含有锦葵提取物的漱口水的临床评价。

设计：

它设计了三个平行组的随机临床试验，三重掩蔽。 该研究和知情同意书由瓦尔迪维亚卫生服务委员会 (ORD 181/2017) 审查和批准，并根据 CONSORT（赤道网络）编写指南编写。

人口：

参与者选自 2017 年 10 月至 2018 年 12 月期间智利南方大学 (UACh)（智利南部瓦尔迪维亚）牙科诊所中心的口腔和牙周外科。

样本量：

对于样本量的计算，使用 CHX 漱口水的有效性被认为优于安慰剂，根据 Loe & Silness (1963) 参数 0.21（95% CI：0.1-0.31），牙龈指数降低的标准化平均值) (15). 错误概率为 5%，统计功效为 80%，失访率或数据缺失率为 20%。 18 名受试者的参与由研究组确定（计算算法：“二次幂表示 1.21 1，sd1 (0.2) sd2 (0.2) knowns”，STATA V.14.0，STATASp，德克萨斯州，美国）。

樟子松提取物和漱口水的制备：

为了制备樟子松漱口水，使用了在圣保罗大学 (USP) 植物标本室注册的叶子。 识别号 ESA 代金券 # 121403。 将叶子在强制循环烘箱中在 40°C 下干燥 24 小时，然后压碎。 在气候控制 (25 °C) 下用无水乙醇进行提取，并在避光的旋转振荡器中进行彻底提取（7 天）。 在提取序列中，将样品过滤、蒸发浓缩并冻干 72 小时。 EEM 储存在-20°C。 化学监测是通过 HPLC MS/MS 技术进行的 (33)。 基于 M. sylvestris 的漱口水使用 1% 的乙醇载体以 10% 的标准浓度制备，用于将化合物保存在与形态功能稳定性相容的浓度 (32,33)。 对照漱口水含有与前一种相同的载体和组成，但不含活性化合物，CHX 漱口水的浓度为 0.12%，与 CHX 漱口水的载体相同，浓度为 0.12%。

牙周指数记录：

在临床试验之前，两名检查员（E.A 和 A.N）与牙周病学专家一起进行了临床指标（BPE、牙龈指数和菌斑控制记录）登记的校准过程。 为此，来自 UACh 牙科诊所中心的 10 名患者接受了评估，经专家诊断，牙龈指数 (GI) 超过 90%，其中一名牙科六分仪患有中度慢性牙周炎。 考官间和考官内的 kappa 指数分别为 0.89 和 0.80。

向符合选择标准且先前已被诊断的患者解释研究的目的和方法。 同意参加者，签署知情同意书。

在预约当天，检查员确认符合选择标准并记录数据：性别、年龄、卫生习惯、全身性疾病、药物使用和吸烟。

然后我们进行了临床检查，并评估了以下指标：

• Basic Periodontal Examination (BPE)：将口腔分为六分仪，使用WHO标准化牙周探针，通过每颗牙齿的前庭和舌腭在3个点（近中、中、远）进行探诊，记录每个六分仪的最高值，根据以下编码：0（健康组织），1（阳性出血，没有牙周袋），2（存在牙垢，有缺陷的填充物，探针的黑色区域完全可见），3（牙周口袋大于 5.5 毫米）(35)。
• 牙龈指数 (GI)：使用 WHO 标准化的牙周探针，使用从 0（无炎症）到 3（严重炎症）的四分制来探查颊、舌和牙间乳头边缘牙龈 (37,38) .
• 牙菌斑控制记录（PC）：滴5滴牙菌斑显露液，指导患者用舌头做运动，使其在15秒内触及所有牙齿表面。 然后检查所有牙齿的前庭、舌和邻面。 要计算该指数，请将带有牙菌斑的牙齿表面总数相加，将此数字除以口腔中存在的表面总数，然后乘以 100 (39)。

漱口水的随机化和使用：

漱口水的随机化和掩蔽识别由一名研究人员 (B.B.) 完成。 所有漱口水都装在一个 150 mL 的白色小瓶中，每种成分都用只有负责调查员知道的不同颜色标记来识别。

为了确定三组中每位患者的随机化，使用了 www.random.org 页面，结果返回的数字 1、2 或 3 分别对应于组 G1、G2 和 G3。

为此，患者被随机分为 3 个平行研究组：

• G1（绿色）：阳性对照（0.12% CHX）
• G2（橙色）：阴性对照（含酒精的漱口水 0.1%）
• G3（黄色）：实验组（10%樟子松提取物漱口水）。 临床检查后，另一位研究人员 (V.Ll.) 在每份临床记录中记录患者按编号、组和颜色分配的编码。 他将药瓶和剂量分配给对应于随机化组的每位患者，必须用 10 毫升漱口水漱口 1 分钟，每 12 小时一次，持续 7 天。 为了确认干预的后续行动，同一位研究人员每天至少打电话一次，以记住每天的冲洗情况。 这些指示以口头和书面形式发出。

第一次预约后 7 天，由同一名检查员登记 PBE、GI 和 PC 指数，对患者进行重新评估。

控制偏倚风险：

通过数字、组别和颜色编码的掩蔽机制，确保患者不知道他们接受的具体漱口水；考官 E.A 和 A.N 仅限于评估临床方面，并且使用数字编码对数据库进行数据分析。 只有研究员 B.B 知道真正的颜色分配及其相应的研究组和编号。

为了控制参与者卫生习惯改变对牙周指标登记的随机偏倚风险，记录了刷牙频率、牙膏类型和口腔消毒漱口水的使用情况；指示每个参与者保持这些习惯而无需改变口腔卫生频率。

统计数据：

漱口水研究组被定义为独立变量。 在研究开始和干预后 7 天分析的 PC 和 GI 被定义为因变量。 对以下数据进行了描述性统计分析：性别（男性/女性）、年龄（年）、刷牙频率/天、吸烟（吸烟超过 10 支/天）、是否患有慢性病（是/否）和药物消耗（是/否）。 另外，PC和GI的值。 连续变量表示为平均值（标准偏差 - SD）。

在分析统计中，通过Shapiro Wilk检验分析数据的正态性(p>0.05)。 为了比较干预前后3组之间的指标，通过重复测量方差分析（MR）对数据进行分析。 非参数数据呈现为样本的散点图，与 T 检验比较以检测差异。

考虑到属于每个研究组的患者的初始数据的可变性可能会产生结果偏差，因此对基线数据进行了协方差分析 (ANCOVA)。 为了检查研究假设，比较了平均值，研究组之间的结果具有 95% 的置信区间，建立了 p <0.05 的显着性水平