Mikrobiell motstand av Rifaximin ved hepatisk encefalopati

Metodikk Inkluderings- og eksklusjonskriterier Fullt bevisste pasienter ble registrert fra National Hepatology and Tropical Medicine Research Institute (NHTMRI), Kairo, Egypt mellom januar 2015 og desember 2018. Inklusjonskriteriene var skrumplever på grunn av HCV-infeksjon, alder 18 til 75 år, opplevd minst én episode av OHE, og en MELD-score ≤ 25,13 Pasienter med nevrologiske eller kommunikasjonsproblemer, hepatocellulært karsinom, diabetes mellitus, aktiv infeksjon, serumkreatinin > 2 mg/dl, Hg < 8 g/dL, serum Na < 125 mmol/L eller serum K < 2,5 mmol/L ble ekskludert. Pasienter med tidligere inntak av rifaksimin som profylakse eller andre antibiotika i løpet av den siste måneden ble også ekskludert.

Studiedesign Protokollen for denne åpne, parallelle, prospektive intervensjonsstudien ble godkjent av den institusjonelle vurderingskomiteen (IRB) ved NHTMRI og den ved det farmasøytiske fakultetet, Cairo University (CL(1173)). Alle pasienter og/eller pasienters omsorgspersoner for de med svak/svekket kognitiv og/eller tenkeevne på grunn av tidligere episode av HE ble konsultert og forklart for gitt skriftlig informert samtykke før studieregistrering.

Pasientene ble tilfeldig fordelt i enten intervensjonsgruppe (rifaxmingruppe) eller kontrollgruppe (bare laktulosegruppe). Begge gruppene fikk laktulosesirup 30-45 ml tre ganger daglig mens rifaximin 400 mg tre ganger daglig ble lagt til intervensjonsgruppen i 6 måneder. Annen konvensjonell behandling inkludert diuretika, protonpumpehemmere, ursodeoksykolsyre og silymarin ble gitt til pasientene i begge grupper i henhold til sykehusprotokollen.

Studieoppfølging Alle rekrutterte pasienter ble vurdert klinisk og biokjemisk ved baseline og hver 2. uke i 6 måneder. Conn score, asterixis-grad, fullstendig blodbilde med differensial, serumbilirubin (totalt og direkte), serumaspartattransaminase (AST) og alanintransaminase (ALT), alkalisk fosfatase, gamma-glutamyltransferase (GGT), serumalbumin, protrombintid og konsentrasjon , urea og serumkreatinin, serumnatrium (Na) og kalium (K), urin og avføringsanalyse ble målt.

Effektutfall Det primære effektendepunktet var tiden til den første gjennombruddsepisoden av OHE (definert som tiden fra den første dosen av studiemedikamentet til en økning fra en baseline Conn-score på 0 eller 1 til en skåre på 2 eller mer eller fra en baseline Conn-score på 0 til en Conn-score på 1 pluss en økning på 1 enhet i asterixis-graden.13 Det sekundære effektendepunktet var tiden til den første sykehusinnleggelsen som involverte HE (definert som sykehusinnleggelse på grunn av lidelsen eller sykehusinnleggelsen der en episode av HE oppsto).14 Prosentandelen av pasientens overlevelse under studien ble også ansett som et sekundært resultat.

Sikkerhetsresultater Alle rekrutterte pasienter ble bedt om å rapportere alle uønskede hendelser som ble opplevd i løpet av studieperioden. Klinikkbesøk forekom annenhver uke til slutten av behandlingsperioden. I uker uten kliniske besøk ble pasientene fulgt opp med telefonsamtaler.

Rifaximin mikrobiell resistens Isolering av gramnegative bakterier fra kliniske avføringsprøver Avføringsprøver ble samlet inn fra alle deltakerne før behandlingsstart og ved slutten av studien. Ett gram avføring ble suspendert i 10 ml saltvann og virvlet kraftig. En ml alikvot av avføringssuspensjonen ble strøket på overflaten av MacConkey-agarplater for å isolere Gram-negative laktose-fermentorer. Platene ble deretter inkubert ved 37°C i 24 timer. Rosa kolonier ble plukket og strøket på nytt en gang til og deretter suspendert i 30 % glyserol (vol/vol) i Brain Heart Infusion bouillon (BHI) og lagret ved -80 ⁰C inntil videre analyser.

Bestemmelse av minimumshemmende konsentrasjon (MIC) av rifaximin for laktosefermenteringsisolater En sekvensiell to-gangers seriefortynningsbuljongprosedyre ble tatt i bruk i henhold til retningslinjer fra Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).15 Ti fortynninger av rifaximin ble fremstilt med utgangspunkt i 256 μg/ml i Muller Hinton-buljong (MHB) og alikvotert i 200 μl alikvoter i brønnene på en rundbunnet 96-brønners plate. En kontrollbrønn ble inkludert som ble tilberedt ved bruk av 200 μl MHB inokulert med 20 μl av det forberedte bakteriepodestoffet.

Inokulumet ble fremstilt ved å justere celler fra en kultur over natten for å matche McFarland-standarden 0,5 (OD600 = 0,125). Suspensjonen ble ytterligere fortynnet 1:20 i MHB og 20 μl av det justerte inokulum ble tilsatt til hver brønn. Platene ble deretter inkubert ved 37°C i 24 timer. Eksperimentet ble gjentatt to ganger og den laveste konsentrasjonen av rifaximin som resulterte i fullstendig hemming av synlig vekst representerte MIC-verdien. MIC-verdiene ble ansett som forskjellige hvis de var forskjellig med mer enn en to ganger fortynning.16