A medição da produção de ROS derivada de neutrófilos pode ser um novo biomarcador de sepse? (LIT-sepsis)

Introdução:

A sepse é definida como a resposta desregulada do hospedeiro à infecção levando à disfunção orgânica. Tanto a sepse quanto o choque séptico são importantes problemas de saúde que afetam milhões de pessoas, resultando em uma grave taxa de mortalidade em todo o mundo todos os anos. O atraso no diagnóstico e no início do tratamento adequado são as causas mais importantes de mortalidade relacionada à sepse. Por outro lado, o sobrediagnóstico de sepse e o início inadequado de antibioticoterapia de amplo espectro trazem algumas consequências, como aumento dos custos hospitalares, efeitos colaterais relacionados aos antibióticos, aumento da resistência aos antibióticos e desenvolvimento de infecções nosocomiais resistentes. Para fazer essa distinção precisa, um grande número de biomarcadores foi estudado até hoje. O benefício esperado dos biomarcadores relacionados à sepse é a detecção de infecção e sepse, o potencial de prever o curso da sepse ou a orientação do tratamento. Embora existam mais de 150 biomarcadores estudados sobre o assunto, não existe um único biomarcador que atenda a essas expectativas em todos os aspectos da prática clínica.

Os neutrófilos desempenham um papel vital no desenvolvimento da resposta do hospedeiro na sepse. Os neutrófilos operam usando vários mecanismos diferentes, incluindo quimiotaxia, fagocitose, liberação de espécies reativas de oxigênio (ROS) e proteínas granulares, além da produção e liberação de citocinas para esse fim. Uma resposta controlada de neutrófilos é necessária para combater infecções. Recentemente, foi demonstrado um ensaio funcional que avalia a capacidade dos leucócitos (principalmente neutrófilos) de produzir ERO em resposta à estimulação química in vitro. O Leukocyte ImmunoTest™ (LIT™) especifica e rapidamente (10 minutos) quantifica a liberação de ROS de neutrófilos usando um pequeno volume de sangue obtido de fontes capilares, arteriais ou venosas. Como tal, o escore LIT fornece um meio fisiologicamente relevante para monitorar a capacidade celular dos neutrófilos de produzir radicais superóxido em tempo real. Um marcador objetivo de disfunção celular de neutrófilos seria uma ferramenta útil para o clínico na detecção e monitoramento de alterações relacionadas ao estado de infecção e para determinar o desenvolvimento de sepse e os efeitos positivos das intervenções.

Método:

O estudo foi conduzido como um estudo observacional prospectivo com aprovação do comitê de ética em uma unidade de terapia intensiva médica e pertencente ao departamento de doenças internas de um hospital universitário. A população de pacientes é composta por pacientes que foram admitidos na UTI ou internados devido a várias etiologias infecciosas. O grupo controle é composto por pacientes ambulatoriais ou internados em UTI ou internados por etiologias não infecciosas. A produção de ROS em resposta ao PMA foi realizada em amostras clínicas e analisadas até 30 minutos após a coleta. O teste LIT foi realizado diariamente ou em dias alternados para o grupo de pacientes até o óbito ou alta das unidades onde o estudo é realizado. O teste LIT foi realizado apenas uma vez para o grupo ambulatorial no dia do controle ambulatorial.

Medições da produção de ROS por luminômetro:

A produção de ROS foi medida em amostras clínicas coletadas para testes de rotina. Resumidamente, amostras de 10μl de sangue recém-obtido (obtido por punção venosa) foram adicionadas a 100 microlitros de solução salina tamponada com fosfato (PBS) contendo forbol 12-miristato 13-acetato (PMA; Sigma) e luminol. A solução foi incubada por 10 minutos a 37,5 °C. A quimioluminescência foi quantificada após 10 minutos usando luminômetro portátil (3M, Clean-Trace, NG3) em unidades relativas de luz (RLU). Os escores de LIT como um correlato da função dos neutrófilos para cada paciente foram plotados. A geração anormalmente alta (hiperprodução) de ROS foi associada a infecção, sepse ou choque séptico. Isso aumenta a possibilidade de LIT™ e LIT™/razão de contagem de neutrófilos, (LIT/N), serem usados ​​como uma ferramenta clínica preditiva.