Zakażenie parwowirusem B19 u pacjentów z dziedziczną niedokrwistością hemolityczną

HPV-B19 to najmniejszy jednoniciowy, liniowy wirus DNA, który powoduje choroby u ludzi. Narażenie na wydzieliny z dróg oddechowych jest najczęstszym sposobem przenoszenia tego wirusa. Zakażenie wiąże się z różnymi objawami, od bezobjawowych do ciężkich powikłań, które zależą od statusu hematologicznego i immunologicznego gospodarza. Żadne prospektywne badania porównawcze nie dotyczyły ryzyka związanego z tym patogennym wirusem i przewidywania przebiegu choroby i zachorowalności wśród pacjentów z dziedziczną niedokrwistością hemolityczną (HHA), sklasyfikowanych według ich chorób podstawowych.

Nikt nie badał przyczyn leżących u podstaw różnych i nietypowych objawów ostrej, objawowej infekcji HPV-B19 u pacjentów z dziedziczną anemią hemolityczną. Tak więc w tym pierwszym bezpośrednim badaniu porównującym pacjentów z talasemią, anemią sierpowatą (SCA) i sferocytozą (HS) wystąpiła ostra objawowa infekcja HPV-B19.

Badanie związku między wiremią, humoralną odpowiedzią immunologiczną i chorobą podstawową u pacjentów z ostrym objawowym zakażeniem HPV-B19 powinno być przydatne do wyjaśnienia niezdiagnozowanych mechanizmów patofizjologicznych i innych dodatkowych czynników w celu poprawy diagnozy i leczenia.

Co więcej, wczesna diagnoza czynników ryzyka nietypowych postaci ostrej objawowej infekcji HPV-B19 będzie użytecznym narzędziem do lepszej strategii leczenia, obserwacji i rokowania, a także zapobiegania przyszłym powikłaniom

Pacjenci przyjmowani z klinik hematologicznych i oddziałów ratunkowych szpitali uniwersyteckich Sohag i Assiut z powodu powikłań związanych z HHA lub objawów sugerujących HHA byli poddawani ciągłym badaniom przesiewowym w okresie od lutego 2018 r. Zakażenie HPV-B19.

Projekt badania

1. Pacjenci

Przez pierwsze 2 lata kandydaci na pacjentów, u których wystąpią objawy HHA i/lub wystąpią objawy wskazujące na HHA oraz zgodzą się na przestrzeganie zaleceń dotyczących obserwacji, zostaną poddani badaniu przesiewowemu pod kątem włączenia do tego badania, a dodatkowo będą obserwowani przez co najmniej rok po zakażeniu HPV-B19. Dane pacjenta będą obejmować dane demograficzne, istotne choroby współistniejące, potrzebę przyjęcia do szpitala, potrzebę transfuzji krwi lub osocza, terapię nerkozastępczą lub wymianę osocza, długość pobytu w szpitalu, zakończenie hospitalizacji (wypis ze szpitala i zgon), zdarzenia sercowe, neurologiczne i oddechowe zdarzenia, rodzaj zastosowanego leczenia i parametry laboratoryjne stanu zapalnego.

Rozpoznanie HHA u badanych pacjentów

Badania laboratoryjne

1. Rutynowe badania biochemiczne Testy czynnościowe wątroby i nerek (LFT), bilirubina, poziom cukru we krwi, lipidów i wskazane profile hormonalne zostaną przeprowadzone na automatycznym analizatorze Cobas c 311& modular P (Roche Diagnostics, Mannheim, Niemcy), dehydrogenaza mleczanowa (LDH)

   : analiza zostanie przeprowadzona za pomocą Dimension Rx Max-Siemens i analiza moczu, a u wszystkich pacjentów zostanie przeprowadzony wskaźnik albuminy i kreatyniny.

2. Analiza hematologiczna Pełna morfologia krwi: próbki krwi obwodowej zostaną pobrane do diagnostycznych badań laboratoryjnych i rutynowej obserwacji. 2 ml krwi zostanie pobrane do probówki pokrytej antykoagulantem potasowo-etylenodiaminotetraoctowym (EDTA) do CBC przy użyciu automatycznego licznika komórek Cell-Dyn 3700 (Abbott diagnostic, Dallas, USA).

   Rozpoznanie dziedzicznej niedokrwistości hemolitycznej HHA można podejrzewać na podstawie wywiadu klinicznego/rodzinnego pacjenta, badania i badań laboratoryjnych, w tym pełnej morfologii krwi (CBC), obliczenia wskaźników krwinek czerwonych (RBC), skorygowanej liczby retikulocytów, rozmazu krwi obwodowej (PBS) , badanie żelaza, bilirubina całkowita i bezpośrednia (TB, DB), zwiększona LDH w surowicy, zmniejszona haptoglobina w surowicy i ujemny bezpośredni test antyglobulinowy (Coombs).

   Potwierdzenie HHA i identyfikacja podtypów zostanie przeprowadzona w serii specjalistycznych badań w następujący sposób:

   A. Rozpoznanie hemoglobinopatii

   Protokół elektroforezy Hb, badanie rozpuszczalności sierpowej i badanie frakcji Hb za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) będzie stosowany do diagnozowania hemoglobinopatii, takich jak NZK i talasemia, jak opisano wcześniej.

   B. Rozpoznanie membranopatii i enzymopatii RBC Dziedziczne zaburzenia błony krwinek czerwonych, takie jak HS i eliptocytoza, zostaną wykryte za pomocą rozmazu krwi, testu osmotycznej kruchości krwinek czerwonych (OFT) z 24-godzinną inkubacją lub bez, testu lizy zakwaszonej glicerolu (AGLT), i znakowanie RBC barwnikiem eozyno-5'-maleimidu (EMA), a następnie pomiar średniej intensywności fluorescencji (MFI) RBC za pomocą cytometrii przepływowej, jak opisano wcześniej.

   Pacjenci, u których rozpoznano HS, będą opierać się na klinicznych i laboratoryjnych objawach przewlekłej hemolizy, obecności sferocytów w PBS oraz dwóch dodatnich testach (test wiązania OFT, AGLT i EMA) lub co najmniej jednym teście z wywiadem rodzinnym w kierunku HS i wykluczeniem inne przyczyny wtórnej sferocytozy.

   Wszyscy pacjenci będą oceniani pod kątem aktywności enzymów RBC, takich jak dehydrogenaza glukozo-6-fosforanowa (G6PD), w celu wykrycia współistnienia enzymopatii i membranopatii RBC.

3. Wykrywanie HPV-B19 i grup porównawczych pacjentów z HHA W okresie badania u każdego pacjenta z HHA wystąpią objawy sugerujące zakażenie HPV-B19 (gorączka/bóle mięśni/wysypka/ artropatia/ powiększenie węzłów chłonnych/gwałtowny spadek poziomu Hb i retikulocytopenia) oraz /lub kontakt z podejrzanym przypadkiem rumienia zakaźnego zostanie zbadany pod kątem statusu immunoglobulin IgM i IgG przeciw parwowirusowi B19. Osoby seronegatywne pod kątem HPV-B19 zostaną ponownie przebadane 2 do 3 tygodni później. Status immunoglobulin HPV-B19 (IgM i IgG) zostanie określony za pomocą technologii chemiluminescencyjnych testów immunologicznych (CLIA) firmy (Diasorin, Saluggia, Włochy). Dodatkowo zostaną wykonane testy serologiczne w kierunku wirusów zapalenia wątroby, HIV, CMV i EBV, aby wykluczyć inne niedawne infekcje wirusowe. Posiewy krwi i czułość zostaną wykonane, aby wykluczyć posocznicę. Obecność objawów podmiotowych, swoistych dla HPV-B19 IgM i brak IgM innych wirusów będzie uważana za dowód niedawnego objawowego zakażenia HPV-B19. Pacjenci zostaną podzieleni na podstawie wcześniejszych kryteriów na dwie grupy.

Grupa I = pacjenci z HHA z ostrym objawowym zakażeniem HPV-B19, Grupa II = pacjenci z HHA bez ostrego objawowego zakażenia HPV-B19. Następnie pacjenci z grupy I zostaną podzieleni w zależności od choroby podstawowej na trzy podgrupy: Grupa Ia: HPV-B19(+)β-thalasemia, Grupa Ib: HPV-B19(+)HS i Grupa Ic: HPV-B19(+)SCA .

Porównane zostaną różne cechy prezentujące zakażenie HPV-B19, takie jak liczba cytopenii, ostra niewydolność nerek (AKI), zapalenie wątroby i poziom hiperbilirubinemii w grupie I. AKI zostanie zdiagnozowane i sklasyfikowane zgodnie z najnowszymi wytycznymi. Skrajna hiperbilirubinemia będzie brana pod uwagę, gdy bilirubina całkowita >25 mg/dl. Zarejestrowano obraz kliniczny na początku badania.

7.4. Inne badania Rozpoznanie pozahematologicznych objawów HPV-B19, związanych z nimi chorób autoimmunologicznych, niedoborów odporności komórkowej i humoralnej zostanie ustalone przy użyciu kilku metod, takich jak wykrycie kilku autoprzeciwciał, cytometria przepływowa, oznaczenie poziomu immunoglobulin w surowicy.

Badania histopatologiczne biopsji szpiku kostnego, śledziony i wątroby będą wykonywane po akceptacji pacjentów w ograniczonych warunkach i zgodnie z wytycznymi dotyczącymi wskazań do biopsji jako:

• Aspiracja i biopsja BM będą wykonywane u pacjentów z uporczywym ciężkim BMF, którzy nie reagują na leczenie.
• Biopsja śledziony od pacjentów, którzy zostaną skierowani do planowej splenektomii zgodnie z zaleceniami dotyczącymi splenektomii w HHA(13).
• Biopsja wątroby zostanie wykonana u pacjentów z uporczywie nieprawidłową czynnością wątroby z dodatnim wynikiem testu serologicznego na autoimmunologiczne lub stwardniające zapalenie dróg żółciowych w celu rozróżnienia choroby podstawowej w celu właściwego leczenia.

Ocena radiologiczna za pomocą echokardiografii, prześwietlenia klatki piersiowej i kości długich oraz USG jamy brzusznej będzie rutynowo przeprowadzana w celu przesiewowego badania wszystkich pacjentów. Pacjenci z HHA ze skrajną hiperbilirubinemią lub żółtaczką obturacyjną zostaną poddani badaniu przesiewowemu za pomocą cholangiopankreatografii rezonansu magnetycznego (MRCP).

Pacjenci z grupy I będą obserwowani co miesiąc przez co najmniej jeden rok po zakażeniu HPV-B19. Pacjenci z grupy II będą skrupulatnie obserwowani na czas pisania tego manuskryptu. W tym okresie zostaną sprawdzone powikłania i profile laboratoryjne, w tym aspiracja BM, jeśli pacjent miał ciężką cytopenię. Wszyscy pacjenci zostaną przeskanowani za pomocą echokardiografii i zbadani za pomocą ultradźwięków, aby zobaczyć pęcherzyk żółciowy, nerki, śledzionę i rozmiar wątroby (cm). Rejestrowane będą interesujące zdarzenia, takie jak niewydolność szpiku kostnego (BMF), sekwestracja śledziony, ból w klatce piersiowej, przełom naczynioruchowy, kamica żółciowa, zapalenie pęcherzyka żółciowego i kamica żółciowa oraz częstotliwość transfuzji