Wieloośrodkowe badanie pilotażowe oceniające wpływ EVOO na parametry lipidowe (EVOO)

Projekt badania:

Wieloośrodkowe, podwójnie ślepe badanie pilotażowe mające na celu określenie, czy oliwa z oliwek z pierwszego tłoczenia (EVOO) ma pozytywny wpływ na poziom cholesterolu HDL i markery przeciwzapalne u osób, u których zdiagnozowano chorobę sercowo-naczyniową (CVD), oraz określenie, czy stężenie polifenoli jest proporcjonalne do tych skutków. Pacjenci ukończą kolejne 28-dniowe okresy (z 14-dniową przerwą między nimi), w których będą codziennie spożywać EVOO o niskim stężeniu polifenoli lub EVOO o wysokim stężeniu polifenoli. W metodzie podwójnie ślepej próby każdy pacjent będzie stanowił swoją własną kontrolę z 14-dniowym okresem wymywania między okresami badania.

Hipoteza:

Pacjenci wykażą większą poprawę poziomu cholesterolu HDL, innych parametrów lipidowych i markerów stanu zapalnego poprzez dodanie EVOO do swojej diety. Spożycie EVOO o wysokim stężeniu polifenoli poprawi te parametry bardziej niż spożycie EVOO o niskim stężeniu polifenoli.

Cele szczegółowe:

1. Aby ustalić, czy codzienne spożywanie EVOO zwiększy poziom cholesterolu HDL po 28 dniach.
2. Aby określić, czy dzienne spożycie EVOO o wysokim stężeniu polifenoli zwiększa poziom cholesterolu HDL bardziej niż EVOO o niskim stężeniu polifenoli (takie samo dawkowanie).
3. Aby określić wykonalność tego typu badań i możliwość większego badania w dłuższym okresie.

Metody nauki:

Przed zapisaniem pacjentów personel badawczy zamówi lek generyczny EVOO za pośrednictwem szpitalnego działu usług żywieniowych. Jednocześnie EVOO o zgłoszonym wysokim stężeniu polifenoli zostanie zamówione w lokalnym specjalistycznym sklepie z oliwą z oliwek.

Badanie oliwy z oliwek: Eurofins Microbiology Laboratories, Inc. przetestuje próbkę każdej partii oliwy z oliwek pod kątem stężenia polifenoli przed jej wydaniem. Metoda opiera się na bezpośredniej ekstrakcji biofenolowych drugorzędnych związków polarnych z oliwy z oliwek za pomocą roztworu metanolu, a następnie oznaczaniu ilościowym za pomocą HPLC-MS/MS. Dostępne na rynku standardy polifenoli służą do identyfikacji i oznaczania ilościowego poszczególnych związków fenolowych, koncentrując się na tych, które występują w największej ilości w oliwie z oliwek.

Badanie krwi osoby badanej: Około 20 ml krwi zostanie pobrane podczas pięciu różnych wizyt badawczych, co daje łącznie 100 ml krwi w ciągu 12 tygodni.

Przed suplementacją oliwy z oliwek zostaną pobrane podstawowe próbki krwi i surowicy. Kolejne próbki krwi zostaną pobrane w czterech innych punktach czasowych.

Całkowite profile lipidów w surowicy zostaną ocenione w rdzeniu spektrometrii mas w Maine Medical Center Research Institute (MMCRI). Dodatkowo markery stanu zapalnego, w tym CRP, IL-6 i TNFalfa, zostaną oznaczone za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA). Surowica zostanie przygotowana poprzez pobranie 10 ml krwi do probówek z czerwonym korkiem. Krew pozostawia się do koagulacji przez 15-20 minut w temperaturze pokojowej, a następnie odwirowuje przy 1500 - 2000 g, a supernatant odpipetowuje i przechowuje w stanie zamrożonym w temperaturze -65ºC. Próbki osocza zostaną przygotowane z 6 ml krwi pobranej do 10 ml probówek z antykoagulantem ACD (kwaśny cytrynian dekstrozy) i przetworzone w ciągu 1 godziny. Frakcja białych krwinek zostanie przygotowana przez wirowanie przy 1500-2000 g przez 15 minut. Środkowa warstwa krwinek białych zostanie odpipetowana i przechowywana w stanie zamrożonym w temperaturze -60ºC. Badacze określą profile lipidomiczne białych krwinek, a także poziomy białka kaweoliny-1.

Panele lipidowe, które badają całkowity cholesterol, HDL, LDL i trójglicerydy, zostaną uruchomione na pozostałych próbkach krwi w lokalnym laboratorium. Wszystkie koszty związane z badaniem krwi zostaną pokryte ze środków na badania z MaineHealth Cardiology Service Line.

Inne pomiary w ramach badania: Podczas każdej wizyty będą mierzone parametry życiowe, w tym masa ciała, ciśnienie krwi i częstość akcji serca.

Pacjenci będą prowadzić dziennik badań dokumentujący każdą dawkę EVOO. Zostaną poproszeni o odmierzenie 1 uncji oliwy z oliwek w filiżance otrzymanej od zespołu badawczego i spożycie jej z chlebem, w koktajlu lub do wypicia. Zgodność ze zużyciem EVOO zostanie obliczona z dzienniczka (%). Zgodność z badaniami będzie również mierzona liczbą zwróconych uncji produktu (%). Uczestnicy otrzymują 30 uncji EVOO na 28 dni, dlatego 2 uncje oliwy z oliwek zwrócone po każdej grupie badawczej będą liczone jako 100% zgodności.

Uwagi dotyczące wielkości próbki:

Ponieważ jest to badanie pilotażowe, badacze wykorzystali dane dostępne w literaturze do oszacowania wielkości próby. Badanie oceniające wpływ HDL na oczekiwaną długość życia w starszym wieku wykazało, że średni HDL wynosił 47,5 przy odchyleniu standardowym 12,1 wśród osób, które dożyły ponad 85 lat. Korzystając z tego oszacowania i przewidując znalezienie 3-punktowej różnicy w HDL między dwiema grupami badawczymi, badacze muszą zrekrutować 276 uczestników. Ponieważ jednak jest to badanie pilotażowe, a badacze mają ograniczone fundusze, rozpoczną od rekrutacji 90 osób. Dzięki dodatkowemu finansowaniu z grantu w przyszłości, badanie mogłoby zostać rozszerzone, aby osiągnąć pożądaną moc 80%.

Analiza danych:

Na potrzeby tego badania badacze spróbują wykryć różnice w HDL i innych biomarkerach zdrowia układu sercowo-naczyniowego u osób, które spożywały zarówno niskie stężenie polifenoli, jak i wysokie stężenie polifenoli EVOO. Numery dokumentacji medycznej nie zostaną uwzględnione w zbiorze danych do analizy. Statystyki opisowe zostaną wykorzystane do podsumowania cech demograficznych i klinicznych pacjentów włączonych do badania, ze zmiennymi ciągłymi przedstawionymi jako średnia ± odchylenie standardowe i zmiennymi kategorialnymi jako częstości/procenty całości. Testy t-Studenta i testy chi-kwadrat zostaną przeprowadzone w celu porównania danych między grupami EVOO o niskim i wysokim poziomie polifenoli. Zostanie wygenerowany wykres szeregów czasowych w celu zademonstrowania zmiany HDL w czasie w zależności od poziomu spożytego polifenolu.