Může být měření produkce ROS odvozené od neutrofilů novým biomarkerem sepse? (LIT-sepsis)

Úvod:

Sepse je definována jako dysregulovaná reakce hostitele na infekci vedoucí k orgánové dysfunkci. Sepse i septický šok jsou důležitými zdravotními problémy, které postihují miliony lidí a jejichž důsledkem je každoročně vážná úmrtnost na celém světě. Zpoždění diagnózy a zahájení vhodné léčby jsou nejdůležitějšími příčinami mortality související se sepsí. Na druhou stranu nadměrná diagnostika sepse a nevhodné zahájení širokospektrální antibiotické terapie má některé důsledky, jako jsou zvýšené náklady na nemocnice, nežádoucí účinky související s antibiotiky, zvýšená antibiotická rezistence a rozvoj rezistentních nozokomiálních infekcí. Aby bylo možné toto přesné rozlišení provést, bylo dosud studováno velké množství biomarkerů. Očekávaným přínosem biomarkerů souvisejících se sepsí je detekce infekce a sepse, možnost predikce průběhu sepse nebo vedení léčby. Přestože je na toto téma studováno více než 150 biomarkerů, v klinické praxi neexistuje jediný biomarker, který by tato očekávání ve všech aspektech splňoval.

Neutrofily hrají zásadní roli ve vývoji odpovědi hostitele při sepsi. Neutrofily fungují pomocí řady různých mechanismů včetně chemotaxe, fagocytózy, uvolňování reaktivních forem kyslíku (ROS) a granulárních proteinů a produkce a uvolňování cytokinů pro tento účel. K boji s infekcemi je nutná řízená reakce neutrofilů. Nedávno byl prokázán funkční test, který hodnotí schopnost leukocytů (především neutrofilů) produkovat ROS v reakci na chemickou stimulaci in vitro. Leukocyte ImmunoTest™ (LIT™) specificky a rychle (10 minut) kvantifikuje uvolňování neutrofilů ROS pomocí malého objemu krve, kterou lze získat z kapilárních, arteriálních nebo venózních zdrojů. Skóre LIT jako takové poskytuje fyziologicky relevantní prostředek pro monitorování buněčné kapacity neutrofilů produkovat superoxidové radikály v reálném čase. Objektivní marker buněčné dysfunkce neutrofilů by byl užitečným nástrojem pro lékaře při detekci a sledování změn souvisejících se stavem infekce a pro stanovení vývoje sepse a pozitivních účinků intervencí.

Metoda:

Studie byla provedena jako prospektivní observační studie se souhlasem etické komise na jednotce intenzivní péče a interním oddělení interního oddělení fakultní nemocnice. Populaci pacientů tvoří pacienti, kteří byli přijati na JIP nebo dovnitř pro různé infekční etiologie. Kontrolní skupinu tvoří ambulantní nebo hospitalizovaní pacienti přijatí na JIP nebo interní pro neinfekční etiologii. Produkce ROS v reakci na PMA byla provedena na klinických vzorcích a analyzována do 30 minut od odběru. LIT test byl prováděn každý den nebo každý druhý den pro skupinu pacientů až do smrti nebo propuštění z jednotek, kde se studie provádí. LIT test byl proveden pouze jednou pro ambulantní skupinu v den ambulantní kontroly.

Měření produkce ROS luminometrem:

Produkce ROS byla měřena na klinických vzorcích odebraných pro rutinní testování. Stručně, 10 ul vzorků čerstvě získané krve (získané venepunkcí) bylo přidáno do 100 mikrolitrů fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku (PBS) obsahujícího forbol 12-myristát 13-acetát (PMA; Sigma) a luminol. Roztok byl inkubován po dobu 10 minut při 37,5 °C. Chemiluminiscence byla kvantifikována po 10 minutách pomocí ručního luminometru (3M, Clean-Trace, NG3) v ​​relativních světelných jednotkách (RLU). Skóre LIT jako korelát funkce neutrofilů pro každého pacienta bylo vyneseno do grafu. Abnormálně vysoká (hyperprodukce) generace ROS byla spojena s infekcí, sepsí nebo septickým šokem. To zvyšuje možnost použití LIT™ a LIT™/poměr počtu neutrofilů (LIT/N) jako prediktivní klinický nástroj.