Effekten af ​​rygning på peri-implantitis

Tværsnitsundersøgelsen vil blive udført i samarbejde med afdelingerne for parodontologi på Det Odontologiske Fakultet ved Bern Universitet, Schweiz, Hatay Mustafa Kemal Universitet, Dokuz Eylul Universitet, Gazi Universitet og Ege Universitet, Tyrkiet. Det første trin af undersøgelsen vil blive udført i Tyrkiet, og det andet trin i Schweiz. Da Hatay er en af ​​de tre provinser, der er hårdest ramt af jordskælvet i 2023 i Tyrkiet, og Hatay Mustafa Kemal University Dental School blev alvorligt beskadiget, er det umuligt at rekruttere prøver fra patienterne i Hatay. Derfor er dette projekt blevet planlagt som et multicenter, og patientprøver vil blive rekrutteret fra Dokuz Eylül, Gazi University og Ege University, Department of Parodontology, Det Odontologiske Fakultet. Prøverne vil blive analyseret i Laboratory of Oral Microbiology, Department of Parodontology, University of Bern, Schweiz. Studieprotokollen blev godkendt af den etiske komité for brug af menneskelige emner i forskning ved Dokuz Eylul University (protokol nr.: 2023/GOA-8246).

Denne undersøgelse vil omfatte 96 patienter, ligeligt opdelt i fire grupper:

• Rygere med peri-implantitis
• Ikke-rygere personer med peri-implantitis
• Rygere med sundt peri-implantatvæv
• Ikke-rygere individer med sundt peri-implantatvæv

Rygestatus vil blive kategoriseret i to grupper: ryger og ikke-ryger (aldrig ryger). Ikke-rygergruppen vil omfatte tidligere rygere, der holdt op med at ryge for mindst 6 år siden.

De cigaretter, der er røget om dagen, rygeindekset (selvrapporteret gennemsnitligt antal cigaretter pr. dag x års tobaksforbrug) og rygerlommeåret vil blive beregnet (selvrapporteret gennemsnitlige cigaretter pr. dag x års tobaksforbrug / antallet af cigaretter i en lomme). Rygestatus vil blive opdaget i henhold til selvrapportering. Rygestatus vil senere blive valideret af spyt-kotinin-niveauer. Spyt-kotininkoncentration til rygning vil blive accepteret ved 5-7 ng/ml. Sværhedsgraden af ​​rygning vil blive bestemt af højere koncentrationer.

Parodontale parametre Kliniske parodontale målinger vil blive vurderet ved hjælp af følgende til parodontal diagnose. Målingerne udføres ved hjælp af en Williams parodontalsonde (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) og inkluderer sonderingslommedybde (PPD), klinisk tilknytningsniveau (CAL), plakindeks (PI) 26, gingivalindeks (GI) 27, og procentvis blødning ved sondering (BOP) 28 på seks steder pr. tand (mesio-bukkal, bukkal, disto-bukkal, mesio-lingual, lingual og disto-lingual) på hver tand.

Diagnose af periodontale sygdomme og tilstande vil blive stillet i overensstemmelse med de radiografiske og kliniske diagnostiske kriterier foreslået af 2017 World Workshop on Classification of Periodontal and Peri-implant Diseases and Conditions.29 Peri-implantatets sundhed vil blive vurderet ved fravær af visuelle tegn på betændelse, blødning ved sondering og yderligere knogletab efter indledende heling, som ikke bør være ≥2 mm. Kriterierne for patienter med periimplantitis vil være PPD≥6 mm i forbindelse med voldsom blødning og ≥3 mm knogletab.

Patientdemografi og klinisk parodontal/peri-implantatundersøgelse

Følgende variabler vil blive indsamlet:

• Køn
• Alder
• BMI
• Implantatets alder
• Antal og placering af implantater
• Kirurgiske fasetrin
• Komplikationer relateret til implantatbehandling
• Fejlstilling af implantatet
• Implantatmobilitet og ubehag (forskelle i Periotest-værdier-PTV'er)
• Tid fra ilægning af implantater til nuværende undersøgelse (tid i funktion)
• Restaurerende design
• Proteseretention
• Radiografisk knogleniveau
• Knogledefektens art og størrelse
• Tilstedeværelse af keratiniseret slimhinde
• Hyppighed af tandbørstning
• Interproximal tandtråd/børstning
• Hyppighed af tandlægebesøg
• Historie om paradentose
• Årsag til tandtab
• Brug af alkohol

Indsamling af spyt

Spytprøver vil blive indhentet fra patienter som ustimulerede. Prøver vil blive indhentet over 10 minutter, når deltagerne vil sidde. Prøverne vil blive opbevaret ved -80°C, indtil de overføres til Institut for Parodontologi, School of Dental Medicine, University of Bern, i tøris til analyserne.

Indsamling af plakprøver

Plakprøver vil blive udtaget fra periimplantitis og parodontitis subgingival område i periimplantitis gruppen, og parodontal sund og peri-implant sundhed subgingival område i peri-implantat sundhed grupper. Subgingivalimplantat- og tandplakprøver vil blive indsamlet fra de to dybeste parodontale lommer og peri-implantatlommer inden for 200 μl RNAlater i Eppendorf-rør. Prøveudtagningsstederne vil blive isoleret fra spyt og let lufttørret. Prøven vil blive indsamlet ved hjælp af en steril Gracey curette (HuFriedy, Rotterdam, Holland). Prøverne vil blive udtaget fra det periimplantat sundhedsområde efter samme metode i periimplantatsundhedsgruppen. Eppendorf mikrocentrifugerør vil blive opbevaret ved -80 °C, indtil de overføres til tandlægeinstituttet, Bern University, i tøris til analyserne.

Indsamling af Gingival Crevicular Fluid (GCF) og Peri-implant Sulcus Fluid (PISF) prøver

Prøverne vil blive taget fra to dybeste peri-implantatlommer og to dybeste parodontale lommer fra peri-implantitispatienter. Spytkontaminering vil blive undgået ved at isolere hvert område med bomuldsruller og dehydrere lidt med luft. Plak fjernes forsigtigt med en parodontal curette. Ved at bruge åbningsmetoden 39 vil prøverne blive opnået inden for 30 sekunder med standardiserede papirstrimler (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY). Volumen vil blive målt på en prækalibreret elektronisk tandkødsvæskemåleanordning (Oraflow Inc., Plainview, NY). 40 Aflæsningerne fra den elektroniske enhed vil blive konverteret til et faktisk volumen (μl) ved reference til en standardkurve. Prøver kontamineret med blod eller spyt vil blive udelukket. Alle seks Periopaper-strimler vil blive samlet i Eppendorf-mikrocentrifugerør af plast og opbevaret ved -80 °C, indtil de overføres til tandlægeinstituttet, Bern University, i tøris til analyserne.

Laboratorieanalyser

Spyt- og plakprøver vil blive overført til Laboratoriet for Oral Mikrobiologi, Afdelingen for Parodontologi, School of Dental Medicine, Universitetet i Bern, og alle laboratorieanalyser vil blive udført af Dr. Aysegul Sari ved Laboratoriet for Oral Mikrobiologi, Afdelingen for Parodontologi, Skolen of Dental Medicine, University of Bern, Schweiz, efter at aftalen om materialeoverførsel er underskrevet.

Biokemisk Analyse

Patienternes rygestatus vil blive bestemt ved cotininanalyse ved hjælp af et enzymimmunoassay-kit i spytprøverne.

Mikrobiologisk analyse

Tilstedeværelsen og forekomsten af ​​Fusobacterium nucleatum, Campylobacter rectus, Prevotella intermedia, Aggregatinacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema dentcola, Saccharibacteria (TM7), Streptococcus aureus, og plaqueprøver, testinomyces oris analyseres. Den målrettede identifikation af disse bakterier vil blive foretaget af Real Time Q-PCR. 16sRNA-sekventering vil blive brugt til en upartisk og umålrettet mikrobiologisk analyse. Totalt genomisk DNA vil blive ekstraheret, og derefter vil amplifikation af 16S rRNA blive udført.

GCF analyse

GCF-analyse er planlagt som en anden undersøgelse. Luminex perle-baseret multiplex immunoassay vil blive brugt til at udføre analysen af ​​GCF og spytprøver. GCF og spytmarkører blev bredt udvalgt i henhold til tidligere litteratur som oxidativ stressmarkører 8-OHdG, PARK7/DJ-1 og NADPH oxidase inflammatoriske markører IL-1beta, IL-17A/E, osteoprotegerin (OPG); bindevævsnedbrydningsmarkører MMP-8, MMP-3; reparations-/regenereringsmarkører knoglemorfogent protein (BMP)-2, epidermal vækstfaktor (EGF) og vaskulær endotelvækstfaktor (VEGF).

Statistisk analyse

Da der ikke er nogen lignende undersøgelse i litteraturen, blev stikprøveberegningen foretaget på effektstørrelsen. Den nødvendige stikprøvestørrelse var 24 for hver gruppe for at påvise en signifikant forskel ved en effektstørrelse (stor effektstørrelse) på 0,4 og et effektniveau på 90 % med et 95 % konfidensniveau mellem de fire grupper. Gpower-pakkeversion 3.1 blev brugt til prøvestørrelsesberegninger. Normaliteten af ​​kontinuerte variable vil blive evalueret ved Shapiro-Wilks test. Ikke-parametriske statistiske metoder vil blive udført for værdier med skæv fordeling. Kruskal-Wallis test vil blive udført for at sammenligne mere end to ikke-normalfordelte variable, og Dunn multiple sammenligningstest for post hoc parvise multiple sammenligningsanalyser. En envejs ANOVA-test vil blive udført for at sammenligne mere end to normalfordelte grupper, og Tukey-testen vil blive udført til post hoc parvise multiple sammenligningsanalyser. Generelle lineære modeller vil blive udført for at bestemme effekten af ​​rygnings sværhedsgrad på periimplantat og periodontal sygdom.