Infezione da parvovirus B19 in pazienti affetti da anemie emolitiche ereditarie

HPV-B19 è il più piccolo virus a DNA lineare a filamento singolo che causa malattie umane. L'esposizione alle secrezioni respiratorie è il mezzo più comune di trasmissione di questo virus. L'infezione è associata a una varietà di manifestazioni che vanno da complicanze asintomatiche a gravi che dipendono dallo stato ematologico e immunologico dell'ospite. Nessuno studio comparativo prospettico ha studiato i rischi associati a questo virus patogeno e ha previsto il decorso della malattia e la morbilità tra i pazienti con anemia emolitica ereditaria (HHA) classificati in base alle loro malattie sottostanti.

Nessuno ha studiato le cause alla base delle diverse e insolite presentazioni nell'infezione sintomatica acuta da HPV-B19 nei pazienti con anemie emolitiche ereditarie. Pertanto, questo primo studio testa a testa per confrontare i pazienti con talassemia, anemia falciforme (SCA) e sferocitosi (HS) presentava un'infezione sintomatica acuta da HPV-B19.

Lo studio della relazione tra viremia, risposta immunitaria umorale e la malattia di base nei pazienti che presentano un'infezione acuta sintomatica da HPV-B19 dovrebbe essere utile per chiarire i meccanismi fisiopatologici non diagnosticati e altri fattori accessori per migliorare la diagnosi e la gestione.

Inoltre, la diagnosi precoce dei fattori di rischio di presentazioni insolite di infezione acuta sintomatica da HPV-B19 sarà uno strumento utile per una migliore strategia di trattamento, follow-up e prognosi, nonché per prevenire complicazioni future

I pazienti ricoverati dalle cliniche ematologiche e dai dipartimenti di emergenza degli ospedali universitari di Sohag e Assiut per complicanze correlate all'HHA o manifestazioni che suggeriscono l'HHA sono stati sottoposti a screening continuo tra febbraio 2018 e febbraio 2020 per l'arruolamento in questo studio e seguiti mensilmente per almeno un anno e 3 anni dopo Infezione da HPV-B19.

Progettazione dello studio

1. Pazienti

I primi 2 anni, i pazienti candidati che avranno evidenza di HHA e/o presenteranno manifestazioni che suggeriscono HHA e acconsentiranno a rispettare le istruzioni di follow-up saranno sottoposti a screening per l'arruolamento in questo studio e altri saranno seguiti per almeno un anno infezione post-HPV-B19. I dati del paziente includeranno dati demografici, comorbidità rilevanti, necessità di ricovero ospedaliero, necessità di trasfusioni di sangue o plasma, terapia sostitutiva renale o plasmaferesi, durata della degenza ospedaliera, completamento del ricovero (dimissione ospedaliera e decesso), eventi cardiaci, neurologici e respiratori eventi, tipo di trattamenti somministrati e parametri infiammatori di laboratorio.

Diagnosi di HHA nei pazienti dello studio

Indagini di laboratorio

1. Indagini biochimiche di routine Test di funzionalità epatica e renale (LFT), bilirubina, glicemia, lipidi e profili ormonali indicati saranno eseguiti su Cobas c 311 e analizzatore automatico P modulare (Roche Diagnostics, Mannheim, Germania), lattato deidrogenasi (LDH)

   : l'analisi verrà eseguita con Dimension Rx Max-Siemens e l'analisi delle urine e verrà eseguito il rapporto albumina-creatinina per tutti i pazienti.

2. Analisi ematologiche Emocromo completo: verranno prelevati campioni di sangue periferico per indagini diagnostiche di laboratorio e follow-up di routine. 2 ml di sangue saranno raccolti su provette rivestite con anticoagulante acido potassio-etilendiammina tetra-acetico (EDTA) per l'emocromo utilizzando Cell-Dyn 3700, contacellule automatizzato (Abbott diagnostic, Dallas, USA).

   Diagnosi di anemia emolitica ereditaria L'HHA sarà sospettata dalla storia clinica/familiare del paziente, esame e test di laboratorio tra cui emocromo completo (CBC), calcolo degli indici dei globuli rossi (RBC), conta dei reticolociti corretta, striscio di sangue periferico (PBS) , studio del ferro, bilirubina totale e diretta (TB, DB), aumento dell'LDH sierico, diminuzione dell'aptoglobina sierica e test dell'antiglobulina diretta negativo (Coomb's).

   La conferma di HHA e l'identificazione dei sottotipi saranno effettuate mediante una serie di indagini specializzate come segue:

   A. Diagnosi di emoglobinopatia

   Il protocollo dell'elettroforesi dell'Hb, il test di solubilità a falce e lo studio delle frazioni di Hb con cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) saranno utilizzati per la diagnosi delle emoglobinopatie, come l'SCA e la talassemia come descritto in precedenza.

   B. Diagnosi di Membranopatia ed Enzimopatia eritrocitaria I disturbi ereditari della membrana dei globuli rossi, come l'HS e l'ellittocitosi, saranno identificati mediante esame dello striscio di sangue, test di fragilità osmotica dei globuli rossi (OFT) con e senza incubazione di 24 ore, test di lisi del glicerolo acidificato (AGLT), e etichettatura RBC con colorante eosina-5'-maleimmide (EMA) e successiva misurazione dell'intensità di fluorescenza media RBC (MFI) mediante citometria a flusso come descritto in precedenza.

   I pazienti considerati affetti da HS si baseranno su segni clinici e di laboratorio di emolisi cronica, presenza di sferociti alla PBS, più due test positivi (OFT, AGLT e test di legame EMA) o almeno un test con una storia familiare di HS ed esclusione di altre cause di sferocitosi secondaria.

   Tutti i pazienti saranno valutati per l'attività degli enzimi RBC, come la glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PD) per rilevare la coesistenza di enzimapatie RBC e membranopatia.

3. Rilevamento di gruppi di confronto di pazienti con HPV-B19 e HHA Durante il periodo di studio, qualsiasi paziente con HHA presenterà manifestazioni che suggeriscono un'infezione da HPV-B19 (febbre/dolori muscolari/rash/artropatia/linfoadenopatia/rapido calo del livello di Hb e reticolocitopenia) e /o il contatto con un caso sospetto di eritema infettivo sarà indagato per lo stato delle immunoglobuline anti-parvovirus B19 IgM e IgG. Quelli sieronegativi per l'HPV-B19 verranno testati nuovamente 2 o 3 settimane dopo. Lo stato delle immunoglobuline HPV-B19 (IgM e IgG) sarà determinato mediante immunodosaggio a chemiluminescenza (CLIA) di (Diasorin, Saluggia, Italia). Inoltre, verranno eseguiti test sierologici per i virus dell'epatite, dell'HIV, del CMV e dell'EBV per escludere altre infezioni virali recenti. Verranno eseguite emocolture e sensibilità per escludere la setticemia. La presenza di segni, sintomi, IgM specifiche per HPV-B19 e l'assenza di IgM di altri virus sarà considerata come prova di una recente infezione sintomatica da HPV-B19. I pazienti saranno divisi in base ai criteri precedenti in due gruppi.

Gruppo I= pazienti HHA con infezione acuta sintomatica da HPV-B19, Gruppo II= pazienti HHA senza infezione acuta sintomatica da HPV-B19. Quindi i pazienti del gruppo I saranno suddivisi in base alla malattia di base in tre sottogruppi: gruppo Ia: HPV-B19(+)β-talassemia, gruppo Ib: HPV-B19(+)HS e gruppo Ic: HPV-B19(+)SCA .

Saranno confrontate le diverse caratteristiche di presentazione dell'infezione da HPV-B19, come un certo numero di citopenie, danno renale acuto (AKI), epatite e livello di iperbilirubinemia nel gruppo I. L'AKI sarà diagnosticato e classificato secondo le ultime linee guida. L'iperbilirubinemia estrema sarà presa in considerazione quando la bilirubina totale è >25 mg/dL. È stata registrata la presentazione clinica al basale.

7.4. Altre indagini La diagnosi di manifestazioni extra-ematologiche di HPV-B19, malattie autoimmuni associate, deficienze immunitarie cellulari e umorali sarà determinata utilizzando diversi metodi come la rilevazione di diversi autoanticorpi, la citometria a flusso, il livello di immunoglobuline sieriche.

Gli studi istopatologici su biopsie di midollo osseo, milza e fegato verranno eseguiti dopo l'accettazione dei pazienti in condizioni ristrette e secondo le linee guida per l'indicazione della biopsia come:

• L'aspirazione e la biopsia del BM verranno eseguite per i pazienti con BMF grave persistente che non hanno risposto al trattamento.
• Biopsia splenica da pazienti che saranno sottoposti a splenectomia elettiva secondo le raccomandazioni riguardanti la splenectomia in HHA (13).
• La biopsia epatica verrà eseguita per i pazienti con funzionalità epatica persistentemente anormale con test sierologico positivo per colangite autoimmune o sclerosante per differenziare la malattia di base per una corretta gestione.

La valutazione radiologica mediante ecocardiografia, radiografia del torace e delle ossa lunghe e ecografia addominale verrà eseguita di routine per lo screening di tutti i pazienti. I pazienti HHA con iperbilirubinemia estrema o ittero ostruttivo saranno sottoposti a screening mediante colangiopancreatografia a risonanza magnetica (MRCP).

I pazienti del gruppo I saranno seguiti mensilmente per almeno un anno dopo l'infezione da HPV-B19. I pazienti del gruppo II saranno diligentemente seguiti per il momento della stesura di questo manoscritto. Durante questo periodo, verranno controllate le complicanze e i profili di laboratorio, inclusa l'aspirazione del BM se il paziente presentava grave citopenia. Tutti i pazienti verranno sottoposti a scansione mediante ecocardiografia ed esaminati mediante ultrasuoni per visualizzare la cistifellea, i reni, la milza e le dimensioni del fegato (cm). Verranno registrati gli eventi di interesse, come l'insufficienza del midollo osseo (BMF), il sequestro della milza, il dolore toracico, la crisi vaso-occlusiva, la colelitiasi, la colecistite e la coledocolitiasi e la frequenza delle trasfusioni