A dohányzás hatása a periimplantitisre

A keresztmetszeti vizsgálat a svájci Berni Egyetem Fogorvostudományi Karának Parodontológiai Tanszékeivel, a Hatay Mustafa Kemal Egyetemmel, a Dokuz Eylul Egyetemmel, a Gazi Egyetemmel és a törökországi Ege Egyetemmel együttműködve készül. A tanulmány első lépését Törökországban, a másodikat Svájcban hajtják végre. Mivel Hatay egyike a 2023-as törökországi földrengés által leginkább sújtott három tartománynak, és a Hatay Mustafa Kemal Egyetem fogorvosi iskolája súlyosan megsérült, lehetetlen mintákat toborozni a hatayi betegektől. Ezért ezt a projektet multicentrikusnak tervezték, és a Gázi Egyetem Dokuz Eylül és az Ege Egyetem Fogorvostudományi Kar Parodontológiai Tanszékéről vesznek majd mintákat. A mintákat a svájci Berni Egyetem Parodontológiai Tanszékének Orális Mikrobiológiai Laboratóriumában elemzik. A vizsgálati protokollt a Dokuz Eylul Egyetem humán alanyok kutatásban való felhasználásának etikai bizottsága hagyta jóvá (protokollszám: 2023/GOA-8246).

Ebben a vizsgálatban 96 beteg vesz részt, négy csoportra osztva:

• Dohányzók periimplantitisben
• Nemdohányzó egyének periimplantitisben
• Egészséges periimplantátum szövetekkel rendelkező dohányosok
• Nemdohányzó egyének egészséges periimplantátum szövetekkel

A dohányzás állapotát két csoportba soroljuk: dohányzó és nemdohányzó (soha nem dohányzik). A nemdohányzó csoportba azok a korábbi dohányosok tartoznak, akik legalább 6 éve abbahagyták a dohányzást.

Ki kell számítani a naponta elszívott cigarettákat, a dohányzási indexet (önbevallott napi cigaretták átlagos száma x dohányzás évei) és a dohányzási zsebévet (önbevallott napi cigaretták átlagos száma x dohányzás évei / a cigaretták száma egy zseb). A dohányzás állapotát az önbevallás alapján állapítják meg. A dohányzási állapotot később a nyál kotininszintje fogja igazolni. Dohányzás esetén a nyál kotininkoncentrációja 5-7 ng/ml között elfogadható. A dohányzás súlyosságát a magasabb koncentrációk határozzák meg.

Parodontális paraméterek A klinikai parodontális méréseket az alábbiak szerint értékeljük a parodontális diagnózishoz. A méréseket Williams periodontális szondával (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) végzik, és magukban foglalják a szondázási zsebmélységet (PPD), a klinikai kötődési szintet (CAL), a plakk indexet (PI) 26, a gingivális indexet (GI) 27, és százalékos vérzés szondázáskor (BOP) 28 fogonként hat helyen (mesio-bukkális, bukkális, diszto-bukkális, mesio-lingvális, linguális és diszto-linguális) minden fogon.

A periodontális betegségek és állapotok diagnosztizálása a 2017-es World Workshop on Classification of Peri-implant Diseases and Conditions által javasolt radiográfiai és klinikai diagnosztikai kritériumok szerint történik.29 A periimplantátum egészségét a fogágy vizuális jeleinek hiánya alapján értékelik. gyulladás, vérzés szondázáskor és további csontvesztés a kezdeti gyógyulást követően, amely nem lehet ≥2 mm. A periimplantitisben szenvedő betegek kritériuma a PPD ≥6 mm, erős vérzéssel és ≥3 mm-es csontvesztéssel együtt.

Beteg demográfiai és klinikai periodontális/peri-implantációs vizsgálat

A következő változókat gyűjtjük össze:

• Nem
• Kor
• BMI
• Az implantátum kora
• Az implantátumok száma és elhelyezkedése
• A műtéti fázis lépései
• Implantációs kezeléssel kapcsolatos szövődmények
• Implantátum helytelen elhelyezkedése
• Implantátum mobilitása és diszkomfort érzése (különbségek a Periotest értékekben – PTV-k)
• Az implantátum betöltésétől az aktuális vizsgálatig eltelt idő (működési idő)
• Helyreállító design
• Protézis visszatartás
• Radiográfiai csontszint
• A csonthiba fajtája és mérete
• Keratinizált nyálkahártya jelenléte
• A fogmosás gyakorisága
• Interproximális fogselyem/kefe használata
• Fogorvosi rendelés gyakorisága
• A parodontitis története
• A fogvesztés oka
• Alkohol használata

Nyál gyűjteménye

A nyálmintákat nem stimulált betegektől veszik. A minták vétele 10 percen belül történik, amikor a résztvevők leülnek. A mintákat -80°C-on tartják, amíg a Berni Egyetem Fogorvosi Iskola Parodontológiai Osztályára nem szállítják szárazjégben az elemzések elvégzésére.

Plakk minták gyűjteménye

A periimplantitis csoportban a periimplantitis és a parodontitis szubgingivális területéről, a periimplantális egészségügyi csoportokban pedig a periodontális egészséges és a periimplantális egészségügyi szubgingivális területről fog plakkmintát venni. A fogíny alatti implantátum- és plakkmintákat a két legmélyebb periodontális zsebből és az implantátum körüli zsebekből 200 μl RNAlater-en belül gyűjtik Eppendorf-csövekben. A mintavételi helyeket elkülönítik a nyáltól és enyhén levegőn szárítják. A mintát steril Gracey küret segítségével gyűjtik (HuFriedy, Rotterdam, Hollandia). A mintákat a periimplantátum egészségügyi területről veszik, ugyanazzal a módszerrel a periimplantált egészségügyi csoportban. Az Eppendorf mikrocentrifuga csöveket -80 °C-on tárolják mindaddig, amíg a Berni Egyetem Fogorvosi Intézetébe szállítják, szárazjégben az elemzések elvégzésére.

Gingival Crevicular Fluid (GCF) és implantátum körüli Sulcus Fluid (PISF) minták gyűjtése

A mintákat a periimplantitises betegek két legmélyebb periimplantális zsebéből és két legmélyebb periodontális zsebéből veszik. A nyállal való szennyeződés elkerülhető, ha az egyes területeket pamuttekercsekkel elszigeteli, és levegővel enyhén dehidratál. A lepedéket periodontális kürettel óvatosan távolítják el. A nyílásos módszerrel39 a mintákat 30 másodpercen belül vesszük standardizált papírcsíkokkal (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY). A térfogatokat egy előre kalibrált elektronikus gingivális folyadékmérő készüléken (Oraflow Inc., Plainview, NY) mérjük. 40 Az elektronikus eszköz által leolvasott értékeket a rendszer tényleges térfogatra (μl) konvertálja egy standard görbe alapján. A vérrel vagy nyállal szennyezett minták kizárásra kerülnek. Mind a hat Periopaper csíkot műanyag Eppendorf mikrocentrifuga csövekben egyesítik, és -80 °C-on tárolják, amíg át nem szállítják a Berni Egyetem Fogorvosi Intézetébe, szárazjégben az elemzésekhez.

Laboratóriumi elemzések

A nyál- és plakkmintákat a Berni Egyetem Fogorvostudományi Kar Parodontológiai Tanszékének Szájmikrobiológiai Laboratóriumába szállítják, és az összes laboratóriumi elemzést Dr. Aysegul Sari végzi az Iskola Parodontológiai Osztályának Szájmikrobiológiai Laboratóriumában. Fogorvostudomány, Berni Egyetem, Svájc, miután aláírták az anyagátadási megállapodást.

Biokémiai elemzés

A betegek dohányzási státuszát kotinin-analízissel határozzák meg a nyálmintákban található enzim immunoassay kit segítségével.

Mikrobiológiai elemzés

A Fusobacterium nucleatum, a Campylobacter rectus, a Prevotella intermedia, az Aggregatinacter actinomycetemcomitans, a Porphyromonas gingivalis, a Tannerella forsythia, a Treponema denticola, a Saccharibacteria (TM7), a Streptococcus aureus vagy az Actinoquemyces minta és az Actinoquemyces minták jelenléte és mennyisége. Ezeknek a baktériumoknak a célzott azonosítása valós idejű Q-PCR-rel történik. A 16sRNS szekvenálást az elfogulatlan és nem célzott mikrobiológiai elemzéshez használjuk. A teljes genomiális DNS-t kivonják, majd végrehajtják a 16S rRNS amplifikációját.

GCF elemzés

A GCF-elemzést második vizsgálatként tervezik. A Luminex gyöngy alapú multiplex immunoassay-t fogják használni a GCF és a nyálminták elemzéséhez. A GCF és a nyál markereket széles körben szelektáltuk a korábbi irodalom szerint oxidatív stressz markerekként 8-OHdG, PARK7/DJ-1 és NADPH oxidáz gyulladásos markerek IL-1beta, IL-17A/E, osteoprotegerin (OPG); kötőszövet-degradációs markerek MMP-8, MMP-3; javítási/regenerációs markerek csont morfogén protein (BMP)-2, epidermális növekedési faktor (EGF) és vascularis endothelialis növekedési faktor (VEGF).

Statisztikai analízis

Mivel a szakirodalomban nem található hasonló vizsgálat, a mintaszámítást a hatás nagyságára végeztük. A szükséges mintanagyság 24 volt minden csoportban, hogy szignifikáns különbséget észleljünk 0,4-es hatásméretnél (nagy hatásméret) és 90%-os teljesítményszintnél, 95%-os konfidenciaszinttel a négy csoport között. A mintaméret kiszámításához a Gpower csomag 3.1-es verzióját használtuk. A folytonos változók normalitása Shapiro-Wilk teszttel lesz kiértékelve. A torzított eloszlású értékekre nem paraméteres statisztikai módszereket kell alkalmazni. A Kruskal-Wallis tesztet több, mint két nem normál eloszlású változó összehasonlítására, a Dunn többszörös összehasonlító tesztet pedig a post hoc páronkénti többszörös összehasonlító elemzésekhez hajtják végre. Egyszeri ANOVA-tesztet végeznek több mint két normál eloszlású csoport összehasonlítására, a Tukey-tesztet pedig a post hoc páronkénti többszörös összehasonlító elemzésekhez. Általános lineáris modellekkel határozzuk meg a dohányzás súlyosságának a periimplantátum és a parodontális betegségre gyakorolt ​​hatását.