Monikeskuspilottitutkimus EVOO:n vaikutuksen arvioimiseksi lipidiparametreihin (EVOO)

Opintosuunnitelma:

Monikeskus, kaksoissokkoutettu pilottitutkimus, jolla selvitetään, onko ekstraneitsytoliiviöljyllä (EVOO) positiivinen vaikutus HDL-kolesterolitasoihin ja anti-inflammatorisiin markkereihin potilailla, joilla on diagnosoitu sydän- ja verisuonisairaus (CVD) ja onko polyfenolipitoisuus suhteessa näihin vaikutuksiin. Koehenkilöt suorittavat peräkkäiset 28 päivän jaksot (joiden välillä on 14 päivän huuhtelu), jolloin he joko nauttivat alhaisen polyfenolipitoisuuden EVOO:ta päivittäin tai korkean polyfenolipitoisuuden EVOO:a. Kaksoissokkoutetulla tavalla jokainen koehenkilö on oma kontrollinsa 14 päivän pesujaksolla tutkimusjaksojen välillä.

Hypoteesi:

Koehenkilöt osoittavat suurempia parannuksia HDL-kolesterolitasoissa, muissa lipidiparametreissa ja tulehdusmerkkiaineissa lisäämällä EVOO:ta ruokavalioonsa. Korkean polyfenolipitoisuuden sisältävän EVOO:n kulutus parantaa näitä parametreja enemmän kuin alhaisen polyfenolipitoisuuden omaavan EVOO:n kulutus.

Erityiset tavoitteet:

1. Sen selvittämiseksi, lisääkö EVOO:n päivittäinen käyttö HDL-kolesterolitasoja 28 päivän jälkeen.
2. Sen määrittämiseksi, lisääkö korkean polyfenolipitoisuuden päivittäinen kulutus HDL-kolesterolitasoja enemmän kuin EVOO alhaisella polyfenolipitoisuudella (sama annostus).
3. Selvittää tämäntyyppisen tutkimuksen toteutettavuus ja laajemman tutkimuksen mahdollisuus pidemmällä aikavälillä.

Tutkimusmenetelmät:

Ennen oppiaineisiin ilmoittautumista opintohenkilökunta tilaa geneerisen tuotemerkin EVOO sairaalan ravitsemuspalveluosaston kautta. Samalla tilataan paikallisesta oliiviöljyn erikoisliikkeestä EVOO, jonka polyfenolipitoisuus on korkea.

Oliiviöljyn testaus: Eurofins Microbiology Laboratories, Inc. testaa jokaisesta oliiviöljyerästä näytteen polyfenolipitoisuuden suhteen ennen annostelua. Menetelmä perustuu biofenolisten vähäpolaaristen yhdisteiden suoraan uuttamiseen oliiviöljystä metanoliliuoksen avulla ja sitä seuraavaan kvantifiointiin HPLC-MS/MS:llä. Kaupallisesti saatavia polyfenolistandardeja käytetään yksittäisten fenoliyhdisteiden tunnistamiseen ja kvantifiointiin keskittyen niihin, joita oliiviöljyissä on eniten.

Tutkittavan verikoe: Noin 20 ml verta otetaan viidellä eri tutkimuskäynnillä, yhteensä 100 ml verta 12 viikon aikana.

Perustason seerumi- ja plasmaverinäytteet otetaan ennen oliiviöljyn lisäystä. Seurantaverinäytteitä otetaan neljästä muusta ajankohdasta.

Seerumin kokonaislipidiprofiilit arvioidaan Maine Medical Center Research Instituten (MMCRI) massaspektrometriaytimessä. Lisäksi tulehdusmarkkerit, mukaan lukien CRP, IL-6 ja TNFalpha, määritetään entsyymi-immunosorbenttimäärityksellä (ELISA). Seerumi valmistetaan keräämällä 10 ml verta punakorkisiin putkiin. Veren annetaan hyytyä 15-20 minuuttia huoneenlämmössä ja sentrifugoidaan sitten 1 500 - 2 000 g, ja supernatantti pipetoidaan ja säilytetään pakastettuna -65 ºC:ssa. Plasmanäytteet valmistetaan 6 ml:sta verta, joka on kerätty 10 ml:n ACD (happositraattidekstroosi) antikoagulanttiputkiin ja käsitellään 1 tunnin sisällä. Valkosolufraktio valmistetaan sentrifugoimalla 1500-2000g 15 minuutin ajan. Keskimmäinen valkosolukerros pipetoidaan pois ja säilytetään pakastettuna -60 ºC:ssa. Tutkijat määrittävät valkosolujen lipidomiset profiilit sekä caveolin-1-proteiinitasot.

Lipidipaneelit, jotka testaavat kokonaiskolesterolia, HDL-, LDL- ja triglyseridejä, ajetaan jäljellä olevista verinäytteistä paikallisessa laboratoriossa. Kaikki verikokeisiin liittyvät kulut maksetaan MaineHealth Cardiology Line -palvelulinjan opintovaroilla.

Muut tutkimustoimenpiteet: Elintoiminnot, mukaan lukien paino, verenpaine ja syke mitataan jokaisella käynnillä.

Koehenkilöt pitävät tutkimuspäiväkirjaa, jossa dokumentoidaan jokainen EVOO-annos. Heitä pyydetään mittaamaan 1 unssi oliiviöljyä tutkimusryhmän heille antamaan kuppiin ja nauttimaan se leivän kanssa, smoothiessa tai juomalla se tavallisena. EVOO-kulutuksen noudattaminen lasketaan päiväkirjasta (%). Tutkimuksen noudattaminen mitataan myös palautetun tuotteen unssilla (%). Koehenkilöt saavat 30 unssia EVOO:ta 28 päivän kattamiseksi, joten 2 unssia palautettua oliiviöljyä kunkin tutkimushaaran jälkeen lasketaan 100-prosenttiseksi vaatimustenmukaiseksi.

Ota huomioon näytekoko:

Koska kyseessä on pilottitutkimus, tutkijat käyttivät kirjallisuudesta saatavilla olevaa tietoa otoskoon arvioimiseksi. Tutkimuksessa, jossa arvioitiin HDL:n vaikutusta vanhemman iän elinajanodotteeseen, keskimääräinen HDL oli 47,5 ja standardipoikkeama 12,1 koehenkilöillä, jotka elivät yli 85-vuotiaiksi. Käyttämällä tätä arviota ja ennakoiden löytävänsä 3 pisteen eron HDL:ssä kahden tutkimusryhmän välillä, tutkijoiden on palkattava 276 osallistujaa. Koska kyseessä on kuitenkin pilottitutkimus ja tutkijoilla on rajallinen rahoitus, he aloittavat rekrytoimalla 90 tutkittavaa. Jatkossa apurahalla turvatulla lisärahoituksella tutkimusta voitaisiin laajentaa halutun 80 prosentin tehon saavuttamiseksi.

Tietojen analysointi:

Tätä tutkimusta varten tutkijat yrittävät havaita eroja HDL:ssä ja muissa sydän- ja verisuoniterveyden biomarkkereissa koehenkilöillä, jotka nauttivat sekä matalaa polyfenolipitoisuutta että korkeaa polyfenolipitoisuutta EVOO:ta. Lääkärisitietojen numeroita ei sisällytetä analyysitietoihin. Kuvaavia tilastoja käytetään tiivistämään tutkimukseen sisältyvien koehenkilöiden demografiset ja kliiniset ominaisuudet. Jatkuvat muuttujat esitetään keskimääräisenä +- keskihajonnana ja kategorialliset muuttujat frekvensseinä/prosentteina kokonaismäärästä. Opiskelijoiden t-testit ja khin neliötestit suoritetaan vertaamaan tietoja matalan ja korkean polyfenolisten EVOO-ryhmien välillä. Aikasarjakäyrä luodaan HDL:n muutoksen osoittamiseksi ajan kuluessa kulutetun polyfenolitason mukaan.