Résistance microbienne de la rifaximine dans l'encéphalopathie hépatique

Méthodologie Critères d'inclusion et d'exclusion Des patients pleinement conscients ont été recrutés à l'Institut national de recherche en hépatologie et médecine tropicale (NHTMRI), au Caire, en Égypte, entre janvier 2015 et décembre 2018. Les critères d'inclusion étaient une cirrhose due à une infection par le VHC, un âge de 18 à 75 ans, ayant connu au moins un épisode d'OHE, et un score MELD ≤ 25.13 Patients ayant des problèmes neurologiques ou de communication, un carcinome hépatocellulaire, un diabète sucré, une infection active, une créatininémie > 2 mg/dl, Hg < 8 g/dL, Na sérique < 125 mmol/L ou K sérique < 2,5 mmol/L ont été exclus. Les patients ayant déjà pris de la rifaximine en prophylaxie ou tout autre antibiotique au cours du dernier mois ont également été exclus.

Conception de l'étude Le protocole de cette étude interventionnelle prospective, parallèle et ouverte a été approuvé par le comité d'examen institutionnel (IRB) du NHTMRI et celui de la faculté de pharmacie de l'université du Caire (CL(1173)). Tous les patients et/ou les soignants des patients ayant des capacités cognitives et/ou de réflexion faibles/altérées en raison d'un épisode antérieur d'EH ont été consultés et expliqués pour avoir fourni un consentement éclairé écrit avant l'inscription à l'étude.

Les patients ont été répartis au hasard dans le groupe d'intervention (groupe rifaximine) ou dans le groupe témoin (groupe lactulose uniquement). Les deux groupes ont reçu du sirop de lactulose 30 à 45 ml trois fois par jour tandis que de la rifaximine 400 mg trois fois par jour a été ajoutée au groupe d'intervention pendant 6 mois. D'autres traitements conventionnels comprenant des diurétiques, des inhibiteurs de la pompe à protons, de l'acide ursodésoxycholique et de la silymarine ont été administrés aux patients des deux groupes selon le protocole hospitalier.

Suivi de l'étude Tous les patients recrutés ont été évalués cliniquement et biochimiquement au départ et toutes les 2 semaines pendant 6 mois. Score de Conn, grade d'astérixis, bilan sanguin complet avec différentiel, bilirubine sérique (totale et directe), aspartate transaminase (AST) et alanine transaminase (ALT), phosphatase alcaline, gamma-glutamyltransférase (GGT), albumine sérique, temps et concentration de prothrombine , l'urée et la créatinine sérique, le sodium sérique (Na) et le potassium (K), l'analyse des urines et des selles ont été mesurés.

Critères d'évaluation de l'efficacité Le critère principal d'évaluation de l'efficacité était le temps jusqu'au premier épisode de percée d'OHE (défini comme le temps entre la première dose du médicament à l'étude et une augmentation d'un score de Conn de base de 0 ou 1 à un score de 2 ou plus ou de un score de Conn de base de 0 à un score de Conn de 1 plus une augmentation d'une unité du grade d'astérixis.13 Le critère secondaire d'évaluation de l'efficacité était le délai jusqu'à la première hospitalisation impliquant une EH (définie comme une hospitalisation en raison du trouble ou une hospitalisation au cours de laquelle un épisode d'EH s'est produit)14. Le pourcentage de survie du patient au cours de l'étude a également été considéré comme un résultat secondaire.

Résultats d'innocuité Tous les patients recrutés ont été invités à signaler tout événement indésirable survenu au cours de la période d'étude. Les visites à la clinique ont eu lieu toutes les 2 semaines jusqu'à la fin de la période de traitement. Les semaines sans visites cliniques, les patients étaient suivis par téléphone.

Résistance microbienne à la rifaximine Isolement de bactéries Gram négatives à partir d'échantillons cliniques de selles Des échantillons de selles ont été prélevés chez tous les participants avant le début du traitement et à la fin de l'étude. Un gramme de selles a été mis en suspension dans 10 ml de solution saline et vortexé vigoureusement. Un aliquote de ml de la suspension de selles a été strié sur la surface des plaques de gélose MacConkey pour isoler les fermenteurs de lactose Gram-négatifs. Les plaques ont ensuite été incubées à 37⁰C pendant 24 heures. Les colonies roses ont été prélevées et re-striées une fois de plus, puis mises en suspension dans du glycérol à 30 % (vol/vol) dans un bouillon d'infusion cœur-cervelle (BHI) et stockées à -80 °C jusqu'à d'autres analyses.

Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) de rifaximine pour les isolats de fermenteur de lactose Une procédure séquentielle de bouillon de dilution en série double a été adoptée conformément aux directives du Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).15 Dix dilutions de rifaximine ont été préparées à partir de 256 µg/ml dans du bouillon Muller Hinton (MHB) et aliquotées par aliquotes de 200 µl dans les puits d'une plaque 96 puits à fond rond. Un puits témoin a été inclus qui a été préparé en utilisant 200 ul de MHB inoculé avec 20 ul de l'inoculum bactérien préparé.

L'inoculum a été préparé en ajustant les cellules d'une culture d'une nuit pour correspondre à la norme McFarland 0,5 (OD600 = 0,125). La suspension a ensuite été diluée à 1:20 dans du MHB et 20 μl de l'inoculum ajusté ont été ajoutés à chaque puits. Les plaques ont ensuite été incubées à 37°C pendant 24 heures. L'expérience a été répétée deux fois et la plus faible concentration de rifaximine qui a entraîné une inhibition complète de la croissance visible représentait la valeur MIC. Les valeurs de CMI étaient considérées comme différentes si elles différaient de plus d'une dilution au double.16