Resistência Microbiana da Rifaximina na Encefalopatia Hepática

Metodologia Critérios de inclusão e exclusão Pacientes totalmente conscientes foram inscritos no National Hepatology and Tropical Medicine Research Institute (NHTMRI), Cairo, Egito entre janeiro de 2015 e dezembro de 2018. Os critérios de inclusão foram cirrose por infecção pelo HCV, idade de 18 a 75 anos, experiência de pelo menos um episódio de EHO e escore MELD ≤ 25.13 Pacientes com problemas neurológicos ou de comunicação, carcinoma hepatocelular, diabetes mellitus, infecção ativa, creatinina sérica > 2 mg/dl, Hg < 8 g/dL, Na sérico < 125 mmol/L ou K sérico < 2,5 mmol/L foram excluídos. Pacientes com uso prévio de rifaximina como profilaxia ou qualquer antibiótico no último mês também foram excluídos.

Desenho do estudo O protocolo deste estudo intervencional prospectivo, paralelo e aberto foi aprovado pelo conselho de revisão institucional (IRB) do NHTMRI e o da Faculdade de Farmácia da Universidade do Cairo (CL(1173)). Todos os pacientes e/ou cuidadores de pacientes com capacidade cognitiva e/ou de raciocínio fraca/comprometida devido a episódio anterior de EH foram consultados e explicados quanto ao consentimento informado por escrito antes da inscrição no estudo.

Os pacientes foram divididos aleatoriamente em grupo de intervenção (grupo rifaximina) ou grupo controle (grupo apenas lactulose). Ambos os grupos receberam xarope de lactulose 30-45 ml três vezes ao dia, enquanto rifaximina 400 mg três vezes ao dia foi adicionada ao grupo de intervenção por 6 meses. Outra terapia convencional, incluindo diuréticos, inibidores da bomba de prótons, ácido ursodesoxicólico e silimarina, foi administrada aos pacientes de ambos os grupos de acordo com o protocolo hospitalar.

Acompanhamento do estudo Todos os pacientes recrutados foram avaliados clínica e bioquimicamente no início do estudo e a cada 2 semanas durante 6 meses. Escore Conn, grau asterixis, hemograma completo com diferencial, bilirrubina sérica (total e direta), aspartato transaminase sérica (AST) e alanina transaminase (ALT), fosfatase alcalina, gama-glutamiltransferase (GGT), albumina sérica, tempo e concentração de protrombina , ureia e creatinina sérica, sódio (Na) e potássio (K) séricos, análise de urina e fezes foram medidos.

Resultados de eficácia O desfecho primário de eficácia foi o tempo até o primeiro episódio de avanço da OHE (definido como o tempo desde a primeira dose do medicamento do estudo até um aumento de uma pontuação inicial de Conn de 0 ou 1 para uma pontuação de 2 ou mais ou de uma pontuação inicial de Conn de 0 a uma pontuação de Conn de 1 mais um aumento de 1 unidade no grau de asterisco.13 O desfecho secundário de eficácia foi o tempo até a primeira hospitalização envolvendo EH (definida como hospitalização devido ao distúrbio ou hospitalização durante a qual ocorreu um episódio de EH).14 A porcentagem de sobrevida do paciente durante o estudo também foi considerada um desfecho secundário.

Resultados de segurança Todos os pacientes recrutados foram solicitados a relatar qualquer evento adverso ocorrido durante o período do estudo. As visitas clínicas ocorreram a cada 2 semanas até o final do período de tratamento. Nas semanas sem visitas clínicas, os pacientes foram acompanhados por telefonemas.

Isolamento de resistência microbiana à rifaximina de bactérias Gram negativas de amostras clínicas de fezes Amostras de fezes foram coletadas de todos os participantes antes de iniciar o tratamento e no final do estudo. Um grama de fezes foi suspenso em 10 ml de solução salina e vigorosamente agitado em vórtex. Alíquota de um ml da suspensão de fezes foi semeada na superfície de placas de ágar MacConkey para isolar fermentadores de lactose Gram-negativos. As placas foram então incubadas a 37⁰C por 24 horas. As colônias rosa foram colhidas e novamente espalhadas mais uma vez, depois suspensas em glicerol a 30% (vol/vol) em caldo Brain Heart Infusion (BHI) e armazenadas a -80 ⁰C até análises posteriores.

Determinação da concentração inibitória mínima (CIM) de rifaximina para isolados fermentadores de lactose Um procedimento sequencial de caldo de diluição em série dupla foi adotado de acordo com as diretrizes do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).15 Dez diluições de rifaximina foram preparadas a partir de 256 μg/ml em caldo Muller Hinton (MHB) e aliquotadas em alíquotas de 200 μl nos poços de uma placa de 96 poços de fundo redondo. Foi incluído um poço de controle preparado com 200 μl de MHB inoculado com 20 μl do inóculo bacteriano preparado.

O inóculo foi preparado ajustando as células de uma cultura durante a noite para corresponder ao padrão de McFarland 0,5 (OD600 = 0,125). A suspensão foi ainda diluída 1:20 em MHB e 20 μl do inóculo ajustado foram adicionados a cada poço. As placas foram então incubadas a 37°C durante 24 horas. O experimento foi repetido duas vezes e a menor concentração de rifaximina que resultou na inibição completa do crescimento visível representou o valor MIC. Os valores de MIC foram considerados diferentes se diferissem em mais de uma diluição de duas vezes.16