Voiko neutrofiiliperäisen ROS-tuotannon mittaaminen olla uusi sepsiksen biomarkkeri? (LIT-sepsis)

Esittely:

Sepsis määritellään säätelemättömäksi isännän vasteeksi infektiolle, joka johtaa elinten toimintahäiriöihin. Sepsis ja septinen sokki ovat tärkeitä terveysongelmia, jotka vaikuttavat miljooniin ihmisiin, mikä johtaa vakavaan kuolleisuuteen ympäri maailmaa joka vuosi. Viivästyminen sekä diagnoosissa että asianmukaisen hoidon aloittamisessa ovat tärkeimmät sepsikseen liittyvän kuolleisuuden syyt. Toisaalta sepsiksen ylidiagnosoinnilla ja laajakirjoisen antibioottihoidon epäasianmukaisella aloituksella on joitain seurauksia, kuten lisääntyneet sairaalakustannukset, antibiooteihin liittyvät sivuvaikutukset, lisääntynyt antibioottiresistenssi ja vastustuskykyisten sairaalainfektioiden kehittyminen. Tämän tarkan eron tekemiseksi suuri määrä biomarkkereita on tutkittu tähän päivään asti. Sepsikseen liittyvien biomarkkerien odotettu hyöty on infektion ja sepsiksen havaitseminen, kyky ennustaa sepsiksen kulkua tai hoito-opastus. Vaikka tästä aiheesta on tutkittu yli 150 biomarkkeria, kliinisessä käytännössä ei ole yhtäkään biomarkkeria, joka täyttäisi nämä odotukset kaikilta osin.

Neutrofiileillä on elintärkeä rooli isännän vasteen kehittymisessä sepsiksessä. Neutrofiilit toimivat käyttämällä useita erilaisia ​​mekanismeja, mukaan lukien kemotaksis, fagosytoosi, reaktiivisten happilajien (ROS) ja rakeisten proteiinien vapautuminen sekä sytokiinien tuotanto ja vapautuminen tätä tarkoitusta varten. Hallittua neutrofiilivastetta tarvitaan infektioiden torjumiseksi. Äskettäin on osoitettu toiminnallinen määritys, joka arvioi leukosyyttien (ensisijaisesti neutrofiilien) kykyä tuottaa ROS:ia vasteena in vitro kemialliseen stimulaatioon. Leukocyte ImmunoTest™ (LIT™) määrittää spesifisesti ja nopeasti (10 minuuttia) neutrofiilien ROS:n vapautumisen käyttämällä pientä määrää verta, joka saadaan kapillaari-, valtimo- tai laskimolähteistä. Sellaisenaan LIT-pistemäärä tarjoaa fysiologisesti merkityksellisen tavan seurata neutrofiilien solukapasiteettia tuottaa superoksidiradikaaleja reaaliajassa. Objektiivinen neutrofiilien solujen toimintahäiriön markkeri olisi avulias työkalu kliinikolle infektiostatukseen liittyvien muutosten havaitsemisessa ja seurannassa sekä sepsiksen kehittymisen ja interventioiden positiivisten vaikutusten määrittämisessä.

Menetelmä:

Tutkimus tehtiin prospektiivisena havainnointitutkimuksena eettisen komitean hyväksynnällä lääketieteellisen tehohoidon osastolla ja kuului yliopistollisen sairaalan sisätautiosastolle. Potilaspopulaatio koostuu potilaista, jotka joutuivat teho-osastolle tai sisäänpäin erilaisten tartuntatautien vuoksi. Kontrolliryhmä koostuu avo- tai laitospotilaista, jotka on otettu teho-osastolle tai sisäänpäin ei-tarttuvien etiologioiden vuoksi. ROS-tuotanto vasteena PMA:lle suoritettiin kliinisistä näytteistä ja analysoitiin 30 minuutin kuluessa keräämisestä. LIT-testi suoritettiin joka päivä tai joka toinen päivä potilasryhmälle kuolemaan asti tai kotiutumiseen yksiköistä, joissa tutkimus suoritetaan. LIT-testi tehtiin vain kerran avohoitoryhmälle avohoitopäivänä.

ROS-tuotannon mittaukset luminometrillä:

ROS-tuotanto mitattiin rutiinitestausta varten otetuista kliinisistä näytteistä. Lyhyesti sanottuna 10 μl näytettä vasta saatua verta (saatiin venepunktiolla) lisättiin 100 mikrolitraan fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS), joka sisälsi forboli-12-myristaatti-13-asetaattia (PMA; Sigma) ja luminolia. Liuosta inkuboitiin 10 minuuttia 37,5 °C:ssa. Kemiluminesenssi määritettiin 10 minuutin kuluttua käyttämällä kädessä pidettävää luminometriä (3M, Clean-Trace, NG3) suhteellisissa valoyksiköissä (RLU). Kunkin potilaan LIT-pisteet neutrofiilien toiminnan korrelaatioina piirrettiin. Epänormaalin korkea (hypertuotanto) ROS-tuotanto liittyi infektioon, sepsikseen tai septiseen sokkiin. Tämä lisää mahdollisuutta käyttää LIT™- ja ​​LIT™/neutrofiilien määräsuhdetta (LIT/N) ennustavana kliinisenä työkaluna.