Um estudo piloto multicêntrico para avaliar o efeito do EVOO nos parâmetros lipídicos (EVOO)

Design de estudo:

Um estudo piloto duplo-cego multicêntrico para determinar se o azeite de oliva extra virgem (EVOO) tem um efeito positivo nos níveis de colesterol HDL e marcadores anti-inflamatórios para indivíduos diagnosticados com doença cardiovascular (DCV) e para determinar se a concentração de polifenóis é proporcional a esses efeitos. Os indivíduos completarão períodos consecutivos de 28 dias (com uma pausa de 14 dias entre eles) nos quais consumirão EVOO de baixa concentração de polifenol diariamente ou EVOO de alta concentração de polifenol. De maneira duplo-cega, cada sujeito será seu próprio controle com uma pausa de 14 dias entre os períodos de estudo.

Hipótese:

Os indivíduos demonstrarão maiores melhorias nos níveis de colesterol HDL, outros parâmetros lipídicos e marcadores inflamatórios adicionando EVOO às suas dietas. O consumo de EVOO com alta concentração de polifenóis melhorará esses parâmetros mais do que o consumo de EVOO com baixa concentração de polifenóis.

Objetivos Específicos:

1. Determinar se o consumo diário de EVOO aumentará os níveis de colesterol HDL após 28 dias.
2. Determinar se o consumo diário de EVOO com alta concentração de polifenóis aumenta os níveis de colesterol HDL mais do que EVOO com baixa concentração de polifenóis (mesma dosagem).
3. Para determinar a viabilidade deste tipo de estudo e a possibilidade de um estudo maior durante um período de tempo mais longo.

Métodos de estudo:

Antes de inscrever os indivíduos, a equipe do estudo solicitará um EVOO de marca genérica por meio do departamento de serviços nutricionais do hospital. Ao mesmo tempo, o EVOO com uma alta concentração de polifenóis será encomendado em uma loja especializada em azeite local.

Teste de azeite: Eurofins Microbiology Laboratories, Inc. testará uma amostra de cada lote de azeite para a concentração de polifenóis antes da distribuição. O método baseia-se na extração direta dos compostos polares minoritários biofenólicos do azeite por meio de uma solução de metanol e posterior quantificação por HPLC-MS/MS. Padrões de polifenóis disponíveis comercialmente são usados ​​para identificar e quantificar compostos fenólicos individuais, com foco naqueles mais abundantes em azeites.

Exame de sangue do sujeito do estudo: Aproximadamente 20 ml de sangue serão obtidos em cinco visitas de estudo diferentes para um total de 100 ml de sangue ao longo de 12 semanas.

Amostras de sangue de soro e plasma de linha de base serão coletadas antes da suplementação de azeite. Amostras de sangue de acompanhamento serão coletadas em outros quatro pontos de tempo.

Os perfis lipídicos totais séricos serão avaliados no núcleo de espectrometria de massa no Maine Medical Center Research Institute (MMCRI). Adicionalmente, marcadores inflamatórios, incluindo PCR, IL-6 e TNFalfa, serão determinados por ensaio imunoenzimático (ELISA). O soro será preparado coletando 10 ml de sangue em tubos de tampa vermelha. O sangue será coagulado por 15-20 minutos em temperatura ambiente e então centrifugado a 1500 - 2000g, e o sobrenadante pipetado e armazenado congelado a -65ºC. Amostras de plasma serão preparadas a partir de 6 ml de sangue coletadas em tubos de 10 ml de anticoagulante ACD (Acid Citrate Dextrose) e processadas em 1h. A fração de leucócitos será preparada por centrifugação a 1.500-2.000g por 15 minutos. A camada intermediária de glóbulos brancos será retirada com pipeta e armazenada congelada a -60ºC. Os investigadores determinarão os perfis lipidômicos dos glóbulos brancos, bem como os níveis de proteína caveolina-1.

Painéis lipídicos, que testam colesterol total, HDL, LDL e triglicerídeos, serão executados em amostras de sangue remanescentes no laboratório local. Todos os custos associados a exames de sangue serão pagos com fundos de estudo da MaineHealth Cardiology Service Line.

Outras medidas do estudo: Os sinais vitais, incluindo peso corporal, pressão arterial e frequência cardíaca, serão medidos em cada visita.

Os indivíduos manterão um diário de estudo documentando cada dose de EVOO. Eles serão solicitados a medir 1 onça de azeite em um copo dado a eles pela equipe de estudo e consumi-lo com pão, em um smoothie ou bebendo puro. O cumprimento do consumo de EVOO será calculado a partir da diária (%). A conformidade do estudo também será medida por onças de produto devolvido (%). Os indivíduos recebem 30 onças de EVOO para cobrir 28 dias, portanto, 2 onças de azeite devolvido após cada braço do estudo serão contadas como 100% de conformidade.

Considerações sobre o tamanho da amostra:

Como este é um estudo piloto, os investigadores utilizaram dados disponíveis na literatura para estimar o tamanho da amostra. Um estudo avaliando o efeito do HDL na expectativa de vida dos idosos relatou um HDL médio de 47,5 com um desvio padrão de 12,1 entre indivíduos que viveram mais de 85 anos. Usando essa estimativa e esperando encontrar uma diferença de 3 pontos no HDL entre os dois grupos de estudo, os pesquisadores precisam recrutar 276 participantes. No entanto, como este é um estudo piloto e os investigadores têm financiamento limitado, eles começarão recrutando 90 indivíduos. Com financiamento adicional garantido por uma bolsa no futuro, o estudo poderia ser expandido para atingir o poder desejado de 80%.

Análise de dados:

Para o propósito deste estudo, os investigadores tentarão detectar diferenças no HDL e outros biomarcadores de saúde cardiovascular em indivíduos que consumiram EVOO de baixa concentração de polifenóis versus alta concentração de polifenóis. Números de registros médicos não serão incluídos no conjunto de dados para análise. A estatística descritiva será utilizada para resumir as características demográficas e clínicas dos sujeitos incluídos no estudo, com variáveis ​​contínuas apresentadas como média +- desvio padrão e variáveis ​​categóricas como frequências/porcentagens do total. Os testes t de Student e qui-quadrado serão realizados para comparar os dados entre os grupos EVOO de polifenol baixo vs. alto. Um gráfico de série temporal será gerado para demonstrar a mudança no HDL ao longo do tempo por nível de polifenol consumido.