Valutazione clinica di un collutorio contenente estratto di Malva Sylvestris.

Progetto:

Ha progettato uno studio clinico randomizzato di tre gruppi paralleli, triplo mascheramento. Lo studio e il documento di consenso informato sono stati esaminati e approvati dal Comité Ético Científico del Servicio de Salud Valdivia (ORD 181/2017) e scritti secondo le linee guida di scrittura del CONSORT (EQUATOR Network).

Popolazione:

I partecipanti sono stati selezionati dal Dipartimento di Chirurgia Orale e Parodontale del Centro di Clinica Odontoiatrica dell'Universidad Austral de Chile (UACh) (Valdivia, Cile meridionale) durante i mesi da ottobre 2017 a dicembre 2018.

Misura di prova:

Per il calcolo della dimensione del campione, è stata considerata l'efficacia dell'uso del collutorio CHX rispetto al placebo, una media standardizzata nella riduzione dell'indice gengivale secondo i parametri di Loe & Silness (1963) di 0,21 (IC 95%: 0,1-0,31 ) (15). Probabilità di errore del 5%, potenza statistica dell'80% e margine di perdita di follow-up o assenza di dati del 20%. La partecipazione di 18 soggetti è stata determinata dal gruppo di studio (algoritmo di calcolo: "power two means 1.21 1, sd1 (0.2) sd2 (0.2) knowns", STATA V.14.0, STATASp, Texas, USA).

Preparazione dell'estratto di M. sylvestris e del collutorio:

Per la preparazione del collutorio di M. sylvestris sono state utilizzate le foglie registrate nell'erbario dell'Università di San Paolo (USP). Numero di identificazione Voucher ESA # 121403. Le foglie sono state essiccate in stufa a circolazione forzata per 24 h, a 40°C, e successivamente frantumate. L'estrazione è stata effettuata con etanolo assoluto sotto controllo climatico (25°C) e sottoposta ad estrazione esaustiva (7 giorni) in un agitatore rotante protetto dalla luce. Nella sequenza di estrazione, i campioni sono stati filtrati, concentrati per evaporazione e liofilizzati per 72 ore. L'EEM è stato conservato a -20 ° C. Il monitoraggio chimico è stato condotto mediante tecnica HPLC MS/MS (33). Il collutorio a base di M. sylvestris è stato preparato ad una concentrazione standard del 10% utilizzando un veicolo di etanolo all'1% per la conservazione dei composti ad una concentrazione compatibile con la stabilità morfofunzionale (32,33). Il collutorio di controllo presenta lo stesso veicolo e composizione del precedente ma è esente dal composto attivo e il collutorio CHX è stato preparato ad una concentrazione dello 0,12% con lo stesso veicolo come accentuato ad una concentrazione dello 0,12%.

Gli indici parodontali registrano:

Prima della sperimentazione clinica, due esaminatori (E.A e A.N) sono stati sottoposti a un processo di calibrazione per la registrazione degli indici clinici (BPE, indice gengivale e record di controllo della placca) con uno specialista in parodontologia. A tal fine sono stati valutati 10 pazienti del Centro di Cliniche Odontoiatriche dell'UACh, diagnosticati dallo specialista con indice gengivale (GI) superiore al 90% e parodontite cronica moderata in uno dei loro sestanti dentali. Indice kappa inter-esaminatore e intra-esaminatore rispettivamente di 0,89 e 0,80.

L'obiettivo e la metodologia dello studio sono stati spiegati ai pazienti che soddisfacevano i criteri di selezione e che erano già stati precedentemente diagnosticati. Coloro che hanno accettato di partecipare, hanno firmato un documento di consenso informato.

Il giorno dell'appuntamento, gli esaminatori, hanno confermato il rispetto dei criteri di selezione e registrato i dati: sesso, età, abitudini igieniche, malattie sistemiche, uso di droghe e fumo.

Quindi si è proceduto all'esame clinico e sono stati valutati i seguenti indici:

• Esame parodontale di base (BPE): la bocca viene suddivisa in sestanti e utilizzando una sonda parodontale standardizzata dall'OMS, viene eseguito il sondaggio di ciascun dente in 3 punti (mesiale, mediale e distale) per via vestibolare e linguale-palatale di ciascun dente, registrando il valore più alto per sestante, secondo la seguente codifica: 0 (tessuto sano), 1 (sanguinamento positivo, assenza di tasca parodontale), 2 (presenza di tartaro, otturazioni difettose, zona nera della sonda completamente visibile), 3 (parodontale tasca superiore a 5,5 mm) (35).
• Indice gengivale (GI): con una sonda parodontale standardizzata dall'OMS, le papille gengivali marginali buccali, linguali e interdentali vengono sondate, utilizzando una scala a quattro punti da 0 (assenza di infiammazione) a 3 (infiammazione grave) (37,38) .
• Registrazione del controllo della placca (PC): vengono applicate 5 gocce di Plaque Revealing Solution e al paziente viene chiesto di eseguire movimenti con la lingua in modo tale che tocchi tutte le superfici dentali in un tempo di 15 secondi. Vengono quindi esaminate le superfici vestibolari, linguali e interprossimali di tutti i denti. Per calcolare l'indice, sommare il numero totale di superfici dentali con placca, dividere questo numero per il numero totale di superfici presenti in bocca e moltiplicare per 100 (39).

Randomizzazione e uso del collutorio:

La randomizzazione e l'identificazione mascherata dei collutori è stata effettuata da un singolo ricercatore (B.B.). Tutti i collutori sono stati erogati in una fiala bianca da 150 ml e ciascun contenuto è stato identificato da un pennarello di colore diverso noto solo all'investigatore incaricato.

Per determinare la randomizzazione di ciascun paziente all'interno dei tre gruppi è stata utilizzata la pagina www.random.org, con i numeri 1,2 o 3 corrispondenti rispettivamente ai gruppi G1, G2 e G3, restituiti come risultato.

Per questo, i pazienti sono stati randomizzati in 3 gruppi di studio paralleli:

• G1 (verde): controllo positivo (0,12% CHX)
• G2 (arancione): controllo negativo (collutorio per veicolo alcolico 0,1%)
• G3 (giallo): gruppo sperimentale (collutorio al 10% di estratto di M. sylvestris). Dopo l'esame clinico, un altro ricercatore (V.Ll.) registrava in ogni cartella clinica la codifica del paziente assegnata per numero, gruppo e colore. Ha consegnato il flacone e la posologia a ciascun paziente corrispondente al gruppo randomizzato, dovendo sciacquare con 10 ml di collutorio per 1 minuto in bocca, ogni 12 ore per 7 giorni. Per confermare il follow-up dell'intervento, lo stesso ricercatore effettuava telefonate almeno una volta al giorno per ricordare il risciacquo quotidiano. Le istruzioni sono state consegnate verbalmente e per iscritto.

La rivalutazione dei pazienti è stata effettuata 7 giorni dopo il primo appuntamento, dallo stesso esaminatore registrando gli indici PBE, GI e PC.

Controllo del rischio di parzialità:

I meccanismi di mascheramento attraverso la codifica per numero, gruppo e colore, assicuravano che i pazienti non conoscessero lo specifico collutorio ricevuto; gli esaminatori E.A e A.N si sono limitati solo a valutare gli aspetti clinici e l'analisi dei dati è stata eseguita con il database utilizzando la codifica numerica. Solo il ricercatore B.B era a conoscenza della reale assegnazione per colore, con il corrispondente gruppo di studio e numero.

Per controllare il rischio di distorsione casuale nei cambiamenti delle abitudini igieniche dei partecipanti sulla registrazione degli indici parodontali, è stata registrata la frequenza dello spazzolamento, il tipo di dentifricio e l'uso di collutori antisettici orali; indicando a ciascun partecipante di mantenere queste abitudini senza la necessità di modificare la frequenza dell'igiene orale.

Statistiche:

I gruppi di studio sul collutorio sono stati definiti come una variabile indipendente. Il PC e GI analizzati all'inizio e 7 giorni dopo l'intervento dello studio sono stati definiti come variabile dipendente. È stata eseguita un'analisi delle statistiche descrittive dei seguenti dati: sesso (maschile/femminile), età (in anni), frequenza di spazzolamento/giorno, fumo (fuma più di 10 sigarette/giorno), presenza di malattie croniche (Sì/No) e consumo di farmaci (Sì/No). Inoltre, i valori di PC e GI. Le variabili continue sono state presentate come valori medi (deviazione standard - SD).

Nelle statistiche analitiche, la normalità dei dati è stata analizzata dal test di Shapiro Wilk (p> 0,05). Per confrontare gli indici tra i 3 gruppi prima e dopo l'intervento, i dati sono stati analizzati mediante misure ripetute ANOVA (MR). I dati non parametrici sono stati presentati come grafico a dispersione dei campioni, confronto con il test T per rilevare le differenze.

Considerando la variabilità dei dati iniziali dei pazienti appartenenti a ciascun gruppo di studio che può generare un bias di risultato, è stata eseguita un'analisi di covarianza (ANCOVA) dei dati al basale. Per verificare le ipotesi di studio, sono stati confrontati i valori medi, con un intervallo di confidenza del 95% dei risultati tra i gruppi di studio, stabilendo un livello di significatività di p<0,05