En multicenterpilotundersøgelse for at evaluere effekten af ​​EVOO på lipidparametre (EVOO)

Studere design:

Et multicenter, dobbeltblindet pilotstudie for at bestemme, om ekstra jomfru olivenolie (EVOO) har en positiv effekt på HDL-kolesterolniveauer og antiinflammatoriske markører for forsøgspersoner diagnosticeret med hjerte-kar-sygdom (CVD) og for at bestemme, om polyphenolkoncentrationen er proportional med disse effekter. Forsøgspersoner vil gennemføre på hinanden følgende 28-dages perioder (med en 14-dages udvaskning imellem), hvor de enten vil indtage den lave polyphenolkoncentration EVOO dagligt eller den høje polyphenolkoncentration EVOO. På en dobbeltblindet måde vil hver forsøgsperson være hans eller hendes egen kontrol med en 14-dages udvaskning mellem undersøgelsesperioderne.

Hypotese:

Forsøgspersoner vil demonstrere større forbedringer i HDL-kolesterolniveauer, andre lipidparametre og inflammatoriske markører ved at tilføje EVOO til deres diæter. Indtagelse af EVOO med høj polyphenolkoncentration vil forbedre disse parametre mere end forbrug af EVOO med lav polyphenolkoncentration.

Specifikke mål:

1. For at afgøre, om dagligt forbrug af EVOO vil øge HDL-kolesterolniveauet efter 28 dage.
2. For at bestemme, om dagligt forbrug af høj polyphenolkoncentration EVOO øger HDL-kolesterolniveauet mere end EVOO med en lav polyphenolkoncentration (samme dosering).
3. At bestemme gennemførligheden af ​​denne type undersøgelse og muligheden for en større undersøgelse over en længere periode.

Undersøgelsesmetoder:

Forud for tilmelding af forsøgspersoner vil undersøgelsespersonalet bestille et generisk mærke EVOO gennem hospitalets ernæringsafdeling. Samtidig vil EVOO med en rapporteret høj polyphenol koncentration blive bestilt fra en lokal olivenolie specialbutik.

Olivenolietestning: Eurofins Microbiology Laboratories, Inc. vil teste en prøve af hver batch olivenolie for polyphenolkoncentration før dispensering. Metoden er baseret på direkte ekstraktion af de biophenoliske mindre polære forbindelser fra olivenolie ved hjælp af en methanolopløsning og efterfølgende kvantificering ved HPLC-MS/MS. Kommercielt tilgængelige polyphenolstandarder bruges til at identificere og kvantificere individuelle phenolforbindelser med fokus på dem, der er mest udbredt i olivenolier.

Blodprøver fra forsøgspersonen: Der vil blive opnået cirka 20 ml blod ved fem forskellige studiebesøg for i alt 100 ml blod over 12 uger.

Baseline serum- og plasmablodprøver vil blive taget før olivenolietilskud. Der vil blive taget opfølgende blodprøver på fire andre tidspunkter.

Serums totale lipidprofiler vil blive evalueret i massespektrometrikernen ved Maine Medical Center Research Institute (MMCRI). Derudover vil inflammatoriske markører, herunder CRP, IL-6 og TNFalpha, blive bestemt ved enzym-linked immunosorbent assay (ELISA). Serum vil blive fremstillet ved at opsamle 10 ml blod i røde hætteglas. Blod får lov til at koagulere i 15-20 minutter ved stuetemperatur og centrifugeres derefter ved 1500 - 2000 g, og supernatanten pipetteres af og opbevares frosset ved -65 ºC. Plasmaprøver vil blive forberedt fra 6 ml blod opsamlet i 10 ml ACD (Acid Citrate Dextrose) antikoagulantrør og behandlet inden for 1 time. Fraktionen af ​​hvide blodlegemer vil blive fremstillet ved centrifugering ved 1.500-2000 g i 15 minutter. Det mellemste lag af hvide blodlegemer vil blive pipetteret af og opbevaret frosset ved -60ºC. Efterforskerne vil bestemme de lipidomiske profiler af hvide blodlegemer såvel som caveolin-1 proteinniveauer.

Lipidpaneler, som tester totalt kolesterol, HDL, LDL og triglycerider, vil blive kørt på resterende blodprøver på det lokale laboratorium. Alle omkostninger forbundet med blodprøver vil blive betalt med studiemidler fra MaineHealth Cardiology Service Line.

Andre undersøgelsesforanstaltninger: Vitale tegn inklusive kropsvægt, blodtryk og hjertefrekvens vil blive målt ved hvert besøg.

Forsøgspersonerne vil føre en undersøgelsesdagbog, der dokumenterer hver dosis af EVOO. De vil blive bedt om at måle 1 ounce olivenolie i en kop givet dem af studieholdet og indtage det med brød, i en smoothie eller ved at drikke det almindeligt. Overholdelse af EVOO-forbrug vil blive beregnet ud fra dagbogen (%). Undersøgelsesoverholdelse vil også blive målt ved ounces returneret produkt (%). Forsøgspersonerne modtager 30 ounces EVOO til at dække 28 dage, derfor vil 2 ounces returneret olivenolie efter hver undersøgelsesarm blive talt som 100 % overensstemmelse.

Overvejelser om prøvestørrelse:

Da dette er et pilotstudie, brugte efterforskerne de tilgængelige data i litteraturen til at estimere stikprøvestørrelsen. En undersøgelse, der evaluerede effekten af ​​HDL på den forventede levealder i en ældre alder, rapporterede en gennemsnitlig HDL på 47,5 med en standardafvigelse på 12,1 blandt forsøgspersoner, der blev ældre end 85 år. Ved at bruge dette skøn og forudse at finde en forskel på 3 point i HDL blandt de to undersøgelsesgrupper, skal efterforskerne rekruttere 276 deltagere. Men da dette er en pilotundersøgelse, og efterforskerne har begrænset finansiering, vil de starte med at rekruttere 90 forsøgspersoner. Med yderligere midler sikret fra en bevilling i fremtiden vil undersøgelsen kunne udvides for at opnå den ønskede effekt på 80 %.

Dataanalyse:

Til formålet med denne undersøgelse vil efterforskerne forsøge at påvise forskelle i HDL og andre biomarkører for kardiovaskulær sundhed hos forsøgspersoner, der indtog både lav polyphenolkoncentration versus høj polyphenolkoncentration EVOO. Lægejournalnumre vil ikke indgå i datasættet til analyse. Beskrivende statistik vil blive brugt til at opsummere de demografiske og kliniske karakteristika for forsøgspersoner inkluderet i undersøgelsen, med kontinuerte variable præsenteret som en gennemsnitlig +- standardafvigelse og kategoriske variabler som frekvenser/procenter af totalen. Student t-tests og chi-kvadrat-tests vil blive udført for at sammenligne data mellem EVOO-grupperne med lav vs. høj polyphenol. Et tidsserieplot vil blive genereret for at demonstrere ændringen i HDL over tid efter niveau af forbrugt polyphenol.