吸烟对种植体周围炎的影响

这项横断面研究将与瑞士伯尔尼大学牙科学院牙周病学系、哈塔伊·穆斯塔法·凯末尔大学、多库兹·埃鲁尔大学、加齐大学和土耳其埃格大学合作进行。 该研究的第一步将在土耳其进行，第二步将在瑞士进行。 由于哈塔伊是土耳其2023年地震中受灾最严重的三个省份之一，哈塔伊穆斯塔法凯末尔大学牙科学校受损严重，因此无法从哈塔伊患者中采集样本。 因此，该项目被规划为多中心项目，患者样本将从 Dokuz Eylül、加齐大学和埃格大学牙科学院牙周病学系招募。 样本将在瑞士伯尔尼大学牙周病学系口腔微生物学实验室进行分析。 该研究方案得到了 Dokuz Eylul 大学人类受试者研究伦理委员会的批准（方案号：2023/GOA-8246）。

这项研究将包括 96 名患者，平均分为四组：

• 患有种植体周围炎的吸烟者
• 患有种植体周围炎的非吸烟者
• 种植体周围组织健康的吸烟者
• 种植体周围组织健康的非吸烟者

吸烟状况将分为两组：吸烟者和非吸烟者（从不吸烟）。 非吸烟者群体将包括至少 6 年前戒烟的前吸烟者。

计算每日吸烟支数、吸烟指数（自报平均每日支数×吸烟年数）、吸烟年数（自报平均每日支数×吸烟年数/吸烟年数）口袋）。 根据自我报告检测吸烟状况。 吸烟状况稍后将通过唾液可替宁水平进行验证。 吸烟时唾液可替宁浓度为 5-7 ng/ml。 吸烟的严重程度将由较高的浓度决定。

牙周参数 临床牙周测量将使用以下方法进行评估以进行牙周诊断。 测量将使用 Williams 牙周探针（Hu-Friedy，芝加哥，伊利诺伊州，美国）进行，包括探查袋深度 (PPD)、临床附着水平 (CAL)、菌斑指数 (PI) 26、牙龈指数 (GI) 27、每颗牙齿上每颗牙齿六个部位（近颊、颊、远颊、近中舌、舌和远舌）的探诊出血百分比 (BOP) 28。

牙周疾病和状况的诊断将根据 2017 年牙周和种植体周围疾病和状况分类世界研讨会提出的放射学和临床诊断标准进行。29 种植体周围的健康状况将通过是否存在视觉症状来评估炎症、探诊出血以及初次愈合后进一步骨质流失，骨质流失不应≥2 毫米。 种植体周围炎患者的标准是 PPD ≥ 6 mm，并伴有大量出血和骨质流失 ≥ 3 mm。

患者人口统计和临床牙周/种植体周围检查

将收集以下变量：

• 性别
• 年龄
• 体重指数
• 种植年龄
• 植入物的数量和位置
• 手术阶段步骤
• 与种植治疗相关的并发症
• 种植体错位
• 种植体移动性和不适（Periotest 值 - PTV 的差异）
• 从种植体加载到当前检查的时间（功能时间）
• 修复性设计
• 假体固位
• 放射线骨水平
• 骨缺损的种类和大小
• 存在角化粘膜
• 刷牙频率
• 邻间使用牙线/刷牙
• 牙科预约频率
• 牙周炎史
• 牙齿脱落的原因
• 使用酒精

唾液采集

唾液样本将从未经刺激的患者身上获取。 当参与者就座时，将在 10 分钟内获取样品。 样本将保存在-80°C，直到转移到伯尔尼大学牙科医学院牙周病学系的干冰中进行分析。

斑块样本的收集

牙菌斑样本将从种植体周围炎组的种植体周围炎和牙周炎龈下区域以及种植体周围健康组的牙周健康和种植体周围健康龈下区域采集。 将从两个最深的牙周袋和种植体周围袋收集龈下种植体和牙菌斑样本，并将其置于 Eppendorf 管中的 200 μl RNAlater 内。 采样点将与唾液隔离并稍微风干。 将使用无菌 Gracey 刮匙（HuFriedy，鹿特丹，荷兰）收集样本。 将采用与种植体周围健康组相同的方法从种植体周围健康区域采集样本。 Eppendorf 微量离心管将储存在 -80 °C 下，直到转移到伯尔尼大学牙科研究所的干冰中进行分析。

龈沟液 (GCF) 和种植体周围沟液 (PISF) 样本的采集

样本将从种植体周围炎患者的两个最深的种植体周围袋和两个最深的牙周袋中采集。 用棉卷隔离每个区域并用空气稍微脱水，可以避免唾液污染。 使用牙周刮匙轻轻去除牙菌斑。 使用孔板法，使用标准化纸条（Periopaper；Oraflow Inc.，Plainview，NY）可在 30 秒内获得 39 个样品。 将在预先校准的电子牙龈液测量装置（Oraflow Inc.，Plainview，NY）上测量体积。 40 电子设备的读数将参考标准曲线转换为实际体积（μl）。 被血液或唾液污染的样本将被排除。 所有六个 Periopaper 试纸条将汇集在塑料 Eppendorf 微量离心管中，并储存在 -80 °C 下，直到转移到伯尔尼大学牙科研究所的干冰中进行分析。

实验室分析

唾液和牙菌斑样本将被转移到伯尔尼大学牙科医学院牙周病学系口腔微生物学实验室，所有实验室分析将由学校牙周病学系口腔微生物学实验室的 Aysegul Sari 博士进行材料转让协议签署后，瑞士伯尔尼大学牙科医学系。

生化分析

患者的吸烟状况将通过唾液样本中的酶免疫分析试剂盒进行可替宁分析来确定。

微生物分析

将分析菌斑样本中具核梭杆菌、直肠弯曲杆菌、中间普雷沃氏菌、放线菌聚合体、牙龈卟啉单胞菌、连翘坦氏菌、齿垢密螺旋体、糖杆菌 (TM7)、金黄色葡萄球菌和口放线菌的存在和丰度。 这些细菌将通过实时Q-PCR进行针对性鉴定。 16sRNA 测序将用于无偏见和非针对性的微生物分析。 提取总基因组 DNA，然后进行 16S rRNA 扩增。

GCF分析

GCF 分析计划作为第二项研究。 基于 Luminex 微珠的多重免疫分析将用于对 GCF 和唾液样本进行分析。 根据以往文献广泛选择GCF和唾液标志物为氧化应激标志物8-OHdG、PARK7/DJ-1、NADPH氧化酶炎症标志物IL-1β、IL-17A/E、骨保护素（OPG）；结缔组织降解标志物MMP-8、MMP-3；修复/再生标志物骨形态发生蛋白 (BMP)-2、表皮生长因子 (EGF) 和血管内皮生长因子 (VEGF)。

统计分析

由于文献中没有类似的研究，因此对效应大小进行样本计算。 每组所需的样本量为 24，以检测 0.4 的效应量（大效应量）和 90% 的功效水平（置信度为 95%）四组之间的显着差异。 Gpower 软件包版本 3.1 用于样本大小计算。 连续变量的正态性将通过夏皮罗-威尔克检验来评估。 将针对偏态分布的值执行非参数统计方法。 将进行 Kruskal-Wallis 检验来比较两个以上的非正态分布变量，并进行 Dunn 多重比较检验来进行事后配对多重比较分析。 将进行单因素方差分析（ANOVA）检验来比较两个以上正态分布组，并且将进行图基检验（Tukey）进行事后成对多重比较分析。 将进行一般线性模型来确定吸烟严重程度对种植体周围和牙周疾病的影响。