评估 EVOO 对脂质参数影响的多中心试点研究 (EVOO)

学习规划：

一项多中心、双盲试验研究，以确定特级初榨橄榄油 (EVOO) 是否对诊断为心血管疾病 (CVD) 的受试者的高密度脂蛋白胆固醇水平和抗炎标志物有积极影响，并确定多酚浓度是否为与这些影响成正比。 受试者将完成连续 28 天的时间段（中间有 14 天的清除期），在此期间他们将每天食用低多酚浓度的 EVOO 或高多酚浓度的 EVOO。 以双盲的方式，每个受试者将是他或她自己的对照，在研究期间有 14 天的清除期。

假设：

通过在饮食中添加 EVOO，受试者将在 HDL 胆固醇水平、其他脂质参数和炎症标志物方面表现出更大的改善。 食用多酚浓度高的 EVOO 比食用多酚浓度低的 EVOO 更能改善这些参数。

具体目标：

1. 确定每天食用 EVOO 是否会在 28 天后增加高密度脂蛋白胆固醇水平。
2. 确定每天食用高多酚浓度的 EVOO 是否比低多酚浓度的 EVOO（相同剂量）增加高密度脂蛋白胆固醇水平。
3. 确定此类研究的可行性以及在更长时间内进行更大规模研究的可能性。

学习方法：

在招募受试者之前，研究人员将通过医院营养服务部门订购通用品牌 EVOO。 同时，将从当地一家橄榄油专卖店订购多酚含量高的 EVOO。

橄榄油测试：Eurofins Microbiology Laboratories, Inc. 将在分配前测试每批橄榄油的样品中的多酚浓度。 该方法基于通过甲醇溶液从橄榄油中直接提取生物酚类次要极性化合物，然后通过 HPLC-MS/MS 进行定量。 市售的多酚标准品用于识别和量化单个酚类化合物，重点关注橄榄油中含量最高的那些。

研究对象血液测试：将在五次不同的研究访问中获得大约 20 毫升的血液，在 12 周内总共获得 100 毫升的血液。

在补充橄榄油之前采集基线血清和血浆血液样本。 将在其他四个时间点采集后续血样。

缅因州医学中心研究所 (MMCRI) 的质谱核心将评估血清总脂质谱。 此外，炎症标志物，包括 CRP、IL-6 和 TNFalpha，将通过酶联免疫吸附测定 (ELISA) 进行测定。 将通过将 10 毫升血液收集到红色带盖试管中来制备血清。 血液将在室温下凝固 15-20 分钟，然后以 1500-2000g 离心，吸取上清液并冷冻保存在 -65ºC。 血浆样品将从收集到 10 ml ACD（柠檬酸葡萄糖）抗凝剂管中的 6 ml 血液制备，并在 1 小时内处理。 白细胞部分将通过在 1,500-2000g 下离心 15 分钟来制备。 中间层的白细胞将被移走并在 -60ºC 下冷冻保存。 研究人员将确定白细胞的脂质组学特征以及 caveolin-1 蛋白水平。

测试总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和甘油三酯的脂质面板将在当地实验室对剩余的血液样本进行检测。 所有与血液检测相关的费用将由 MaineHealth Cardiology Service Line 提供的研究资金支付。

其他研究措施： 每次就诊时将测量生命体征，包括体重、血压和心率。

受试者将保留一份研究日记，记录每份 EVOO 剂量。 他们将被要求在研究小组给他们的杯子中量出 1 盎司橄榄油，然后将其与面包、冰沙一起食用，或直接饮用。 EVOO 消费的遵守情况将从日志中计算出来（%）。 研究依从性也将通过退回产品的盎司数 (%) 来衡量。 受试者接受 30 盎司的 EVOO 以覆盖 28 天，因此，每个研究组后返回的 2 盎司橄榄油将被视为 100% 的依从性。

样本量注意事项：

由于这是一项试点研究，研究人员利用文献中可用的数据来估计样本量。 一项评估 HDL 对老年人预期寿命影响的研究报告称，在 85 岁以上的受试者中，平均 HDL 为 47.5，标准差为 12.1。 使用这个估计，并预期在两个研究组之间发现 HDL 的 3 点差异，研究人员需要招募 276 名参与者。 然而，由于这是一项试点研究，研究人员的资金有限，他们将从招募 90 名受试者开始。 随着未来从赠款中获得额外资金，该研究可以扩大，以达到 80% 的预期功效。

数据分析：

出于本研究的目的，研究人员将尝试检测食用低多酚浓度和高多酚浓度 EVOO 的受试者的 HDL 和其他心血管健康生物标志物的差异。 医疗记录编号不会包含在数据集中进行分析。 描述性统计将用于总结研究中受试者的人口统计学和临床​​特征，连续变量表示为平均值±标准差，分类变量表示为频率/占总数的百分比。 将进行学生 t 检验和卡方检验，以比较低和高多酚 EVOO 组之间的数据。 将生成时间序列图，以通过消耗的多酚水平证明 HDL 随时间的变化。