Un estudio piloto multicéntrico para evaluar el efecto del AOVE en los parámetros de lípidos (EVOO)

Diseño del estudio:

Un estudio piloto multicéntrico, doble ciego para determinar si el aceite de oliva virgen extra (AOVE) tiene un efecto positivo en los niveles de colesterol HDL y marcadores antiinflamatorios para sujetos diagnosticados con enfermedad cardiovascular (ECV) y para determinar si la concentración de polifenoles es proporcional a esos efectos. Los sujetos completarán períodos consecutivos de 28 días (con un lavado de 14 días entre ellos) en los que consumirán diariamente el AOVE con baja concentración de polifenoles o el AOVE con alta concentración de polifenoles. De manera doble ciego, cada sujeto será su propio control con un lavado de 14 días entre los períodos de estudio.

Hipótesis:

Los sujetos demostrarán mayores mejoras en los niveles de colesterol HDL, otros parámetros de lípidos y marcadores inflamatorios al agregar AOVE a sus dietas. El consumo de AOVE con alta concentración de polifenoles mejorará estos parámetros más que el consumo de AOVE con baja concentración de polifenoles.

Objetivos específicos:

1. Determinar si el consumo diario de AOVE aumentará los niveles de colesterol HDL a los 28 días.
2. Determinar si el consumo diario de AOVE de alta concentración de polifenoles aumenta más los niveles de colesterol HDL que el AOVE de baja concentración de polifenoles (misma dosificación).
3. Determinar la factibilidad de este tipo de estudio y la posibilidad de un estudio más grande durante un período de tiempo más largo.

Métodos de estudio:

Antes de inscribir a los sujetos, el personal del estudio pedirá un AOVE de marca genérica a través del departamento de servicios de nutrición del hospital. Al mismo tiempo, se ordenará AOVE con una alta concentración de polifenoles en una tienda local especializada en aceite de oliva.

Análisis de aceite de oliva: Eurofins Microbiology Laboratories, Inc. analizará una muestra de cada lote de aceite de oliva para determinar la concentración de polifenoles antes de dispensarlo. El método se basa en la extracción directa de los compuestos polares minoritarios biofenólicos del aceite de oliva mediante una solución de metanol y posterior cuantificación por HPLC-MS/MS. Los estándares de polifenoles disponibles comercialmente se utilizan para identificar y cuantificar compuestos fenólicos individuales, centrándose en los más abundantes en los aceites de oliva.

Análisis de sangre del sujeto del estudio: se obtendrán aproximadamente 20 ml de sangre en cinco visitas de estudio diferentes para un total de 100 ml de sangre durante 12 semanas.

Se tomarán muestras de sangre de suero y plasma de referencia antes de la suplementación con aceite de oliva. Se tomarán muestras de sangre de seguimiento en otros cuatro momentos.

Los perfiles de lípidos totales en suero se evaluarán en el núcleo de espectrometría de masas del Instituto de Investigación del Centro Médico de Maine (MMCRI). Además, los marcadores inflamatorios, incluidos CRP, IL-6 y TNFalpha, se determinarán mediante ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). El suero se preparará recolectando 10 ml de sangre en tubos con tapa roja. Se permitirá que la sangre se coagule durante 15-20 minutos a temperatura ambiente y luego se centrifugará a 1500 - 2000 g, y el sobrenadante se pipeteará y almacenará congelado a -65ºC. Las muestras de plasma se prepararán a partir de 6 ml de sangre recogida en tubos de anticoagulante ACD (ácido citrato dextrosa) de 10 ml y se procesarán en 1 hora. La fracción de glóbulos blancos se preparará mediante centrifugación a 1500-2000 g durante 15 minutos. La capa intermedia de glóbulos blancos se pipeteará y se almacenará congelada a -60ºC. Los investigadores determinarán los perfiles lipidómicos de los glóbulos blancos, así como los niveles de proteína caveolina-1.

Los paneles de lípidos, que evalúan el colesterol total, HDL, LDL y triglicéridos, se realizarán en las muestras de sangre restantes en el laboratorio local. Todos los costos asociados con los análisis de sangre se pagarán con fondos del estudio de la línea de servicios de cardiología de MaineHealth.

Otras medidas del estudio: En cada visita se medirán los signos vitales, incluidos el peso corporal, la presión arterial y la frecuencia cardíaca.

Los sujetos mantendrán un diario de estudio que documente cada dosis de AOVE. Se les pedirá que midan 1 onza de aceite de oliva en una taza que les entregó el equipo de estudio y que lo consuman con pan, en un batido o bebiéndolo solo. El cumplimiento del consumo de AOVE se calculará a partir del diario (%). El cumplimiento del estudio también se medirá por onzas de producto devuelto (%). Los sujetos reciben 30 onzas de AOVE para cubrir 28 días, por lo tanto, 2 onzas de aceite de oliva devuelto después de cada brazo de estudio se contarán como 100 % de cumplimiento.

Consideraciones sobre el tamaño de la muestra:

Como se trata de un estudio piloto, los investigadores utilizaron datos disponibles en la literatura para estimar el tamaño de la muestra. Un estudio que evaluó el efecto del HDL en la esperanza de vida a una edad más avanzada informó un HDL medio de 47,5 con una desviación estándar de 12,1 entre los sujetos que vivieron más de 85 años. Usando esta estimación y anticipando encontrar una diferencia de 3 puntos en HDL entre los dos grupos de estudio, los investigadores necesitan reclutar a 276 participantes. Sin embargo, dado que se trata de un estudio piloto y los investigadores tienen fondos limitados, comenzarán reclutando a 90 sujetos. Con financiación adicional asegurada de una subvención en el futuro, el estudio podría ampliarse para lograr la potencia deseada del 80 %.

Análisis de los datos:

A los fines de este estudio, los investigadores intentarán detectar diferencias en HDL y otros biomarcadores de salud cardiovascular en sujetos que consumieron AOVE con baja concentración de polifenoles y con alta concentración de polifenoles. Los números de registros médicos no se incluirán en el conjunto de datos para el análisis. Se utilizará estadística descriptiva para resumir las características demográficas y clínicas de los sujetos incluidos en el estudio, presentándose las variables continuas como media +- desviación estándar y las variables categóricas como frecuencias/porcentajes del total. Se realizarán pruebas t de Student y pruebas de chi-cuadrado para comparar los datos entre los grupos de AOVE con bajo y alto contenido de polifenoles. Se generará una gráfica de series de tiempo para demostrar el cambio en HDL a lo largo del tiempo por el nivel de polifenol consumido.