Многоцентровое экспериментальное исследование для оценки влияния EVOO на параметры липидов (EVOO)

Дизайн исследования:

Многоцентровое двойное слепое пилотное исследование для определения того, оказывает ли оливковое масло первого холодного отжима (EVOO) положительное влияние на уровни холестерина ЛПВП и противовоспалительные маркеры у субъектов с диагнозом сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ), а также для определения концентрации полифенолов. пропорциональны этим эффектам. Субъекты завершат последовательные 28-дневные периоды (с 14-дневным вымыванием между ними), в течение которых они будут ежедневно потреблять либо EVOO с низкой концентрацией полифенола, либо EVOO с высокой концентрацией полифенола. Двойным слепым методом каждый субъект будет сам контролировать себя с 14-дневным перерывом между периодами исследования.

Гипотеза:

Субъекты продемонстрируют большее улучшение уровня холестерина ЛПВП, других параметров липидов и маркеров воспаления, добавив EVOO в свой рацион. Потребление EVOO с высокой концентрацией полифенолов улучшит эти параметры в большей степени, чем потребление EVOO с низкой концентрацией полифенолов.

Конкретные цели:

1. Определить, повысит ли ежедневное потребление EVOO уровень холестерина ЛПВП через 28 дней.
2. Чтобы определить, увеличивает ли ежедневное потребление EVOO с высокой концентрацией полифенолов уровень холестерина ЛПВП больше, чем EVOO с низкой концентрацией полифенола (такая же дозировка).
3. Определить осуществимость такого типа исследования и возможность проведения более крупного исследования в течение более длительного периода времени.

Методы исследования:

Перед включением субъектов исследовательский персонал закажет непатентованный бренд EVOO через отдел питания больницы. В то же время EVOO с заявленной высокой концентрацией полифенолов можно будет заказать в местном специализированном магазине оливкового масла.

Тестирование оливкового масла: Eurofins Microbiology Laboratories, Inc. проверит образец каждой партии оливкового масла на концентрацию полифенолов перед выдачей. Метод основан на прямой экстракции биофенольных минорных полярных соединений из оливкового масла с помощью раствора в метаноле и последующем количественном определении с помощью ВЭЖХ-МС/МС. Коммерчески доступные стандарты полифенолов используются для идентификации и количественного определения отдельных фенольных соединений, уделяя особое внимание тем из них, которые наиболее распространены в оливковом масле.

Анализ крови испытуемого: примерно 20 мл крови будет получено за пять различных посещений исследования, всего 100 мл крови в течение 12 недель.

Перед добавлением оливкового масла будут взяты исходные образцы сыворотки и плазмы крови. Последующие образцы крови будут взяты в четыре других временных интервала.

Профили общего липида сыворотки будут оцениваться в центре масс-спектрометрии в Исследовательском институте Медицинского центра штата Мэн (MMCRI). Кроме того, маркеры воспаления, включая CRP, IL-6 и TNF-альфа, будут определяться с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). Сыворотку готовят путем сбора 10 мл крови в пробирки с красными крышками. Крови дают свернуться в течение 15-20 минут при комнатной температуре, а затем центрифугируют при 1500-2000g, супернатант отбирают пипеткой и хранят в замороженном виде при -65ºC. Образцы плазмы будут приготовлены из 6 мл крови, собранной в пробирки с антикоагулянтом ACD (кислотный цитрат-декстроза) объемом 10 мл, и обработаны в течение 1 часа. Фракция лейкоцитов готовится центрифугированием при 1500-2000g в течение 15 минут. Средний слой лейкоцитов отделяют пипеткой и хранят в замороженном виде при температуре -60ºC. Исследователи определят липидомные профили лейкоцитов, а также уровни белка кавеолина-1.

Панели липидов, которые проверяют общий холестерин, ЛПВП, ЛПНП и триглицериды, будут проводиться на оставшихся образцах крови в местной лаборатории. Все расходы, связанные с анализом крови, будут оплачиваться за счет средств, выделяемых на исследование по линии обслуживания кардиологов штата Мэн.

Другие параметры исследования. При каждом посещении будут измеряться основные показатели жизнедеятельности, включая массу тела, артериальное давление и частоту сердечных сокращений.

Субъекты будут вести дневник исследования, документируя каждую дозу EVOO. Им будет предложено отмерить 1 унцию оливкового масла в чашке, которую им дала исследовательская группа, и выпить ее с хлебом, в виде смузи или выпить в чистом виде. Соответствие расходу EVOO будет рассчитываться по дневнику (%). Соблюдение требований исследования также будет измеряться в унциях возвращенного продукта (%). Субъекты получают 30 унций EVOO на 28 дней, поэтому 2 унции возвращенного оливкового масла после каждой группы исследования будут считаться 100% соблюдением.

Рекомендации по размеру выборки:

Поскольку это пилотное исследование, исследователи использовали данные, доступные в литературе, для оценки размера выборки. Исследование, оценивающее влияние ЛПВП на ожидаемую продолжительность жизни в пожилом возрасте, показало, что средний уровень ЛПВП составляет 47,5 со стандартным отклонением 12,1 среди субъектов, доживших до 85 лет. Используя эту оценку и ожидая найти разницу в 3 балла в ЛПВП между двумя исследовательскими группами, исследователи должны набрать 276 участников. Однако, поскольку это пилотное исследование, а у исследователей ограниченное финансирование, они начнут с набора 90 испытуемых. При дополнительном финансировании из гранта в будущем исследование может быть расширено для достижения желаемой мощности 80%.

Анализ данных:

В целях этого исследования исследователи попытаются обнаружить различия в ЛПВП и других биомаркерах сердечно-сосудистого здоровья у субъектов, которые потребляли EVOO как с низкой концентрацией полифенола, так и с высокой концентрацией полифенола. Номера медицинских карт не будут включены в набор данных для анализа. Описательная статистика будет использоваться для обобщения демографических и клинических характеристик субъектов, включенных в исследование, с непрерывными переменными, представленными как среднее +- стандартное отклонение, и категориальными переменными как частотами/процентами от общего числа. Для сравнения данных между группами с низким и высоким содержанием полифенолов EVOO будут проводиться t-тесты Стьюдента и тесты хи-квадрат. Будет построен график временного ряда, чтобы продемонстрировать изменение ЛПВП с течением времени в зависимости от уровня потребляемого полифенола.