L'effet du tabagisme sur la péri-implantite

L'étude transversale sera réalisée en collaboration avec les départements de parodontologie de la Faculté de médecine dentaire de l'Université de Berne, en Suisse, de l'Université Hatay Mustafa Kemal, de l'Université Dokuz Eylul, de l'Université de Gazi et de l'Université d'Ege, Turquie. La première étape de l'étude sera réalisée en Turquie et la deuxième étape en Suisse. Étant donné que Hatay est l'une des trois provinces les plus touchées par le tremblement de terre de 2023 en Turquie et que l'école dentaire de l'université Hatay Mustafa Kemal a été gravement endommagée, il est impossible de recruter des échantillons auprès des patients de Hatay. Par conséquent, ce projet a été planifié comme multicentrique et des échantillons de patients seront recrutés à Dokuz Eylül, à l'Université de Gazi et à l'Université d'Ege, Département de parodontologie, Faculté de médecine dentaire. Les échantillons seront analysés au Laboratoire de microbiologie buccale, Département de parodontologie, Université de Berne, Suisse. Le protocole d'étude a été approuvé par le comité d'éthique pour l'utilisation de sujets humains dans la recherche de l'Université Dokuz Eylul (protocole n° : 2023/GOA-8246).

Cette étude comprendra 96 ​​patients, répartis également en quatre groupes :

• Fumeurs atteints de péri-implantite
• Personnes non-fumeurs atteintes de péri-implantite
• Fumeurs ayant des tissus péri-implantaires sains
• Personnes non-fumeurs avec des tissus péri-implantaires sains

Le statut tabagique sera classé en deux groupes : fumeur et non-fumeur (jamais fumeur). Le groupe des non-fumeurs comprendra les anciens fumeurs qui ont arrêté de fumer il y a au moins 6 ans.

Les cigarettes fumées par jour, l'indice de tabagisme (cigarettes moyennes autodéclarées par jour x années de consommation de tabac) et l'année de poche de tabagisme seront calculés (cigarettes moyennes autodéclarées par jour x années de consommation de tabac / nombre de cigarettes dans un poche). Le statut tabagique sera détecté selon l'auto-évaluation. Le statut tabagique sera ensuite validé par les niveaux de cotinine dans la salive. La concentration salivaire de cotinine pour fumer sera acceptée à 5-7 ng/ml. La gravité du tabagisme sera déterminée par des concentrations plus élevées.

Paramètres parodontaux Les mesures parodontales cliniques seront évaluées à l'aide des éléments suivants pour le diagnostic parodontal. Les mesures seront effectuées à l'aide d'une sonde parodontale Williams (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) et incluront la profondeur de poche de sondage (PPD), le niveau d'attache clinique (CAL), l'indice de plaque (PI) 26, l'indice gingival (GI) 27, et pourcentage de saignement au sondage (BOP) 28 sur six sites par dent (mésio-buccal, buccal, disto-buccal, mésio-lingual, lingual et disto-lingual) sur chaque dent.

Le diagnostic des maladies et affections parodontales sera établi selon les critères de diagnostic radiographique et clinique proposés par l'atelier mondial 2017 sur la classification des maladies et affections parodontales et péri-implantaires.29 La santé péri-implantaire sera évaluée par l'absence de signes visuels de inflammation, saignement au sondage et perte osseuse supplémentaire après la cicatrisation initiale, qui ne doit pas être ≥ 2 mm. Les critères pour les patients atteints de périimplantite seront PPD ≥ 6 mm en association avec des saignements abondants et une perte osseuse ≥ 3 mm.

Données démographiques des patients et examen clinique parodontal/péri-implantaire

Les variables suivantes seront collectées :

• Genre
• Âge
• IMC
• Âge de l'implant
• Nombre et emplacement des implants
• Étapes de la phase chirurgicale
• Complications liées au traitement implantaire
• Malposition de l'implant
• Mobilité et inconfort de l'implant (différences entre les valeurs Periotest-PTV)
• Temps écoulé entre la mise en charge des implants et l'examen en cours (durée de fonctionnement)
• Conception restauratrice
• Rétention de prothèse
• Niveau osseux radiographique
• Type et taille du défaut osseux
• Présence de muqueuse kératinisée
• Fréquence du brossage dentaire
• Fil dentaire/brossage interproximal
• Fréquence des rendez-vous chez le dentiste
• Histoire de parodontite
• Raison de la perte des dents
• Utilisation d'alcool

Collecte de salive

Des échantillons de salive seront obtenus auprès de patients non stimulés. Les échantillons seront obtenus en 10 minutes lorsque les participants seront assis. Les échantillons seront conservés à -80°C jusqu'à leur transfert au Département de Parodontologie, Faculté de Médecine Dentaire, Université de Berne, dans de la neige carbonique pour les analyses.

Collecte d'échantillons de plaques

Des échantillons de plaque seront prélevés dans la zone sous-gingivale de péri-implantite et de parodontite dans le groupe péri-implantite, et dans la zone sous-gingivale de santé parodontale saine et péri-implantaire dans les groupes de santé péri-implantaire. Des échantillons d'implants sous-gingivaux et de plaque dentaire seront prélevés dans les deux poches parodontales les plus profondes et poches péri-implantaires dans 200 μl d'ARN plus tard dans des tubes Eppendorf. Les sites d'échantillonnage seront isolés de la salive et légèrement séchés à l'air. L'échantillon sera collecté à l'aide d'une curette Gracey stérile (HuFriedy, Rotterdam, Pays-Bas). Les échantillons seront prélevés dans la zone de santé péri-implantaire par la même méthode dans le groupe santé péri-implantaire. Les tubes de microcentrifugeuse Eppendorf seront conservés à -80 °C jusqu'à leur transfert à l'Institut de médecine dentaire de l'Université de Berne, dans de la neige carbonique pour les analyses.

Collecte d'échantillons de liquide gingival creviculaire (GCF) et de liquide sulcus péri-implantaire (PISF)

Les échantillons seront prélevés dans les deux poches péri-implantaires les plus profondes et les deux poches parodontales les plus profondes de patients atteints de péri-implantite. La contamination par la salive sera évitée en isolant chaque zone avec des rouleaux de coton et en la déshydratant légèrement avec de l'air. La plaque sera délicatement éliminée à l’aide d’une curette parodontale. En utilisant la méthode de l'orifice, 39 les échantillons seront obtenus en 30 secondes avec des bandes de papier standardisées (Periopaper ; Oraflow Inc., Plainview, NY). Les volumes seront mesurés sur un appareil électronique de mesure du liquide gingival précalibré (Oraflow Inc., Plainview, NY). 40 Les lectures de l'appareil électronique seront converties en un volume réel (μl) par référence à une courbe standard. Les échantillons contaminés par du sang ou de la salive seront exclus. Les six bandes Periopaper seront regroupées dans des tubes de microcentrifugeuse Eppendorf en plastique et conservées à -80 °C jusqu'à leur transfert à l'Institut de médecine dentaire de l'Université de Berne, dans de la neige carbonique pour les analyses.

Analyses de laboratoire

Les échantillons de salive et de plaque seront transférés au Laboratoire de microbiologie buccale, Département de parodontologie, Faculté de médecine dentaire, Université de Berne et toutes les analyses de laboratoire seront effectuées par le Dr Aysegul Sari au Laboratoire de microbiologie buccale, Département de parodontologie, École de médecine dentaire, Université de Berne, Suisse après la signature de l'accord de transfert de matériel.

Analyse biochimique

Le statut tabagique des patients sera déterminé par analyse de la cotinine à l'aide d'un kit de dosage immunoenzymatique dans les échantillons de salive.

Analyse microbiologique

La présence et l'abondance de Fusobacterium nucleatum, Campylobacter rectus, Prevotella intermedia, Aggregatinacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Saccharibacteria (TM7), Streptococcus aureus et Actinomyces oris, seront analysées dans des échantillons de plaque. L'identification ciblée de ces bactéries sera réalisée par Real Time Q-PCR. Le séquençage de l'ARN 16s sera utilisé pour une analyse microbiologique impartiale et non ciblée. L'ADN génomique total sera extrait, puis une amplification de l'ARNr 16S sera réalisée.

Analyse GCF

L'analyse GCF est prévue comme deuxième étude. Le test immunologique multiplex à base de billes Luminex sera utilisé pour effectuer l'analyse des échantillons de GCF et de salive. Les marqueurs GCF et salivaires ont été largement sélectionnés selon la littérature antérieure en tant que marqueurs de stress oxydatif 8-OHdG, PARK7/DJ-1 et marqueurs inflammatoires de la NADPH oxydase IL-1beta, IL-17A/E, ostéoprotégérine (OPG) ; marqueurs de dégradation du tissu conjonctif MMP-8, MMP-3 ; marqueurs de réparation/régénération protéine morphogénique osseuse (BMP)-2, facteur de croissance épidermique (EGF) et facteur de croissance endothélial vasculaire (VEGF).

Analyses statistiques

Puisqu’il n’existe pas d’étude similaire dans la littérature, le calcul de l’échantillon a été effectué sur la taille de l’effet. La taille d'échantillon nécessaire était de 24 pour chaque groupe afin de détecter une différence significative avec une taille d'effet (grande taille d'effet) de 0,4 et un niveau de puissance de 90 % avec un niveau de confiance de 95 % entre les quatre groupes. La version 3.1 du package Gpower a été utilisée pour les calculs de la taille de l'échantillon. La normalité des variables continues sera évaluée par le test de Shapiro-Wilk. Des méthodes statistiques non paramétriques seront utilisées pour les valeurs avec une distribution asymétrique. Le test de Kruskal-Wallis sera effectué pour comparer plus de deux variables non distribuées normalement, et le test de comparaison multiple de Dunn pour les analyses de comparaison multiple post hoc par paires. Un test ANOVA unidirectionnel sera effectué pour comparer plus de deux groupes normalement distribués, et le test Tukey sera effectué pour des analyses de comparaison multiple post hoc par paires. Des modèles linéaires généraux seront réalisés pour déterminer l'effet de la gravité du tabagisme sur les maladies péri-implantaires et parodontales.