O efeito do tabagismo na peri-implantite

O estudo transversal será realizado em colaboração com os Departamentos de Periodontia da Faculdade de Odontologia da Universidade de Berna, Suíça, Universidade Hatay Mustafa Kemal, Universidade Dokuz Eylul, Universidade Gazi e Universidade Ege, Turquia. A primeira etapa do estudo será realizada na Turquia e a segunda etapa na Suíça. Como Hatay é uma das três províncias mais afetadas pelo terremoto de 2023 na Turquia e a Faculdade de Odontologia da Universidade Hatay Mustafa Kemal foi gravemente danificada, é impossível recrutar amostras dos pacientes em Hatay. Portanto, este projeto foi planejado como multicêntrico, e amostras de pacientes serão recrutadas na Dokuz Eylül, Universidade Gazi e Universidade Ege, Departamento de Periodontia, Faculdade de Odontologia. As amostras serão analisadas no Laboratório de Microbiologia Oral do Departamento de Periodontia da Universidade de Berna, Suíça. O protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética para o Uso de Seres Humanos em Pesquisa da Universidade Dokuz Eylul (Protocolo nº: 2023/GOA-8246).

Este estudo incluirá 96 pacientes, divididos igualmente em quatro grupos:

• Fumantes com peri-implantite
• Indivíduos não fumantes com peri-implantite
• Fumantes com tecidos peri-implantares saudáveis
• Indivíduos não fumantes com tecidos peri-implantares saudáveis

O status de fumante será categorizado em dois grupos: fumante e não fumante (nunca fumou). O grupo de não fumantes incluirá ex-fumantes que pararam de fumar há pelo menos 6 anos.

Serão calculados os cigarros fumados por dia, o índice de tabagismo (média autorreferida de cigarros por dia x anos de uso de tabaco) e o ano de consumo de tabaco (média autorreferida de cigarros por dia x anos de uso de tabaco / o número de cigarros em um bolso). O status de tabagismo será detectado de acordo com o autorrelato. O status de tabagismo será posteriormente validado pelos níveis de cotinina na saliva. A concentração salivar de cotinina para fumar será aceita em 5-7 ng/ml. A gravidade do tabagismo será determinada por concentrações mais elevadas.

Parâmetros Periodontais As medições periodontais clínicas serão avaliadas usando o seguinte para diagnóstico periodontal. As medições serão realizadas usando uma sonda periodontal Williams (Hu-Friedy, Chicago, IL, EUA) e incluirão profundidade da bolsa de sondagem (PPD), nível de inserção clínica (CAL), índice de placa (PI) 26, índice gengival (GI) 27, e porcentagem de sangramento à sondagem (BOP) 28 em seis locais por dente (mésio-vestibular, bucal, disto-vestibular, mésio-lingual, lingual e disto-lingual) em cada dente.

O diagnóstico de doenças e condições periodontais será feito de acordo com os critérios de diagnóstico radiográfico e clínico propostos pelo Workshop Mundial de Classificação de Doenças e Condições Periodontais e Peri-implantares de 2017.29 A saúde peri-implantar será avaliada pela ausência de sinais visuais de inflamação, sangramento à sondagem e perda óssea adicional após a cicatrização inicial, que não deve ser ≥2 mm. Os critérios para pacientes com periimplantite serão PPD≥6 mm em conjunto com sangramento profuso e perda óssea ≥3 mm.

Dados demográficos do paciente e exame clínico periodontal/peri-implantar

As seguintes variáveis ​​serão coletadas:

• Gênero
• Idade
• IMC
• Idade do implante
• Número e localização dos implantes
• Etapas da fase cirúrgica
• Complicações relacionadas ao tratamento com implantes
• Mau posicionamento do implante
• Mobilidade e desconforto do implante (diferenças nos valores do Periotest-PTVs)
• Tempo desde o carregamento dos implantes até o exame atual (tempo em função)
• Projeto restaurador
• Retenção de prótese
• Nível ósseo radiográfico
• Tipo e tamanho do defeito ósseo
• Presença de mucosa queratinizada
• Frequência de escovação dentária
• Uso de fio dental/escovação interproximal
• Frequência de consulta odontológica
• História de periodontite
• Motivo da perda dentária
• Uso de álcool

Coleta de Saliva

Amostras de saliva serão obtidas de pacientes não estimulados. As amostras serão obtidas ao longo de 10 minutos, quando os participantes estarão sentados. As amostras serão mantidas a -80°C até serem transferidas para o Departamento de Periodontia da Faculdade de Medicina Dentária da Universidade de Berna, em gelo seco para as análises.

Coleta de Amostras de Placas

Amostras de placa serão coletadas da área subgengival de periimplantite e periodontite no grupo de periimplantite, e da área subgengival de saúde periodontal saudável e peri-implantar nos grupos de saúde peri-implantar. Amostras de implante subgengival e placa dentária serão coletadas das duas bolsas periodontais mais profundas e bolsas peri-implantares dentro de 200 μl RNAlater em tubos Eppendorf. Os locais de amostragem serão isolados da saliva e levemente secos ao ar. A amostra será coletada com cureta Gracey estéril (HuFriedy, Rotterdam, Holanda). As amostras serão retiradas da área de saúde peri-implantar pelo mesmo método do grupo de saúde peri-implantar. Os tubos de microcentrífuga Eppendorf serão armazenados a -80 °C até serem transferidos para o Instituto de Odontologia da Universidade de Berna, em gelo seco para as análises.

Coleta de amostras de fluido crevicular gengival (GCF) e fluido do sulco peri-implantar (PISF)

As amostras serão retiradas de duas bolsas peri-implantares mais profundas e de duas bolsas periodontais mais profundas de pacientes com peri-implantite. A contaminação por saliva será evitada isolando cada área com rolos de algodão e desidratando levemente com ar. A placa será removida suavemente com uma cureta periodontal. Utilizando o método de orifício,39 as amostras serão obtidas em 30 segundos com tiras de papel padronizadas (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY). Os volumes serão medidos em um dispositivo eletrônico pré-calibrado de medição de fluido gengival (Oraflow Inc., Plainview, NY). 40 As leituras do dispositivo eletrônico serão convertidas para um volume real (μl) por referência a uma curva padrão. Serão excluídas amostras contaminadas com sangue ou saliva. Todas as seis tiras de Periopaper serão agrupadas em tubos plásticos de microcentrífuga Eppendorf e armazenadas a -80 °C até serem transferidas para o Instituto de Odontologia da Universidade de Berna, em gelo seco para as análises.

Análises Laboratoriais

Amostras de saliva e placa serão transferidas para o Laboratório de Microbiologia Oral, Departamento de Periodontia, Faculdade de Medicina Dentária, Universidade de Berna e todas as análises laboratoriais serão realizadas pelo Dr. Aysegul Sari no Laboratório de Microbiologia Oral, Departamento de Periodontia, Escola de Medicina Dentária da Universidade de Berna, Suíça após a assinatura do acordo de transferência de material.

Análise Bioquímica

O status de tabagismo dos pacientes será determinado por análise de cotinina usando um kit de imunoensaio enzimático nas amostras de saliva.

Análise microbiológica

A presença e abundância de Fusobacterium nucleatum, Campylobacter rectus, Prevotella intermedia, Aggregatinacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Saccharibacteria (TM7), Streptococcus aureus e Actinomyces oris serão analisadas em amostras de placas. A identificação direcionada destas bactérias será feita por Real Time Q-PCR. O sequenciamento 16sRNA será usado para uma análise microbiológica imparcial e não direcionada. O DNA genômico total será extraído e em seguida será realizada a amplificação do 16S rRNA.

Análise GCF

A análise do GCF está planejada como um segundo estudo. O imunoensaio multiplex baseado em esferas Luminex será usado para realizar a análise de GCF e amostras de saliva. Os marcadores GCF e saliva foram amplamente selecionados de acordo com a literatura anterior como marcadores de estresse oxidativo 8-OHdG, PARK7/DJ-1 e marcadores inflamatórios NADPH oxidase IL-1beta, IL-17A/E, osteoprotegerina (OPG); marcadores de degradação do tecido conjuntivo MMP-8, MMP-3; marcadores de reparo/regeneração proteína morfogênica óssea (BMP)-2, fator de crescimento epidérmico (EGF) e fator de crescimento endotelial vascular (VEGF).

Análise Estatística

Como não há estudo semelhante na literatura, o cálculo amostral foi feito pelo tamanho do efeito. O tamanho de amostra necessário foi de 24 para cada grupo para detectar uma diferença significativa em um tamanho de efeito (tamanho de efeito grande) de 0,4 e um nível de poder de 90% com um nível de confiança de 95% entre os quatro grupos. O pacote Gpower versão 3.1 foi utilizado para cálculos de tamanho amostral. A normalidade das variáveis ​​contínuas será avaliada pelo teste de Shapiro-Wilk. Métodos estatísticos não paramétricos serão realizados para valores com distribuição assimétrica. O teste de Kruskal-Wallis será realizado para comparar mais de duas variáveis ​​​​com distribuição não normal, e o teste de comparação múltipla de Dunn para análises de comparação múltipla post hoc pareadas. Um teste ANOVA unidirecional será realizado para comparar mais de dois grupos normalmente distribuídos, e o teste de Tukey será realizado para análises post hoc de comparação múltipla de pares. Modelos lineares gerais serão realizados para determinar o efeito da gravidade do tabagismo na doença peri-implantar e periodontal.