遗传性溶血性贫血患者的细小病毒 B19 感染

HPV-B19 是引起人类疾病的最小的单链线性 DNA 病毒。 接触呼吸道分泌物是这种病毒最常见的传播方式。 感染与多种表现相关，从无症状到严重并发症，具体取决于宿主的血液学和免疫学状态。 没有前瞻性比较研究调查与这种致病病毒相关的风险，也没有预测遗传性溶血性贫血 (HHA) 患者按其基础疾病分类的病程和发病率。

没有人研究过遗传性溶血性贫血患者急性症状性 HPV-B19 感染的不同和不寻常表现的根本原因。 因此，这是第一项比较地中海贫血、镰状细胞性贫血 (SCA) 和球形红细胞增多症 (HS) 患者出现急性症状性 HPV-B19 感染的头对头研究。

研究急性症状性 HPV-B19 感染患者的病毒血症、体液免疫反应和基础疾病之间的关系，有助于阐明未确诊的病理生理机制和其他辅助因素，以改进诊断和管理。

此外，早期诊断急性症状性 HPV-B19 感染的异常表现的危险因素将成为更好的治疗策略、随访和预后以及预防未来并发症的有用工具

在 2018 年 2 月至 2020 年 2 月期间连续筛查 Sohag 和 Assiut 大学医院血液科和急诊科因 HHA 相关并发症或表现提示 HHA 的患者，以参加本研究，并每月随访至少一年和三年HPV-B19 感染。

研究设计

1. 患者

前 2 年，将筛选将有 HHA 证据和/或将出现提示 HHA 的表现并同意遵守后续指导的候选患者参加本研究，另外将至少随访一年HPV-B19 感染后。 患者数据将包括人口统计学、相关合并症、住院需要、输血或血浆需要、肾脏替代疗法或血浆置换、住院时间、完成住院（出院和死亡）、心脏事件、神经和呼吸系统事件、治疗类型和炎症实验室参数。

研究患者的 HHA 诊断

实验室调查

1. 常规生化检查 肝肾功能测试 (LFT)、胆红素、血糖、脂质和指示的激素概况将在 Cobas c 311&modular P 自动分析仪（Roche Diagnostics，德国曼海姆）、乳酸脱氢酶 (LDH) 上进行

   ：将使用 Dimension Rx Max-Siemens 和尿液分析进行分析，并将对所有患者进行白蛋白肌酐比值分析。

2. 血液学分析 全血细胞计数：将抽取外周血样本用于诊断实验室调查和常规随访。 将使用 Cell-Dyn 3700 自动细胞计数器（Abbott 诊断公司，达拉斯，美国）在用于 CBC 的钾-乙二胺四乙酸 (EDTA) 抗凝剂涂层管上收集 2-ml 血液。

   遗传性溶血性贫血诊断 根据患者的临床/家族史、检查和实验室检查（包括全血细胞计数 (CBC)、红细胞 (RBC) 指数计算、校正网织红细胞计数、外周血涂片 (PBS)）怀疑 HHA 、铁研究、总胆红素和直接胆红素（TB、DB）、血清 LDH 升高、血清触珠蛋白降低和直接抗球蛋白（Coomb's）试验阴性。

   HHA的确认和亚型的鉴定将通过以下一系列专门调查来完成：

   A. 血红蛋白病的诊断

   Hb 电泳、镰状溶解度测试和使用高效液相色谱 (HPLC) 研究 Hb 分数的协议将用于诊断血红蛋白病，例如 SCA 和地中海贫血，如前所述。

   B. 红细胞膜病和酶病的诊断 遗传性红细胞膜疾病，如 HS 和椭圆形红细胞增多症，将通过血涂片检查、红细胞渗透脆性试验 (OFT) 进行或不进行 24 小时孵育、酸化甘油裂解试验 (AGLT)、和红细胞标记与 eosin-5'-马来酰亚胺 (EMA) 染料和 RBC 平均荧光强度 (MFI) 的后续测量通过流式细胞术如前所述。

   考虑患有 HS 的患者将基于慢性溶血的临床和实验室体征、PBS 中球形红细胞的存在，以及两项阳性测试（OFT、AGLT 和 EMA 结合测试）或至少一项具有 HS 家族史的测试，并排除继发性球形红细胞增多症的其他原因。

   将评估所有患者的 RBC 酶活性，例如葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 (G6PD)，以检测 RBC 酶病和膜病的共存。

3. HPV-B19 和 HHA 患者对照组的检测 在研究期间，任何 HHA 患者都会出现提示 HPV-B19 感染的表现（发烧/肌肉疼痛/皮疹/关节病/淋巴结肿大/Hb 水平快速下降和网织红细胞减少症）和/ 或与疑似传染性红斑病例接触，将调查抗细小病毒 B19 IgM 和 IgG 免疫球蛋白状态。 那些 HPV-B19 血清反应阴性的人将在 2 到 3 周后重新检测。 HPV-B19 免疫球蛋白（IgM 和 IgG）状态将通过来自（Diasorin，Saluggia，Italy）的化学发光免疫测定（CLIA）技术来确定。 此外，还将进行肝炎、HIV、CMV 和 EBV 病毒的血清学检测，以排除其他近期病毒感染。 将进行血培养和敏感性检查以排除败血症。 体征、症状、HPV-B19 特异性 IgM 的存在以及其他病毒 IgM 的缺失将被视为近期有症状的 HPV-B19 感染的证据。 患者将根据先前的标准分为两组。

I组=具有急性症状性HPV-B19感染的HHA患者，II组=没有急性症状性HPV-B19感染的HHA患者。 然后根据基础疾病将 I 组患者分为三个亚组：Ia 组：HPV-B19(+)β-地中海贫血，Ib 组：HPV-B19(+)HS，Ic 组：HPV-B19(+)SCA .

将比较 I 组 HPV-B19 感染的不同表现特征，例如大量血细胞减少、急性肾损伤 (AKI)、肝炎和高胆红素血症水平。 AKI 将根据最新指南进行诊断和分类。 当总胆红素 >25 mg/dL 时，将考虑极度高胆红素血症。 记录基线时的临床表现。

7.4. 其他研究 HPV-B19 血液学外表现、相关自身免疫性疾病、细胞和体液免疫缺陷的诊断将使用多种方法确定，例如检测多种自身抗体、流式细胞术、血清免疫球蛋白水平。

BM、脾脏和肝脏活检的组织病理学研究将在患者在受限条件下接受后并根据活检指征指南进行：

• 对于持续严重的 BMF 对治疗无反应的患者，将进行 BM 抽吸和活检。
• 根据 HHA (13) 中关于脾切除术的建议，对将接受择期脾切除术的患者进行脾脏活检。
• 对于自身免疫性或硬化性胆管炎血清学检测呈阳性且肝功能持续异常的患者，将进行肝活检以区分潜在疾病以进行适当治疗。

通过超声心动图、X 光胸部和长骨以及腹部超声进行放射学评估将常规进行以筛查所有患者。 患有极度高胆红素血症或梗阻性黄疸的HHA患者将通过磁共振胰胆管造影术（MRCP）进行筛查。

I 组患者将在 HPV-B19 感染后至少一年内每月接受随访。 在撰写本手稿时，将认真跟踪 II 组患者。 在此期间，将检查并发症和实验室概况，包括如果患者有严重的血细胞减少，则进行 BM 抽吸。 所有患者都将通过超声心动图扫描并通过超声检查以查看胆囊、肾脏、脾脏和肝脏大小 (cm)。 将记录感兴趣的事件，例如骨髓衰竭 (BMF)、脾脏隔离、胸痛、血管闭塞危象、胆石症、胆囊炎和胆总管结石以及输血频率