¿Puede la medición de la producción de ROS derivada de neutrófilos ser un nuevo biomarcador de sepsis? (LIT-sepsis)

Introducción:

La sepsis se define como la respuesta desregulada del huésped a la infección que conduce a la disfunción orgánica. Tanto la sepsis como el shock séptico son importantes problemas de salud que afectan a millones de personas y que cada año provocan una grave tasa de mortalidad en todo el mundo. El retraso tanto en el diagnóstico como en el inicio del tratamiento adecuado son las causas más importantes de mortalidad relacionada con la sepsis. Por otro lado, el sobrediagnóstico de sepsis y el inicio inadecuado de la terapia con antibióticos de amplio espectro tienen algunas consecuencias, como el aumento de los costos hospitalarios, los efectos secundarios relacionados con los antibióticos, el aumento de la resistencia a los antibióticos y el desarrollo de infecciones nosocomiales resistentes. Para hacer esta distinción precisa, hasta el día de hoy se han estudiado un gran número de biomarcadores. El beneficio esperado de los biomarcadores relacionados con la sepsis es la detección de infección y sepsis, el potencial para predecir el curso de la sepsis o la orientación del tratamiento. Aunque existen más de 150 biomarcadores estudiados sobre este tema, no existe un solo biomarcador que cumpla estas expectativas en todos los aspectos en la práctica clínica.

Los neutrófilos juegan un papel vital en el desarrollo de la respuesta del huésped en la sepsis. Los neutrófilos operan utilizando una serie de mecanismos diferentes que incluyen quimiotaxis, fagocitosis, liberación de especies reactivas de oxígeno (ROS) y proteínas granulares, y la producción y liberación de citoquinas para este propósito. Se requiere una respuesta controlada de neutrófilos para combatir las infecciones. Recientemente se ha demostrado un ensayo funcional que evalúa la capacidad de los leucocitos (principalmente neutrófilos) para producir ROS en respuesta a la estimulación química in vitro. El Leukocyte ImmunoTest™ (LIT™) cuantifica de manera específica y rápida (10 minutos) la liberación de ROS de neutrófilos utilizando un pequeño volumen de sangre que se puede obtener de fuentes capilares, arteriales o venosas. Como tal, la puntuación LIT proporciona un medio fisiológicamente relevante para monitorear la capacidad celular de los neutrófilos para producir radicales superóxido en tiempo real. Un marcador objetivo de la disfunción celular de los neutrófilos sería una herramienta útil para que el médico detecte y controle los cambios relacionados con el estado de infección y para determinar el desarrollo de sepsis y los efectos positivos de las intervenciones.

Método:

El estudio se realizó como un estudio observacional prospectivo con la aprobación del comité de ética en una unidad médica de cuidados intensivos y perteneciente al departamento de enfermedades internas de un hospital universitario. La población de pacientes está compuesta por pacientes que ingresaron a la UCI o internados debido a diversas etiologías infecciosas. El grupo control está formado por pacientes ambulatorios o ingresados ​​en la UCI o internados por etiologías no infecciosas. La producción de ROS en respuesta a PMA se realizó en muestras clínicas y se analizó dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección. La prueba de LIT se realizó todos los días o cada dos días para el grupo de pacientes hasta la muerte o el alta de las unidades donde se realiza el estudio. La prueba LIT se realizó solo una vez para el grupo de pacientes ambulatorios el día del control ambulatorio.

Mediciones de producción de ROS por luminómetro:

La producción de ROS se midió en muestras clínicas tomadas para pruebas de rutina. Brevemente, se añadieron 10 μl de muestras de sangre recién obtenida (obtenida mediante venopunción) a 100 microlitros de solución salina tamponada con fosfato (PBS) que contenía forbol 12-miristato 13-acetato (PMA; Sigma) y luminol. La solución se incubó durante 10 minutos a 37,5 °C. La quimioluminiscencia se cuantificó después de 10 minutos usando un luminómetro portátil (3M, Clean-Trace, NG3) en unidades relativas de luz (RLU). Se trazaron las puntuaciones de LIT como un correlato de la función de los neutrófilos para cada paciente. La generación de ROS anormalmente alta (hiperproducción) se asoció con infección, sepsis o shock séptico. Esto plantea la posibilidad de que LIT™ y LIT™/recuento de neutrófilos (LIT/N) se utilicen como herramienta clínica predictiva.