제1형 당뇨병에서 SARS-CoV-2 감염/COVID-19에 대한 면역 반응의 특성 분석 (TIRID)

목표 및 목표 이 프로젝트의 목적은 제1형 당뇨병(T1D)이 발생한 회복기 환자의 SARS-CoV-2 감염 및 기타 일반적인 감염에 대한 숙주 면역 반응을 시간이 지남에 따라 이해하는 것입니다. 예비 데이터에 따르면 2019년 이전에 T1D가 발생한 환자의 당뇨병 유발 T 세포는 SARS-CoV-2 및 기타 일반적인 인간 병원체를 인식할 수 있습니다. 그 반대가 사실이라면 SARS-CoV-2 또는 일부 일반적인 감염 이후 T1D 발병에 대한 그럴듯한 메커니즘을 제공할 것입니다. 일부 사람들에게 감염 후 T1D가 발생하는 이유를 확인하고 싶습니다.

일차 목표는 감염 후 T1D가 발생한 개인이 T1D와 연관된 것으로 알려진 HLA A*0201 및 HLA*2402 유전자를 보유하고 있는지 확인하고 이들 개인의 SARS-CoV-2/병원체 특이적 살해 T 세포가 다음과 같다는 것을 보여주는 것입니다. 인슐린을 생산하는 췌장 베타세포를 직접 파괴할 수 있습니다. 당뇨병 유발성 T 세포 에피토프를 인식하는 병원체 특이적 T 세포의 능력은 펩타이드-HLA 다량체를 사용하여 조사됩니다. 교차 반응성 T 세포 수용체는 SARS-CoV-2 및 기타 일반적인 감염체가 T1D를 유발하는 방법을 이해할 수 있도록 생물물리학적 및 구조적 분석을 위해 제조됩니다.

방법론에서는 T1D가 발생한 회복기 환자가 샘플의 일부를 HLA에 대한 항체로 염색하여 인간 백혈구 항원(HLA) HLA A*02 및 HLA*24를 우세하게 발현하는지 여부를 조사할 것입니다. 연구자들은 이러한 질병 위험 HLA(이러한 질병 위험 대립유전자 중 하나를 발현하는 환자의 >75%)가 크게 강화될 수 있을 것으로 예상합니다[2]. T 세포 라이브러리[3] 및 펩타이드-HLA 다량체[4-6] 접근법은 HLA A*02 및 HLA*24를 통해 SARS-CoV-2 및 기타 일반적인 병원체로부터 에피토프를 인식하는 T 세포를 분리하는 데 사용됩니다. 생성된 단일클론 T 세포 집단은 인간 췌장 베타 세포의 표면에 존재하는 알려진 당뇨병 유발 에피토프의 인식에 대해 테스트됩니다. 이러한 T 세포 교차 반응성[7]이 확인되면 팀은 동족 T 세포 수용체의 상보성 결정 영역의 서열을 분석하여 추가 생물물리학적 및 구조적 연구를 위해 수용성 단백질[8]로 제조될 수 있도록 할 것입니다[9, 10] SARS-CoV-2 및 기타 일반적인 병원체가 소수의 개인에게 어떻게 T1D를 유발할 수 있는지 이해하는 것을 목표로 합니다.

연구는 전향적이고 관찰적인 연구가 될 것입니다. 참가자는 최근 제1형 당뇨병이라는 새로운 진단을 받은 회복기 환자입니다(n=30). 적격 참가자는 Cwm Taf Morgannwg 대학 보건 위원회, 카디프 아동 보건국, 런던 세인트 메리 병원의 아동 보건국 아동 보건국의 컨설턴트 소아 내분비학자로부터 확인되고 추천됩니다. 모두 임상연구팀과 직접 임상진료팀의 일원입니다. 모든 참가자와 부모/보호자는 참가자 정보 시트를 받게 되며 내용을 읽고 이해할 수 있는 시간과 프라이버시를 갖게 됩니다. 우수 임상 실습(Good Clinical Practice) 교육을 받은 연구 팀의 구성원이 지원을 제공하고 모든 질문에 답변해 드릴 것입니다. 사전 동의는 동의서에 서면으로, 소아 참가자의 경우 동의서 및 부모/보호자 동의서를 통해 얻습니다. 참가자에게는 고유한 연구 번호가 발급됩니다.

숙련된 사혈 전문의가 혈액 샘플을 50ml(또는 참가자의 체중에 따라 어린이의 경우 그 이하) 채취합니다. 샘플은 익명으로 처리되며 고유한 연구 번호가 발급됩니다. 모집 당일 혈액 중 말초혈액단핵세포(PBMC)가 필요합니다. 익명화된 혈액 샘플은 적절한 UN3373 포장과 함께 T 세포 연구 및 혈청학 테스트(UKAS 공인 실험실의 Roche SARS-CoV-2 IgM 및 IgG 분석)를 위한 Cwm Taf University Health 위원회 실험실로 전송됩니다. 샘플은 면역학적, 바이러스학적 및 숙주 유전학적 분석에 사용됩니다. 혈액을 처리하여 숙주 RNA와 DNA를 포함하여 혈청과 PBMC를 분리합니다. T 세포 라이브러리는 PBMC를 사용하여 구축됩니다. 생성된 T 세포 클론은 확립된 당뇨병 유발 T 세포 에피토프와의 교차 반응성에 대해 테스트됩니다. TCR(T세포 수용체)은 추가 연구를 위해 교차 반응성 T세포로부터 제조될 예정입니다. PBMC 샘플은 또한 유동 세포측정법을 사용하여 동족 펩타이드-HLA 다량체로 염색됩니다. 이를 통해 표현형 및 활성화 상태에 대한 정보가 생성됩니다.

평신도 설명:

두꺼운 밀도 구배 용액과 원심 분리기를 사용하여 혈액을 구성 부분으로 분리합니다. 백혈구층(PBMC)은 혈액의 다른 부분에서 분리되어 유지됩니다. 다른 모든 부분은 표백제 용액에 버려집니다. PBMC는 추가 처리를 거쳐 T 세포를 분리합니다. 그런 다음 이 세포는 5가지 경로 중 하나로 이동할 수 있습니다.

1. 세포를 처리하여 DNA/RNA를 추출하고 DNA/RNA를 분석하여 T 세포 수용체 및 기타 관련 분자에 대한 정보를 얻습니다. DNA/RNA 추출 중에 세포가 죽습니다.
2. 세포는 정상적인 T 세포 기능과 관련된 과정에 대한 정보를 제공하기 위해 유전자 편집을 받게 됩니다. 세포는 유전자 편집 후 28일 동안 배양되며 여러 차례의 분열을 거치게 되며 2004년 인간 조직 당국(HTA) 법의 관점에서 관련성이 없게 됩니다.
3. 세포는 SARS-CoV-2 단백질의 중첩된 비트에 노출되는 분석에 사용됩니다. 그런 다음 14일 동안 배양하여 배양한 후 세포가 분열을 거쳐 더 이상 HTA와 관련되지 않게 됩니다. SARS-CoV-2 단백질에 반응하는 세포는 인슐린을 생산하는 췌장 베타 세포를 파괴할 수 있는 능력이 있는지 확인하기 위해 테스트됩니다.
4. 자동화된 분류기와 형광 마커를 사용하여 세포를 분류하고 분석합니다. 세포는 실험실에서 세포가 처리되는 날 발생하는 이 과정 동안 죽게 됩니다.
5. 세포는 T 세포 기능과 관련된 과정에 대해 배우기 위해 플레이트 기반 분석에 사용됩니다. 세포는 분석 후 폐기되며, 사용된 분석 유형에 따라 1~3일이 소요될 수 있습니다.

이 방법론은 사회적 거리두기로 인해 원격으로 실시된 환자 및 대중 참여에 따라 설계되었습니다.