中性粒细胞衍生的 ROS 产生的测量可以成为脓毒症的新生物标志物吗？ (LIT-sepsis)

介绍：

脓毒症被定义为宿主对感染的反应失调，导致器官功能障碍。 败血症和败血性休克都是影响数百万人的重要健康问题，每年导致世界各地严重的死亡率。 诊断和开始适当治疗的延迟是脓毒症相关死亡的最重要原因。 另一方面，脓毒症的过度诊断和不恰当地开始广谱抗生素治疗会产生一些后果，例如医院费用增加、抗生素相关副作用、抗生素耐药性增加以及耐药性医院感染的发生。 为了做出这种精确区分，迄今为止，人们对大量生物标志物进行了研究。 脓毒症相关生物标志物的预期益处是检测感染和脓毒症、预测脓毒症病程或指导治疗的潜力。 尽管有超过150个生物标志物在这个课题上进行了研究，但在临床实践中，没有一个生物标志物能够在各个方面满足这些期望。

中性粒细胞在脓毒症宿主反应的发展中起着至关重要的作用。 中性粒细胞利用多种不同的机制进行运作，包括趋化性、吞噬作用、活性氧 (ROS) 和颗粒蛋白的释放，以及为此目的产生和释放细胞因子。 对抗感染需要控制中性粒细胞反应。 最近，一种评估白细胞（主要是中性粒细胞）响应体外化学刺激产生 ROS 能力的功能测定已得到证实。 白细胞免疫测试™ (LIT™) 使用从毛细血管、动脉或静脉来源获得的少量血液，特异性快速（10 分钟）量化中性粒细胞 ROS 释放。 因此，LIT 评分提供了一种生理相关的方法，用于实时监测中性粒细胞产生超氧自由基的细胞能力。 中性粒细胞细胞功能障碍的客观标志物将成为临床医生检测和监测与感染状态相关的变化以及确定败血症的发展和干预措施的积极效果的有用工具。

方法：

该研究是一项经伦理委员会批准的前瞻性观察研究，在一所大学附属医院的内科重症监护室进行。 患者群体由因各种感染原因入住 ICU 或住院的患者组成。 对照组由门诊患者或因非感染性原因入住 ICU 或住院的患者组成。 对临床样本进行 PMA 反应产生的 ROS，并在收集后 30 分钟内进行分析。 每天或每隔一天对患者组进行 LIT 测试，直至死亡或从进行研究的单位出院。 门诊组仅在门诊对照日进行一次 LIT 测试。

通过光度计测量 ROS 产生：

ROS 的产生是通过常规测试的临床样本来测量的。 简而言之，将 10μl 新鲜获得的血液样品（通过静脉穿刺获得）添加到含有佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯（PMA；Sigma）和鲁米诺的 100 微升磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。 将溶液在 37.5 °C 下孵育 10 分钟。 10 分钟后，使用手持式发光计（3M、Clean-Trace、NG3）以相对光单位 (RLU) 量化化学发光。 绘制了与每位患者的中性粒细胞功能相关的 LIT 评分。 异常高（过量）的 ROS 生成与感染、脓毒症或感染性休克有关。 这提高了 LIT™ 和 LIT™/中性粒细胞计数比 (LIT/N) 用作预测临床工具的可能性。