Multicentrická pilotní studie k vyhodnocení vlivu EVOO na parametry lipidů (EVOO)

Studovat design:

Multicentrická, dvojitě zaslepená pilotní studie ke stanovení, zda má extra panenský olivový olej (EVOO) pozitivní vliv na hladiny HDL cholesterolu a protizánětlivé markery u subjektů s diagnostikovaným kardiovaskulárním onemocněním (CVD) a ke stanovení, zda je koncentrace polyfenolů úměrné těmto účinkům. Subjekty absolvují po sobě jdoucí 28denní období (s 14denním vymytím mezi nimi), ve kterých budou konzumovat buď EVOO s nízkou koncentrací polyfenolu denně, nebo EVOO s vysokou koncentrací polyfenolu. Dvojitě zaslepeným způsobem bude každý subjekt svou vlastní kontrolou se 14denním vymýváním mezi obdobími studie.

Hypotéza:

Subjekty prokáží větší zlepšení hladin HDL cholesterolu, dalších lipidových parametrů a zánětlivých markerů přidáním EVOO do jejich stravy. Spotřeba EVOO s vysokou koncentrací polyfenolů zlepší tyto parametry více než spotřeba EVOO s nízkou koncentrací polyfenolů.

Konkrétní cíle:

1. Chcete-li zjistit, zda denní konzumace EVOO zvýší hladiny HDL cholesterolu po 28 dnech.
2. Chcete-li zjistit, zda denní konzumace vysoké koncentrace polyfenolu EVOO zvyšuje hladinu HDL cholesterolu více než EVOO s nízkou koncentrací polyfenolu (stejné dávkování).
3. Zjistit proveditelnost tohoto typu studie a možnost rozsáhlejší studie v delším časovém období.

Studijní metody:

Před zapsáním předmětů si studijní personál objedná generickou značku EVOO prostřednictvím oddělení nutričních služeb nemocnice. Zároveň bude EVOO s hlášenou vysokou koncentrací polyfenolů objednáno v místní specializované prodejně olivového oleje.

Testování olivového oleje: Eurofins Microbiology Laboratories, Inc. otestuje vzorek každé šarže olivového oleje na koncentraci polyfenolu před výdejem. Metoda je založena na přímé extrakci biofenolických minoritních polárních sloučenin z olivového oleje pomocí methanolového roztoku a následné kvantifikaci pomocí HPLC-MS/MS. Komerčně dostupné polyfenolové standardy se používají k identifikaci a kvantifikaci jednotlivých fenolických sloučenin se zaměřením na ty, které se v olivových olejích nejvíce vyskytují.

Testování krve studovaného subjektu: Při pěti různých studijních návštěvách bude získáno přibližně 20 ml krve pro celkem 100 ml krve během 12 týdnů.

Před přidáním olivového oleje budou odebrány základní vzorky séra a plazmy. Následné vzorky krve budou odebrány ve čtyřech dalších časových bodech.

Profily celkových lipidů v séru budou hodnoceny v jádře hmotnostní spektrometrie ve Výzkumném ústavu Maine Medical Center (MMCRI). Kromě toho budou zánětlivé markery, včetně CRP, IL-6 a TNFalfa, stanoveny pomocí enzymatické imunoanalýzy (ELISA). Sérum bude připraveno odebráním 10 ml krve do zkumavek s červeným uzávěrem. Krev se nechá koagulovat po dobu 15-20 minut při pokojové teplotě a poté se odstředí při 1500 - 2000 g a supernatant se odpipetuje a uloží zmrazený při -65ºC. Vzorky plazmy budou připraveny z 6 ml krve odebrané do 10 ml antikoagulačních zkumavek ACD (Acid Citrate Dextrose) a zpracovány do 1 hodiny. Frakce bílých krvinek bude připravena centrifugací při 1500-2000g po dobu 15 minut. Střední vrstva bílých krvinek bude odpipetována a uložena zmrazená při -60ºC. Vyšetřovatelé určí lipidomické profily bílých krvinek a také hladiny proteinu kaveolin-1.

Lipidové panely, které testují celkový cholesterol, HDL, LDL a triglyceridy, budou testovány na zbývajících krevních vzorcích v místní laboratoři. Veškeré náklady spojené s krevními testy budou hrazeny z prostředků na studium z MaineHealth Cardiology Service Line.

Další studijní měření: Při každé návštěvě budou měřeny vitální funkce včetně tělesné hmotnosti, krevního tlaku a srdeční frekvence.

Subjekty si budou vést studijní deník dokumentující každou dávku EVOO. Budou požádáni, aby odměřili 1 unci olivového oleje v šálku, který jim dal studijní tým, a konzumovali ho s chlebem, ve smoothie nebo ho vypili obyčejně. Dodržení spotřeby EVOO bude vypočítáno z deníku (%). Shoda se studií se bude měřit také podle uncí vráceného produktu (%). Subjekty dostanou 30 uncí EVOO na pokrytí 28 dní, proto se 2 unce vráceného olivového oleje po každé větvi studie budou počítat jako 100% shoda.

Úvahy o velikosti vzorku:

Protože se jedná o pilotní studii, vyšetřovatelé použili data dostupná v literatuře k odhadu velikosti vzorku. Studie hodnotící vliv HDL na očekávanou délku života ve vyšším věku uvádí průměrnou hodnotu HDL 47,5 se směrodatnou odchylkou 12,1 mezi subjekty, které se dožily více než 85 let. S použitím tohoto odhadu as očekáváním nalezení tříbodového rozdílu v HDL mezi dvěma studijními skupinami musí vyšetřovatelé získat 276 účastníků. Protože se však jedná o pilotní studii a vyšetřovatelé mají omezené finanční prostředky, začnou náborem 90 subjektů. S dodatečným financováním zajištěným z grantu v budoucnu by bylo možné studii rozšířit tak, aby bylo dosaženo požadované síly 80 %.

Analýza dat:

Pro účely této studie se výzkumníci pokusí detekovat rozdíly v HDL a dalších biomarkerech kardiovaskulárního zdraví u subjektů, které konzumovaly jak nízkou koncentraci polyfenolu, tak vysokou koncentraci polyfenolu EVOO. Čísla lékařských záznamů nebudou zahrnuta do datové sady pro analýzu. Pro shrnutí demografických a klinických charakteristik subjektů zařazených do studie bude použita deskriptivní statistika, přičemž spojité proměnné budou prezentovány jako průměr +- standardní odchylka a kategorické proměnné jako četnosti/procenta z celku. Studentovy t testy a chí-kvadrát testy budou provedeny za účelem srovnání dat mezi skupinami s nízkým a vysokým obsahem polyfenolu EVOO. Bude vygenerován graf časové řady, aby se demonstrovala změna HDL v čase podle hladiny spotřebovaného polyfenolu.