Oporność drobnoustrojów na rifaksyminę w encefalopatii wątrobowej

Metodologia Kryteria włączenia i wyłączenia W pełni świadomi pacjenci zostali włączeni do badania w Narodowym Instytucie Badań nad Hepatologią i Medycyną Tropikalną (NHTMRI), Kair, Egipt, w okresie od stycznia 2015 r. do grudnia 2018 r. Kryteriami włączenia były: marskość wątroby spowodowana zakażeniem HCV, wiek od 18 do 75 lat, co najmniej jeden epizod OHE oraz wynik w skali MELD ≤ 25,13 Pacjenci z problemami neurologicznymi lub komunikacyjnymi, rakiem wątrobowokomórkowym, cukrzycą, aktywnym zakażeniem, stężeniem kreatyniny w surowicy > 2 mg/dl, Hg < 8 g/dl, Na w surowicy < 125 mmol/L lub K w surowicy < 2,5 mmol/L zostały wykluczone. Wykluczono również pacjentów, którzy w ciągu ostatniego miesiąca przyjmowali ryfaksyminę profilaktycznie lub jakikolwiek antybiotyk.

Projekt badania Protokół tego otwartego, równoległego, prospektywnego badania interwencyjnego został zatwierdzony przez instytucjonalną komisję rewizyjną (IRB) NHTMRI i Wydziału Farmaceutycznego Uniwersytetu w Kairze (CL(1173)). Przed włączeniem do badania skonsultowano się ze wszystkimi pacjentami i/lub opiekunami pacjentów ze słabymi/upośledzonymi zdolnościami poznawczymi i/lub myślenia z powodu wcześniejszego epizodu HE i udzielono wyjaśnień w celu uzyskania pisemnej świadomej zgody.

Pacjenci zostali losowo przydzieleni do grupy interwencyjnej (grupa z ryfaksyminą) lub grupy kontrolnej (grupa zawierająca wyłącznie laktulozę). Obie grupy otrzymywały syrop laktulozowy 30-45 ml trzy razy dziennie, a do grupy interwencyjnej dodano ryfaksyminę 400 mg trzy razy dziennie przez 6 miesięcy. Inne konwencjonalne leczenie obejmujące leki moczopędne, inhibitory pompy protonowej, kwas ursodeoksycholowy i sylimarynę podano pacjentom w obu grupach zgodnie z protokołem szpitalnym.

Obserwacja badania Wszyscy zrekrutowani pacjenci byli oceniani klinicznie i biochemicznie na początku badania i co 2 tygodnie przez 6 miesięcy. Wynik Conn, stopień asterixis, pełny obraz krwi z rozmazem, bilirubina w surowicy (całkowita i bezpośrednia), transaminaza asparaginianowa (AST) i transaminaza alaninowa (ALT), fosfataza alkaliczna, gamma-glutamylotransferaza (GGT), albumina w surowicy, czas protrombinowy i stężenie , mocznik i kreatynina w surowicy, sód (Na) i potas (K) w surowicy, analiza moczu i kału.

Wyniki skuteczności Pierwszorzędowym punktem końcowym skuteczności był czas do pierwszego przełomowego epizodu OHE (zdefiniowany jako czas od pierwszej dawki badanego leku do wzrostu od wyjściowego wyniku Conn wynoszącego 0 lub 1 do wyniku 2 lub więcej lub od wyjściowy wynik Conn równy 0 do wyniku Conn równego 1 plus wzrost o 1 jednostkę w ocenie asterixis.13 Drugorzędowym punktem końcowym skuteczności był czas do pierwszej hospitalizacji z powodu HE (zdefiniowanej jako hospitalizacja z powodu zaburzenia lub hospitalizacja, podczas której wystąpił epizod HE)14. Odsetek przeżycia pacjenta podczas badania również uznano za wynik drugorzędny.

Wyniki dotyczące bezpieczeństwa Wszystkich zrekrutowanych pacjentów poproszono o zgłaszanie wszelkich zdarzeń niepożądanych, które wystąpiły w okresie badania. Wizyty w poradni odbywały się co 2 tygodnie do końca okresu leczenia. W tygodniach bez wizyt klinicznych pacjenci byli monitorowani przez telefony.

Oporność drobnoustrojów na rifaksyminę Izolacja bakterii Gram-ujemnych z klinicznych próbek kału Próbki kału pobrano od wszystkich uczestników przed rozpoczęciem leczenia i na końcu badania. Jeden gram kału zawieszono w 10 ml soli fizjologicznej i energicznie worteksowano. Jeden ml zawiesiny kału rozsmarowano na powierzchni płytek z agarem MacConkeya w celu wyizolowania bakterii Gram-ujemnych fermentujących laktozę. Następnie płytki inkubowano w temperaturze 37°C przez 24 godziny. Różowe kolonie zbierano i jeszcze raz pokrywano pasmami, a następnie zawieszano w 30% glicerolu (obj./obj.) w bulionie Brain Heart Infusion (BHI) i przechowywano w temperaturze -80°C do dalszych analiz.

Określenie minimalnego stężenia hamującego (MIC) rifaksyminy dla izolatów fermentujących laktozę Przyjęto procedurę sekwencyjnego dwukrotnego seryjnego rozcieńczania bulionu zgodnie z wytycznymi Instytutu Standardów Klinicznych i Laboratoryjnych (CLSI).15 Przygotowano dziesięć rozcieńczeń rifaksyminy zaczynając od 256 μg/ml w bulionie Mullera Hintona (MHB) i podzielono na porcje po 200 μl w dołkach 96-dołkowej płytki okrągłodennej. Uwzględniono studzienkę kontrolną, którą przygotowano przy użyciu 200 μl MHB zaszczepionego 20 μl przygotowanego inokulum bakteryjnego.

Inokulum przygotowano przez dopasowanie komórek z całonocnej hodowli do standardu McFarlanda 0,5 (OD600 = 0,125). Zawiesinę dalej rozcieńczono 1:20 w MHB i do każdej studzienki dodano 20 μl dostosowanego inokulum. Następnie płytki inkubowano w temperaturze 37°C przez 24 godziny. Eksperyment powtórzono dwukrotnie, a najniższe stężenie rifaksyminy, które powodowało całkowite zahamowanie widocznego wzrostu, reprezentowało wartość MIC. Wartości MIC uznawano za różne, jeśli różniły się o więcej niż dwukrotne rozcieńczenie.16