Eine multizentrische Pilotstudie zur Bewertung der Wirkung von EVOO auf Lipidparameter (EVOO)

Studiendesign:

Eine multizentrische, doppelblinde Pilotstudie, um zu bestimmen, ob natives Olivenöl extra (EVOO) eine positive Wirkung auf den HDL-Cholesterinspiegel und entzündungshemmende Marker bei Patienten hat, bei denen eine Herz-Kreislauf-Erkrankung (CVD) diagnostiziert wurde, und um festzustellen, ob die Polyphenolkonzentration ist proportional zu diesen Effekten. Die Probanden absolvieren aufeinanderfolgende 28-Tage-Perioden (mit einem 14-tägigen Washout dazwischen), in denen sie täglich entweder das EVOO mit niedriger Polyphenolkonzentration oder das EVOO mit hoher Polyphenolkonzentration konsumieren. Doppelt verblindet ist jeder Proband seine eigene Kontrolle mit einer 14-tägigen Auswaschung zwischen den Studienperioden.

Hypothese:

Die Probanden werden größere Verbesserungen des HDL-Cholesterinspiegels, anderer Lipidparameter und Entzündungsmarker zeigen, wenn sie EVOO zu ihrer Ernährung hinzufügen. Der Verzehr von EVOO mit hoher Polyphenolkonzentration verbessert diese Parameter stärker als der Verzehr von EVOO mit niedriger Polyphenolkonzentration.

Spezifische Ziele:

1. Um festzustellen, ob der tägliche Verzehr von EVOO den HDL-Cholesterinspiegel nach 28 Tagen erhöht.
2. Um festzustellen, ob der tägliche Verzehr von EVOO mit hoher Polyphenolkonzentration den HDL-Cholesterinspiegel stärker erhöht als EVOO mit einer niedrigen Polyphenolkonzentration (gleiche Dosierung).
3. Bestimmung der Durchführbarkeit dieser Art von Studie und der Möglichkeit einer größeren Studie über einen längeren Zeitraum.

Studienmethoden:

Vor der Aufnahme der Probanden bestellt das Studienpersonal ein generisches Marken-EVOO über die Abteilung für Ernährungsdienste des Krankenhauses. Gleichzeitig wird EVOO mit einer gemeldeten hohen Polyphenolkonzentration bei einem lokalen Olivenöl-Fachgeschäft bestellt.

Olivenöltests: Eurofins Microbiology Laboratories, Inc. wird eine Probe jeder Olivenölcharge vor der Abgabe auf die Polyphenolkonzentration testen. Das Verfahren basiert auf der direkten Extraktion der biophenolischen geringfügig polaren Verbindungen aus Olivenöl mittels einer Methanollösung und anschließender Quantifizierung durch HPLC-MS/MS. Kommerziell erhältliche Polyphenolstandards werden verwendet, um einzelne Phenolverbindungen zu identifizieren und zu quantifizieren, wobei der Schwerpunkt auf den in Olivenölen am häufigsten vorkommenden liegt.

Blutuntersuchung der Studienteilnehmer: Etwa 20 ml Blut werden bei fünf verschiedenen Studienbesuchen für insgesamt 100 ml Blut über 12 Wochen entnommen.

Vor der Olivenölergänzung werden Basisserum- und Plasmablutproben entnommen. Nachsorge-Blutproben werden zu vier weiteren Zeitpunkten entnommen.

Serum-Gesamtlipidprofile werden im Massenspektrometrie-Kern des Maine Medical Center Research Institute (MMCRI) ausgewertet. Zusätzlich werden Entzündungsmarker, einschließlich CRP, IL-6 und TNFalpha, durch einen enzymgebundenen Immunadsorptionstest (ELISA) bestimmt. Das Serum wird hergestellt, indem 10 ml Blut in Röhrchen mit roten Kappen gesammelt werden. Das Blut wird 15–20 Minuten bei Raumtemperatur gerinnen gelassen und dann bei 1500–2000 g zentrifugiert, und der Überstand wird abpipettiert und bei –65 °C eingefroren gelagert. Plasmaproben werden aus 6 ml Blut hergestellt, das in 10 ml ACD (Säure-Citrat-Dextrose)-Antikoagulanzröhrchen gesammelt und innerhalb von 1 Stunde verarbeitet wird. Die Fraktion der weißen Blutkörperchen wird durch 15-minütige Zentrifugation bei 1.500–2.000 g hergestellt. Die mittlere Schicht der weißen Blutkörperchen wird abpipettiert und bei -60 °C gefroren gelagert. Die Forscher werden die lipidomischen Profile der weißen Blutkörperchen sowie die Caveolin-1-Proteinspiegel bestimmen.

Lipid-Panels, die Gesamtcholesterin, HDL, LDL und Triglyceride testen, werden mit verbleibenden Blutproben im örtlichen Labor durchgeführt. Alle mit der Blutuntersuchung verbundenen Kosten werden aus Studienmitteln der MaineHealth Cardiology Service Line bezahlt.

Weitere Studienmaßnahmen: Bei jedem Besuch werden Vitalfunktionen wie Körpergewicht, Blutdruck und Herzfrequenz gemessen.

Die Probanden führen ein Studientagebuch, in dem jede Dosis von EVOO dokumentiert wird. Sie werden gebeten, 1 Unze Olivenöl in einer Tasse abzumessen, die ihnen das Studienteam gegeben hat, und es mit Brot, in einem Smoothie oder pur zu trinken. Die Einhaltung des EVOO-Verbrauchs wird aus dem Tagebuch (%) berechnet. Die Einhaltung der Studie wird auch in Unzen des zurückgegebenen Produkts (%) gemessen. Die Probanden erhalten 30 Unzen EVOO für 28 Tage, daher werden 2 Unzen zurückgegebenes Olivenöl nach jedem Studienarm als 100% Konformität gezählt.

Überlegungen zur Stichprobengröße:

Da es sich um eine Pilotstudie handelt, nutzten die Forscher in der Literatur verfügbare Daten, um die Stichprobengröße abzuschätzen. Eine Studie zur Bewertung der Wirkung von HDL auf die Lebenserwartung im höheren Alter ergab einen mittleren HDL-Wert von 47,5 mit einer Standardabweichung von 12,1 bei Personen, die älter als 85 Jahre wurden. Unter Verwendung dieser Schätzung und in der Erwartung, einen HDL-Unterschied von 3 Punkten zwischen den beiden Studiengruppen zu finden, müssen die Forscher 276 Teilnehmer rekrutieren. Da es sich jedoch um eine Pilotstudie handelt und die Forscher nur über begrenzte finanzielle Mittel verfügen, werden sie zunächst 90 Probanden rekrutieren. Mit zukünftig gesicherter zusätzlicher Finanzierung durch ein Stipendium könnte die Studie erweitert werden, um die angestrebte Power von 80 % zu erreichen.

Datenanalyse:

Für die Zwecke dieser Studie werden die Forscher versuchen, Unterschiede in HDL und anderen Biomarkern der kardiovaskulären Gesundheit bei Probanden zu erkennen, die sowohl EVOO mit niedriger Polyphenolkonzentration als auch mit hoher Polyphenolkonzentration konsumierten. Krankenaktennummern werden nicht zur Analyse in den Datensatz aufgenommen. Deskriptive Statistiken werden verwendet, um die demografischen und klinischen Merkmale der in die Studie eingeschlossenen Personen zusammenzufassen, wobei kontinuierliche Variablen als Mittelwert +- Standardabweichung und kategoriale Variablen als Häufigkeiten/Prozentsätze der Gesamtzahl dargestellt werden. Student-t-Tests und Chi-Quadrat-Tests werden durchgeführt, um die Daten zwischen den EVOO-Gruppen mit niedrigem und hohem Polyphenolgehalt zu vergleichen. Ein Zeitreihenplot wird erstellt, um die Veränderung des HDL im Laufe der Zeit nach verbrauchtem Polyphenolgehalt zu demonstrieren.