1 型糖尿病中 SARS-CoV-2 感染/COVID-19 免疫反应的特征 (TIRID)

目的和目标 该项目的目的是了解 1 型糖尿病 (T1D) 康复期患者随时间推移对 SARS-CoV-2 感染和其他常见感染的宿主免疫反应。 初步数据显示，2019 年之前患上 T1D 的患者中的致糖尿病 T 细胞可以识别 SARS-CoV-2 和其他常见的人类病原体。 如果情况相反，这将为 SARS-CoV-2 或一些常见感染后发生 T1D 提供一个合理的机制。 我们想确定为什么有些人在感染后会患上 T1D。

主要目标是确定感染后发生 T1D 的个体是否携带已知与 T1D 相关的 HLA A*0201 和 HLA*2402 基因，并证明这些个体中的 SARS-CoV-2/病原体特异性杀伤 T 细胞能够直接破坏产生胰岛素的胰腺β细胞。 将使用肽-HLA 多聚体检查病原体特异性 T 细胞识别糖尿病性 T 细胞表位的能力。 将制造交叉反应性 T 细胞受体用于生物物理和结构分析，以便了解 SARS-CoV-2 和其他常见传染源如何诱发 T1D。

该方法将通过用 HLA 抗体对一小部分样本进行染色，检查患 T1D 的恢复期患者是否主要表达人类白细胞抗原 (HLA) HLA A*02 和 HLA*24。 研究人员预计这些疾病风险 HLA 可能会大量富集（>75% 的患者表达这些疾病风险等位基因之一）[2]。 T 细胞文库 [3] 和肽-HLA 多聚体 [4-6] 方法将用于分离通过 HLA A*02 和 HLA*24 识别 SARS-CoV-2 和其他常见病原体表位的 T 细胞。 将测试生成的单克隆 T 细胞群对人类胰腺 β 细胞表面存在的已知糖尿病表位的识别。 如果确定了这种 T 细胞交叉反应性 [7]，团队将对同源 T 细胞受体的互补决定区进行测序，以便将其制造为可溶性蛋白 [8]，用于进一步的生物物理和结构研究 [9， 10]旨在了解 SARS-CoV-2 和其他常见病原体如何在少数个体中诱发 T1D。

该研究将是前瞻性、观察性研究。 参与者将是最近新诊断出 1 型糖尿病的恢复期患者 (n=30)。 符合资格的参与者将由 Cwm Taf Morgannwg 大学健康委员会儿童健康部、卡迪夫和维尔健康委员会儿童健康部以及伦敦圣玛丽医院儿童健康部的儿科内分泌顾问进行鉴定和转介。都是临床研究团队和直接临床护理团队的一部分。 所有参与者及其家长/监护人都将收到参与者信息表，并有时间和隐私来阅读和理解内容。 经过良好临床实践培训的研究团队成员将可以提供支持并回答任何问题。 然后，将通过书面同意书获得知情同意，或者如果是儿科参与者，则通过同意书和家长/监护人同意书获得知情同意。 参与者将获得一个独特的研究编号。

受过培训的抽血师将采集 50 毫升的血液样本（根据参与者的体重，儿童可采集更少的血液样本）。 样本将被匿名化并带有唯一的研究编号。 我们需要招募当天的血液中的外周血单核细胞 (PBMC)。 匿名血液样本将被转移到 T 细胞研究和 Cwm Taf 大学健康委员会实验室进行血清学测试（在 UKAS 认可的实验室进行罗氏 SARS-CoV-2 IgM 和 IgG 测定），并采用适当的 UN3373 包装。 样本将用于免疫学、病毒学和宿主基因检测。 血液将被处理以分离血清和 PBMC，包括宿主 RNA 和 DNA。 T 细胞库将使用 PBMC 建立。 生成的 T 细胞克隆将与已确定的致糖尿病 T 细胞表位进行交叉反应性测试。 T 细胞受体 (TCR) 将从交叉反应 T 细胞中制造出来，以供进一步研究。 PBMC 样品还将使用流式细胞术用同源肽-HLA 多聚体进行染色。 这将生成有关其表型和激活状态的信息。

外行描述：

将使用浓密度梯度溶液和离心机将血液分离成各个组成部分。 白细胞层（PBMC）与血液的其他部分分离并保留。 所有其他部分都被丢弃在漂白剂溶液中，PBMC 被进一步处理以分离 T 细胞，然后这些细胞可以沿着以下五种途径之一进行：

1. 对细胞进行处理以提取 DNA/RNA，并对 DNA/RNA 进行分析以获得有关 T 细胞受体和其他相关分子的信息。 DNA/RNA 提取过程中细胞被杀死。
2. 这些细胞将进行基因编辑，以提供有关正常 T 细胞功能过程的信息。 基因编辑后，细胞将培养 28 天，将经历多轮分裂，并且根据 2004 年人类组织管理局 (HTA) 法案变得不相关。
3. 这些细胞将用于检测，其中它们会暴露于 SARS-CoV-2 蛋白质的重叠部分，然后它们将在培养物中生长 14 天，之后细胞将经历分裂并且不再与 HTA 相关。 将测试对 SARS-CoV-2 蛋白做出反应的细胞，看看它们是否有能力破坏产生胰岛素的胰腺 β 细胞。
4. 使用自动分选机和荧光标记，对细胞进行分选和分析。 在此过程中，细胞会死亡，该过程发生在实验室处理细胞的当天。
5. 细胞将用于基于平板的测定，以了解 T 细胞功能所涉及的过程。 检测后，细胞将被处理，这可能需要 1 到 3 天的时间，具体取决于所使用的检测类型。

该方法是在患者和公众参与之后设计的，由于社交距离，这些活动是远程进行的。