokoll verabreicht.

Nachbeobachtung der Studie Alle rekrutierten Patienten wurden klinisch und biochemisch zu Studienbeginn und alle 2 Wochen für 6 Monate untersucht. Conn-Score, Asterixis-Grad, komplettes Blutbild mit Differential, Serum-Bilirubin (gesamt und direkt), Serum-Aspartat-Transaminase (AST) und Alanin-Transaminase (ALT), alkalische Phosphatase, Gamma-Glutamyltransferase (GGT), Serumalbumin, Prothrombinzeit und -konzentration , Harnstoff und Serumkreatinin, Serumnatrium (Na) und Kalium (K), Urin- und Stuhlanalyse wurden gemessen.

Wirksamkeitsendpunkte Der primäre Wirksamkeitsendpunkt war die Zeit bis zur ersten Durchbruchsepisode von OHE (definiert als die Zeit von der ersten Dosis des Studienmedikaments bis zu einem Anstieg von einem Ausgangs-Conn-Score von 0 oder 1 auf einen Score von 2 oder mehr oder von ein Ausgangs-Conn-Score von 0 bis zu einem Conn-Score von 1 plus eine Erhöhung um 1 Einheit im Asterixis-Grad.13 Der sekundäre Wirksamkeitsendpunkt war die Zeit bis zum ersten Krankenhausaufenthalt mit HE (definiert als Krankenhausaufenthalt aufgrund der Störung oder Krankenhausaufenthalt, während dessen eine HE-Episode auftrat).14 Der Prozentsatz des Überlebens des Patienten während der Studie wurde ebenfalls als sekundäres Ergebnis angesehen.

Sicherheitsergebnisse Alle rekrutierten Patienten wurden gebeten, alle unerwünschten Ereignisse zu melden, die während des Studienzeitraums aufgetreten sind. Klinikbesuche erfolgten alle 2 Wochen bis zum Ende des Behandlungszeitraums. In Wochen ohne klinische Besuche wurden die Patienten telefonisch nachbeobachtet.

Mikrobielle Resistenz gegen Rifaximin Isolierung gramnegativer Bakterien aus klinischen Stuhlproben Stuhlproben wurden von allen Teilnehmern vor Beginn der Behandlung und am Ende der Studie entnommen. Ein Gramm Stuhl wurde in 10 ml Kochsalzlösung suspendiert und kräftig verwirbelt. Ein ml-Aliquot der Stuhlsuspension wurde auf die Oberfläche von MacConkey-Agarplatten gestrichen, um Gram-negative Lactose-Fermenter zu isolieren. Die Platten wurden dann 24 Stunden lang bei 37&sup0;C inkubiert. Rosafarbene Kolonien wurden entnommen und ein weiteres Mal erneut ausgestrichen, dann in 30 % Glycerol (Vol/Vol) in Gehirn-Herz-Infusionsbrühe (BHI) suspendiert und bis zu weiteren Analysen bei –80 °C gelagert.

Bestimmung der minimalen Hemmkonzentration (MHK) von Rifaximin für Lactosefermenter-Isolate Ein sequenzielles zweifaches Reihenverdünnungs-Bouillonverfahren wurde gemäß den Richtlinien des Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) übernommen.15 Zehn Verdünnungen von Rifaximin wurden ausgehend von 256 &mgr;g/ml in Muller-Hinton-Brühe (MHB) hergestellt und in 200 &mgr;l-Aliquots in die Vertiefungen einer Platte mit 96 Vertiefungen mit rundem Boden verteilt. Eine Kontrollvertiefung wurde eingeschlossen, die unter Verwendung von 200 &mgr;l MHB, geimpft mit 20 &mgr;l des hergestellten bakteriellen Inokulums, hergestellt wurde.

Das Inokulum wurde hergestellt, indem Zellen aus einer Übernachtkultur so eingestellt wurden, dass sie dem McFarland-Standard 0,5 (OD600 = 0,125) entsprachen. Die Suspension wurde weiter 1:20 in MHB verdünnt und 20 &mgr;l des eingestellten Inokulums wurden in jede Vertiefung gegeben. Die Platten wurden dann 24 Stunden lang bei 37°C inkubiert. Das Experiment wurde zweimal wiederholt und die niedrigste Konzentration von Rifaximin, die zu einer vollständigen Hemmung des sichtbaren Wachstums führte, repräsentierte den MIC-Wert. Die MHK-Werte wurden als unterschiedlich angesehen, wenn sie sich um mehr als eine zweifache Verdünnung unterschieden.16