Infekce parvovirem B19 u pacientů s hereditární hemolytickou anémií

HPV-B19 je nejmenší jednovláknový, lineární DNA virus, který způsobuje lidská onemocnění. Expozice respiračním sekretům je nejčastějším způsobem přenosu tohoto viru. Infekce je spojena s řadou projevů od asymptomatických až po těžké komplikace, které závisejí na hematologickém a imunologickém stavu hostitele. Žádné prospektivní srovnávací studie nezkoumaly rizika spojená s tímto patogenním virem a nepředpovídaly průběh onemocnění a morbiditu u pacientů s hereditární hemolytickou anémií (HHA) klasifikovaných podle jejich základního onemocnění.

Nikdo nezkoumal základní příčiny různých a neobvyklých projevů akutní symptomatické infekce HPV-B19 u pacientů s hereditární hemolytickou anémií. Takže tato první přímá studie srovnávající pacienty s thalassemií, srpkovitou anémií (SCA) a sférocytózou (HS) vykazovala akutní symptomatickou infekci HPV-B19.

Studium vztahu mezi virémií, humorální imunitní odpovědí a základním onemocněním u pacientů s akutní symptomatickou infekcí HPV-B19 by mělo být užitečné pro objasnění nediagnostikovaných patofyziologických mechanismů a dalších přídatných faktorů ke zlepšení diagnózy a léčby.

Včasná diagnostika rizikových faktorů neobvyklých projevů akutní symptomatické infekce HPV-B19 bude navíc užitečným nástrojem pro lepší léčebnou strategii, sledování a prognózu a také pro prevenci budoucích komplikací.

Pacienti přijatí z hematologických klinik a pohotovostních oddělení fakultních nemocnic Sohag a Assiut kvůli komplikacím nebo projevům souvisejícím s HHA byli průběžně od února 2018 do února 2020 vyšetřováni pro zařazení do této studie a měsíčně sledováni po dobu nejméně jednoho roku a 3 let po Infekce HPV-B19.

Návrh studie

1. Pacienti

První 2 roky budou kandidáti, kteří budou mít známky HHA a/nebo budou mít projevy naznačující HHA a budou souhlasit s dodržováním pokynů pro následnou kontrolu, podrobeni screeningu pro zařazení do této studie a další budou sledováni po dobu alespoň jednoho roku po infekci HPV-B19. Údaje o pacientech budou zahrnovat demografické údaje, relevantní komorbidity, potřebu přijetí do nemocnice, potřebu transfuze krve nebo plazmy, renální substituční terapii nebo výměnu plazmy, délku hospitalizace, dokončení hospitalizace (propuštění z nemocnice a úmrtí), srdeční příhody, neurologické a respirační události, typ podávané léčby a zánětlivé laboratorní parametry.

Diagnostika HHA u pacientů ve studii

Laboratorní vyšetření

1. Rutinní biochemická vyšetření Testy jaterních a ledvinových funkcí (LFT), bilirubinu, krevního cukru, lipidů a indikovaných hormonálních profilů budou provedeny na autoanalyzátoru Cobas c 311& modular P (Roche Diagnostics, Mannheim, Německo), laktátdehydrogenáza (LDH)

   : analýza bude provedena pomocí Dimension Rx Max-Siemens a analýza moči a poměr albuminu a kreatininu bude proveden u všech pacientů.

2. Hematologický rozbor Kompletní krevní obraz: vzorky periferní krve budou odebrány pro diagnostická laboratorní vyšetření a rutinní sledování. 2 ml krve budou odebrány do zkumavky potažené antikoagulantem potažené kyselinou draselnou-ethylendiamintetraoctovou (EDTA) pro CBC pomocí Cell-Dyn 3700, automatizovaného počítadla buněk (Abbott diagnostic, Dallas, USA).

   Diagnóza dědičné hemolytické anémie HHA bude podezřelá z klinické/rodinné anamnézy pacienta, vyšetření a laboratorních testů včetně úplného kompletního krevního obrazu (CBC), výpočtu indexů červených krvinek (RBC), opraveného počtu retikulocytů, nátěru z periferní krve (PBS) , studie železa, celkový a přímý bilirubin (TB, DB), zvýšená hladina LDH v séru, snížená hladina haptoglobinu v séru a negativní přímý antiglobulinový (Coombův) test.

   Potvrzení HHA a identifikace podtypů bude provedeno řadou specializovaných vyšetření takto:

   A. Diagnóza hemoglobinopatie

   Protokol elektroforézy Hb, testování srpkovité rozpustnosti a studium frakcí Hb pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) bude použit pro diagnostiku hemoglobinopatií, jako je SCA a talasémie, jak bylo popsáno dříve.

   B. Diagnóza Membranopatie a enzymopatie červených krvinek Dědičné poruchy membrány červených krvinek, jako je HS a elliptocytóza, budou identifikovány vyšetřením krevního nátěru, testem osmotické fragility červených krvinek (OFT) s 24hodinovou inkubací a bez ní, testem acidifikované lýzy glycerolu (AGLT), a RBC značení eosin-5'-maleimidovým (EMA) barvivem a následné měření RBC průměrné intenzity fluorescence (MFI) průtokovou cytometrií, jak bylo popsáno dříve.

   Pacienti, u nichž se předpokládá HS, budou vycházet z klinických a laboratorních příznaků chronické hemolýzy, přítomnosti sférocytů na PBS, plus dvou pozitivních testů (OFT, AGLT a EMA vazebný test) nebo alespoň jednoho testu s rodinnou anamnézou HS a vyloučením jiné příčiny sekundární sférocytózy.

   U všech pacientů bude hodnocena aktivita enzymů červených krvinek, jako je glukóza-6-fosfátdehydrogenáza (G6PD), aby se zjistila koexistence enzymopatií červených krvinek a membránopatií.

3. Detekce srovnávacích skupin HPV-B19 a HHA pacientů Během období studie bude mít každý pacient s HHA projevy naznačující infekci HPV-B19 (horečka/bolesti svalů/vyrážka/artropatie/lymfadenopatie/rychlý pokles hladiny Hb a retikulocytopenie) a /nebo kontakt s podezřením na erythema infectiosum bude vyšetřen na antiparvovirový B19 IgM a IgG imunoglobulinový stav. Ty séronegativní HPV-B19 budou znovu testovány o 2 až 3 týdny později. Stav HPV-B19 imunoglobulinů (IgM a IgG) bude stanoven technologií chemiluminiscenční imunoanalýzy (CLIA) od (Diasorin, Saluggia, Itálie). Kromě toho budou provedeny sérologické testy na viry hepatitidy, HIV, CMV a EBV, aby se vyloučily další nedávné virové infekce. K vyloučení septikémie budou provedeny hemokultury a citlivost. Přítomnost známek, symptomů, HPV-B19 specifických IgM a nepřítomnost IgM jiných virů bude považována za důkaz nedávné symptomatické HPV-B19 infekce. Pacienti budou rozděleni na základě předchozích kritérií do dvou skupin.

Skupina I = HHA pacienti s akutní symptomatickou infekcí HPV-B19, Skupina II = pacienti s HHA bez akutní symptomatické infekce HPV-B19. Poté budou pacienti skupiny I rozděleni podle základního onemocnění do tří podskupin: Skupina Ia: HPV-B19(+)β-talasémie, Skupina Ib: HPV-B19(+)HS a Skupina Ic: HPV-B19(+)SCA .

Budou porovnány různé projevy infekce HPV-B19, jako je řada cytopenií, akutní poškození ledvin (AKI), hepatitida a úroveň hyperbilirubinémie ve skupině I. AKI bude diagnostikován a klasifikován podle posledních pokynů. Extrémní hyperbilirubinémie bude zvažována, když celkový bilirubin > 25 mg/dl. Klinický obraz na začátku byl zaznamenán.

7.4. Další vyšetření Diagnóza extrahematologických projevů HPV-B19, souvisejících autoimunitních poruch, buněčných a humorálních imunitních deficitů bude stanovena pomocí několika metod, jako je detekce několika autoprotilátek, průtoková cytometrie, hladina sérových imunoglobulinů.

Histopatologické studie biopsií BM, sleziny a jater budou provedeny po přijetí pacientem v omezených podmínkách a podle pokynů pro indikaci biopsie jako:

• U pacientů s přetrvávající těžkou BMF nereagující na léčbu bude provedena aspirace BM a biopsie.
• Biopsie sleziny od pacientů, kteří budou předloženi k elektivní splenektomii podle doporučení týkajících se splenektomie u HHA(13).
• U pacientů s trvale abnormálními jaterními funkcemi se sérologickým testem pozitivním na autoimunitní nebo sklerotizující cholangitidu bude provedena jaterní biopsie, aby se odlišilo základní onemocnění pro správnou léčbu.

Pro screening všech pacientů bude rutinně prováděno radiologické vyšetření echokardiografií, rentgenem hrudníku a dlouhých kostí a ultrazvukem břicha. Pacienti s HHA s extrémní hyperbilirubinémií nebo obstrukční žloutenkou budou vyšetřeni magnetickou rezonancí cholangiopankreatikografií (MRCP).

Pacienti skupiny I budou sledováni měsíčně po dobu alespoň jednoho roku po infekci HPV-B19. Pacienti skupiny II budou po dobu psaní tohoto rukopisu pečlivě sledováni. Během tohoto období budou kontrolovány komplikace a laboratorní profily včetně aspirace BM, pokud měl pacient těžkou cytopenii. Všichni pacienti budou skenováni echokardiografií a vyšetřeni ultrazvukem, aby se zjistila velikost žlučníku, ledvin, sleziny a jater (cm). Události, které nás zajímají, budou zaznamenány, jako je selhání kostní dřeně (BMF), sekvestrace sleziny, bolest na hrudi, vazookluzivní krize, cholelitiáza, cholecystitida a choledocholitiáza a frekvence transfuzí