Может ли измерение продукции нейтрофильных АФК быть новым биомаркером сепсиса? (LIT-sepsis)

Введение:

Сепсис определяется как нерегулируемый ответ хозяина на инфекцию, приводящий к органной дисфункции. Как сепсис, так и септический шок являются серьезными проблемами со здоровьем, от которых страдают миллионы людей, что приводит к серьезному уровню смертности во всем мире каждый год. Задержка как в диагностике, так и в начале соответствующего лечения являются наиболее важными причинами смертности, связанной с сепсисом. С другой стороны, гипердиагностика сепсиса и неадекватное начало антибиотикотерапии широкого спектра действия имеют некоторые последствия, такие как увеличение больничных расходов, побочные эффекты, связанные с антибиотиками, повышение устойчивости к антибиотикам и развитие резистентных внутрибольничных инфекций. Чтобы провести это точное различие, до сегодняшнего дня было изучено большое количество биомаркеров. Ожидаемая польза биомаркеров, связанных с сепсисом, заключается в обнаружении инфекции и сепсиса, возможности прогнозирования течения сепсиса или в руководстве по лечению. Хотя по этому вопросу изучено более 150 биомаркеров, нет ни одного биомаркера, который соответствовал бы этим ожиданиям во всех аспектах клинической практики.

Нейтрофилы играют жизненно важную роль в развитии реакции хозяина при сепсисе. Нейтрофилы действуют с использованием ряда различных механизмов, включая хемотаксис, фагоцитоз, высвобождение активных форм кислорода (АФК) и зернистых белков, а также выработку и высвобождение цитокинов для этой цели. Для борьбы с инфекциями требуется контролируемый ответ нейтрофилов. Недавно был продемонстрирован функциональный анализ, который оценивает способность лейкоцитов (в первую очередь нейтрофилов) продуцировать АФК в ответ на химическую стимуляцию in vitro. Leukocyte ImmunoTest™ (LIT™) точно и быстро (10 минут) определяет количество высвобождения АФК нейтрофилами с использованием небольшого объема крови, полученной из капиллярных, артериальных или венозных источников. Таким образом, оценка LIT обеспечивает физиологически значимые средства для мониторинга клеточной способности нейтрофилов продуцировать супероксидные радикалы в режиме реального времени. Объективный маркер клеточной дисфункции нейтрофилов был бы полезным инструментом для клинициста при выявлении и мониторинге изменений, связанных с инфекционным статусом, а также для определения развития сепсиса и положительных эффектов вмешательств.

Метод:

Исследование проводилось как проспективное обсервационное исследование с одобрения этического комитета в отделении интенсивной терапии и внутри отделения внутренних болезней университетской больницы. Контингент больных составляют пациенты, поступившие в отделение интенсивной терапии или стационарные по поводу различной инфекционной этиологии. Контрольную группу составили амбулаторные или стационарные больные, поступившие в ОИТ или внутрь по поводу неинфекционной этиологии. Выработку АФК в ответ на ФМА проводили на клинических образцах и анализировали в течение 30 минут после сбора. ЛИТ-тест проводили ежедневно или через день для группы пациентов до наступления смерти или выписки из отделений, в которых проводилось исследование. ЛИТ-тест проводился только один раз для амбулаторной группы в день амбулаторного контроля.

Измерения продукции АФК люминометром:

Производство АФК измеряли на клинических образцах, взятых для рутинного тестирования. Вкратце, 10 мкл образцов свежеполученной крови (полученной путем венепункции) добавляли к 100 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS), содержащего форбол-12-миристат-13-ацетат (PMA; Sigma) и люминол. Раствор инкубировали в течение 10 минут при 37,5°С. Хемилюминесценцию количественно определяли через 10 минут с помощью ручного люминометра (3M, Clean-Trace, NG3) в относительных световых единицах (RLU). Были нанесены баллы LIT как коррелят функции нейтрофилов для каждого пациента. Аномально высокое (гиперпродукция) образование АФК было связано с инфекцией, сепсисом или септическим шоком. Это повышает вероятность использования LIT™ и LIT™/количества нейтрофилов (LIT/N) в качестве прогностического клинического инструмента.