Uno studio pilota multicentrico per valutare l'effetto di EVOO sui parametri lipidici (EVOO)

Disegno dello studio:

Uno studio pilota multicentrico in doppio cieco per determinare se l'olio extra vergine di oliva (EVOO) ha un effetto positivo sui livelli di colesterolo HDL e sui marcatori antinfiammatori per i soggetti con diagnosi di malattie cardiovascolari (CVD) e per determinare se la concentrazione di polifenoli è proporzionale a tali effetti. I soggetti completeranno periodi consecutivi di 28 giorni (con un periodo di interruzione di 14 giorni tra) in cui consumeranno quotidianamente l'EVOO a bassa concentrazione di polifenoli o l'EVOO ad alta concentrazione di polifenoli. In un modo in doppio cieco, ogni soggetto sarà il proprio controllo con un periodo di interruzione di 14 giorni tra i periodi di studio.

Ipotesi:

I soggetti dimostreranno maggiori miglioramenti nei livelli di colesterolo HDL, altri parametri lipidici e marcatori infiammatori aggiungendo EVOO alla loro dieta. Il consumo di EVOO con alta concentrazione di polifenoli migliorerà questi parametri più del consumo di EVOO con bassa concentrazione di polifenoli.

Obiettivi specifici:

1. Per determinare se il consumo giornaliero di EVOO aumenterà i livelli di colesterolo HDL dopo 28 giorni.
2. Determinare se il consumo giornaliero di EVOO ad alta concentrazione di polifenoli aumenta i livelli di colesterolo HDL più di EVOO con una bassa concentrazione di polifenoli (stesso dosaggio).
3. Per determinare la fattibilità di questo tipo di studio e la possibilità di uno studio più ampio per un periodo di tempo più lungo.

Metodi di studio:

Prima di arruolare i soggetti, il personale dello studio ordinerà un EVOO generico di marca attraverso il dipartimento dei servizi nutrizionali dell'ospedale. Allo stesso tempo, EVOO con un'elevata concentrazione di polifenoli segnalata verrà ordinato da un negozio di specialità di olio d'oliva locale.

Test dell'olio d'oliva: Eurofins Microbiology Laboratories, Inc. testerà un campione di ciascun lotto di olio d'oliva per la concentrazione di polifenoli prima dell'erogazione. Il metodo si basa sull'estrazione diretta dei composti polari minori biofenolici dall'olio di oliva mediante una soluzione metanolica e successiva quantificazione mediante HPLC-MS/MS. Gli standard di polifenoli disponibili in commercio vengono utilizzati per identificare e quantificare i singoli composti fenolici, concentrandosi su quelli più abbondanti negli oli di oliva.

Analisi del sangue del soggetto dello studio: circa 20 ml di sangue saranno ottenuti in cinque diverse visite di studio per un totale di 100 ml di sangue nell'arco di 12 settimane.

Verranno prelevati campioni di sangue di siero e plasma al basale prima dell'integrazione di olio d'oliva. I campioni di sangue di follow-up verranno prelevati in altri quattro momenti.

I profili lipidici totali del siero saranno valutati nel nucleo di spettrometria di massa presso il Maine Medical Center Research Institute (MMCRI). Inoltre, i marcatori infiammatori, tra cui CRP, IL-6 e TNFalfa, saranno determinati mediante saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA). Il siero sarà preparato raccogliendo 10 ml di sangue in provette con tappo rosso. Il sangue verrà lasciato coagulare per 15-20 minuti a temperatura ambiente e poi centrifugato a 1500 - 2000 g, e il sopranatante pipettato e conservato congelato a -65ºC. I campioni di plasma saranno preparati da 6 ml di sangue raccolto in provette di anticoagulante ACD (Acid Citrate Dextrose) da 10 ml e processati entro 1 ora. La frazione di globuli bianchi sarà preparata mediante centrifugazione a 1.500-2.000 g per 15 minuti. Lo strato intermedio di globuli bianchi verrà pipettato e conservato congelato a -60ºC. Gli investigatori determineranno i profili lipidomici dei globuli bianchi e i livelli di proteina caveolina-1.

I pannelli lipidici, che testano il colesterolo totale, HDL, LDL e trigliceridi, verranno eseguiti su campioni di sangue rimanenti presso il laboratorio locale. Tutti i costi associati agli esami del sangue saranno pagati con i fondi dello studio della MaineHealth Cardiology Service Line.

Altre misure dello studio: i segni vitali tra cui peso corporeo, pressione sanguigna e frequenza cardiaca saranno misurati ad ogni visita.

I soggetti manterranno un diario di studio che documenta ogni dose di EVOO. Verrà chiesto loro di misurare 1 oncia di olio d'oliva in una tazza data loro dal gruppo di studio e di consumarlo con il pane, in un frullato o bevendolo liscio. La conformità con il consumo di EVOO sarà calcolata dal diario (%). La conformità allo studio sarà misurata anche in once di prodotto restituito (%). I soggetti ricevono 30 once di EVOO per coprire 28 giorni, pertanto, 2 once di olio d'oliva restituito dopo ogni braccio di studio verranno conteggiate come conformità al 100%.

Considerazioni sulla dimensione del campione:

Trattandosi di uno studio pilota, i ricercatori hanno utilizzato i dati disponibili in letteratura per stimare la dimensione del campione. Uno studio che ha valutato l'effetto dell'HDL sull'aspettativa di vita in età avanzata ha riportato un HDL medio di 47,5 con una deviazione standard di 12,1 tra i soggetti che hanno vissuto oltre gli 85 anni. Utilizzando questa stima e prevedendo di trovare una differenza di 3 punti nell'HDL tra i due gruppi di studio, i ricercatori devono reclutare 276 partecipanti. Tuttavia, poiché si tratta di uno studio pilota e i ricercatori dispongono di finanziamenti limitati, inizieranno reclutando 90 soggetti. Con finanziamenti aggiuntivi garantiti da una sovvenzione in futuro, lo studio potrebbe essere ampliato per raggiungere la potenza desiderata dell'80%.

Analisi dei dati:

Ai fini di questo studio, i ricercatori tenteranno di rilevare le differenze nell'HDL e in altri biomarcatori della salute cardiovascolare nei soggetti che hanno consumato sia una bassa concentrazione di polifenoli che un'alta concentrazione di polifenoli EVOO. I numeri delle cartelle cliniche non saranno inclusi nel set di dati per l'analisi. Verranno utilizzate statistiche descrittive per riassumere le caratteristiche demografiche e cliniche dei soggetti inclusi nello studio, con variabili continue presentate come media +- deviazione standard e variabili categoriali come frequenze/percentuali del totale. Saranno condotti test t per studenti e test chi-quadrato per confrontare i dati tra i gruppi EVOO a basso e alto contenuto di polifenoli. Verrà generato un grafico di serie temporali per dimostrare il cambiamento di HDL nel tempo in base al livello di polifenoli consumati.