Парвовирусная инфекция B19 у пациентов с наследственными гемолитическими анемиями

ВПЧ-В19 — это наименьший одноцепочечный линейный ДНК-вирус, вызывающий заболевания человека. Воздействие респираторных выделений является наиболее распространенным путем передачи этого вируса. Инфекция связана с различными проявлениями, от бессимптомных до тяжелых осложнений, которые зависят от гематологического и иммунологического статуса хозяина. В проспективных сравнительных исследованиях не изучались риски, связанные с этим патогенным вирусом, и не прогнозировалось течение заболевания и заболеваемость среди пациентов с наследственной гемолитической анемией (ГГА), классифицированных по основным заболеваниям.

Никто не изучал основные причины различных и необычных проявлений острой симптоматической инфекции ВПЧ-В19 у пациентов с наследственными гемолитическими анемиями. Итак, это первое прямое исследование для сравнения пациентов с талассемией, серповидно-клеточной анемией (SCA) и сфероцитозом (HS) с острой симптоматической инфекцией HPV-B19.

Изучение взаимосвязи между виремией, гуморальным иммунным ответом и основным заболеванием у пациентов с острой симптоматической инфекцией ВПЧ-В19 должно быть полезным для уточнения недиагностированных патофизиологических механизмов и других дополнительных факторов для улучшения диагностики и лечения.

Кроме того, ранняя диагностика факторов риска необычных проявлений острой симптоматической инфекции ВПЧ-В19 будет полезным инструментом для улучшения стратегии лечения, последующего наблюдения и прогноза, а также для предотвращения будущих осложнений.

Пациенты, поступившие из гематологических клиник и отделений неотложной помощи университетских больниц Сохаг и Ассиут с осложнениями или проявлениями, связанными с HHA, подвергались непрерывному скринингу в период с февраля 2018 г. по февраль 2020 г. для включения в это исследование и ежемесячному наблюдению в течение как минимум одного года и 3 лет после Инфекция ВПЧ-В19.

Дизайн исследования

1. Пациенты

Первые 2 года пациенты-кандидаты, у которых будут признаки ГГА и/или будут проявляться проявления, указывающие на ГГА, и которые согласятся соблюдать инструкции по последующему наблюдению, будут подвергаться скринингу для включения в это исследование, а дополнительные будут наблюдаться в течение как минимум одного года. после инфицирования ВПЧ-В19. Данные пациента будут включать демографические данные, соответствующие сопутствующие заболевания, потребность в госпитализации, потребность в переливании крови или плазмы, заместительной почечной терапии или плазмаферезе, продолжительность пребывания в больнице, завершение госпитализации (выписка из больницы и смерть), сердечные события, неврологические и респираторные заболевания. события, тип проводимого лечения и воспалительные лабораторные параметры.

Диагностика ГГА у исследуемых пациентов

Лабораторные исследования

1. Рутинные биохимические исследования Функциональные тесты печени и почек (LFT), билирубин, уровень сахара в крови, липидный и указанные гормональные профили будут выполняться на автоматическом анализаторе Cobas c 311& module P (Roche Diagnostics, Мангейм, Германия), лактатдегидрогеназа (LDH)

   : анализ будет проводиться с помощью Dimension Rx Max-Siemens и анализа мочи, а соотношение альбумина и креатинина будет выполняться для всех пациентов.

2. Гематологический анализ Общий анализ крови: образцы периферической крови будут взяты для диагностических лабораторных исследований и планового наблюдения. 2 мл крови будут собираться в пробирку, покрытую антикоагулянтом калий-этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), для общего анализа крови с использованием автоматического счетчика клеток Cell-Dyn 3700 (Abbott Diagnostic, Даллас, США).

   Наследственная гемолитическая анемия Диагноз HHA можно заподозрить на основании клинического/семейного анамнеза пациента, осмотра и лабораторных анализов, включая полный общий анализ крови (CBC), расчет индексов эритроцитов (RBC), скорректированное количество ретикулоцитов, мазок периферической крови (PBS) , исследование железа, общий и прямой билирубин (TB, DB), повышенный сывороточный ЛДГ, сниженный сывороточный гаптоглобин и отрицательный прямой антиглобулиновый тест (Кумб).

   Подтверждение HHA и идентификация подтипов будет осуществляться серией специализированных исследований следующим образом:

   А. Диагностика гемоглобинопатии

   Для диагностики гемоглобинопатий, таких как SCA и талассемия, как описано ранее, будет использоваться протокол электрофореза гемоглобина, серповидная растворимость и изучение фракций гемоглобина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

   B. Диагностика мембранопатии и энзимопатии эритроцитов. Наследственные заболевания мембран эритроцитов, такие как HS и эллиптоцитоз, будут выявлены при исследовании мазка крови, тесте осмотической хрупкости эритроцитов (OFT) с инкубацией в течение 24 часов и без нее, тесте на лизис подкисленного глицерина (AGLT), и мечение эритроцитов красителем эозин-5'-малеимид (EMA) и последующее измерение средней интенсивности флуоресценции эритроцитов (MFI) с помощью проточной цитометрии, как описано ранее.

   Пациенты, у которых предполагается наличие HS, будут основываться на клинических и лабораторных признаках хронического гемолиза, наличии сфероцитов в PBS, а также двух положительных тестах (OFT, AGLT и тест на связывание EMA) или по крайней мере один тест с семейным анамнезом HS и исключением другие причины вторичного сфероцитоза.

   У всех пациентов будет оцениваться активность ферментов эритроцитов, таких как глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (G6PD), для выявления сосуществования энзимопатий эритроцитов и мембранопатии.

3. Выявление HPV-B19 и HHA-пациентов Группы сравнения В течение периода исследования у любого HHA-пациента будут проявления, указывающие на инфекцию HPV-B19 (лихорадка/мышечные боли/сыпь/артропатия/лимфаденопатия/быстрое падение уровня гемоглобина и ретикулоцитопения) и /или контакт с больным с подозрением на инфекционную эритему будет расследован на наличие иммуноглобулина IgM и IgG к парвовирусу B19. Те, у кого серонегативен ВПЧ-В19, будут повторно протестированы через 2-3 недели. Статус иммуноглобулинов HPV-B19 (IgM и IgG) будет определяться с помощью технологии хемилюминесцентного иммуноанализа (ХЛИА) от (Diasorin, Saluggia, Италия). Кроме того, будут проведены серологические тесты на вирусы гепатита, ВИЧ, ЦМВ и ВЭБ, чтобы исключить другие недавние вирусные инфекции. Посевы крови и чувствительность будут выполнены для исключения септицемии. Наличие признаков, симптомов, специфических IgM к ВПЧ-В19 и отсутствие IgM к другим вирусам будет рассматриваться как доказательство недавней симптоматической инфекции ВПЧ-В19. Пациенты будут разделены на основе предыдущих критериев на две группы.

Группа I = пациенты с HHA с острой симптоматической инфекцией HPV-B19, группа II = пациенты с HHA без острой симптоматической инфекции HPV-B19. Затем пациенты группы I будут разделены в зависимости от основного заболевания на три подгруппы: группа Ia: HPV-B19(+)β-талассемия, группа Ib: HPV-B19(+)HS и группа Ic: HPV-B19(+)SCA. .

Будут сравниваться различные проявления инфекции ВПЧ-В19, такие как ряд цитопений, острая почечная недостаточность (ОПП), гепатит и уровень гипербилирубинемии в группе I. ОПП будет диагностироваться и классифицироваться в соответствии с последними рекомендациями. Экстремальную гипербилирубинемию следует рассматривать, когда общий билирубин > 25 мг/дл. Клиническая картина на исходном уровне была зарегистрирована.

7.4. Другие исследования Диагноз внегематологических проявлений ВПЧ-В19, сопутствующих аутоиммунных нарушений, клеточного и гуморального иммунодефицита будет устанавливаться с использованием нескольких методов, таких как определение нескольких аутоантител, проточная цитометрия, определение уровня иммуноглобулинов в сыворотке.

Гистопатологические исследования биоптатов костного мозга, селезенки и печени будут проводиться после поступления пациентов в ограниченных условиях и в соответствии с рекомендациями для показаний к биопсии в следующих случаях:

• Аспирация костного мозга и биопсия будут выполняться у пациентов с персистирующим тяжелым BMF, не ответившим на лечение.
• Биопсия селезенки у пациентов, которым будет проведена плановая спленэктомия в соответствии с рекомендациями относительно спленэктомии при HHA (13).
• Биопсия печени будет проводиться у пациентов с устойчивыми нарушениями функции печени с положительным серологическим тестом на аутоиммунный или склерозирующий холангит, чтобы дифференцировать основное заболевание для правильного лечения.

Рентгенологическая оценка с помощью эхокардиографии, рентгенографии грудной клетки и длинных костей, а также УЗИ брюшной полости будет регулярно проводиться для скрининга всех пациентов. Пациенты с HHA с выраженной гипербилирубинемией или механической желтухой будут обследованы с помощью магнитно-резонансной холангиопанкреатографии (МРХПГ).

Пациенты группы I будут наблюдаться ежемесячно в течение как минимум одного года после инфицирования ВПЧ-В19. Пациенты группы II будут тщательно наблюдаться на момент написания этой рукописи. В течение этого периода будут проверяться осложнения и лабораторные профили, включая аспирацию костного мозга, если у пациента была тяжелая цитопения. Все пациенты будут просканированы с помощью эхокардиографии и обследованы с помощью ультразвука, чтобы увидеть желчный пузырь, почки, селезенку и размер печени (см). Будут зарегистрированы интересующие события, такие как недостаточность костного мозга (BMF), секвестрация селезенки, боль в груди, вазоокклюзионный криз, желчнокаменная болезнь, холецистит и холедохолитиаз, а также частота переливаний.