흡연이 임플란트 주위염에 미치는 영향

단면 연구는 스위스 베른 대학교 치의학부 치주학과, 하타이 무스타파 케말 대학교, 도쿠즈 에일룰 대학교, 가지 대학교, 터키 에게 대학교와 협력하여 수행될 예정입니다. 연구의 첫 번째 단계는 터키에서, 두 번째 단계는 스위스에서 수행될 예정이다. 하타이는 2023년 터키 지진으로 가장 큰 피해를 입은 3개 지역 중 하나이고 하타이 무스타파 케말 대학 치과대학이 심각한 피해를 입었기 때문에 하타이 환자로부터 샘플을 모집하는 것은 불가능합니다. 따라서 본 프로젝트는 다기관으로 계획되었으며 가지대학교 Dokuz Eylül과 치과대학 치주학과 Ege대학교에서 환자 검체를 모집할 예정이다. 샘플은 스위스 베른 대학교 치주학과 구강 미생물학 실험실에서 분석됩니다. 연구 프로토콜은 Dokuz Eylul University의 연구에서 인간 피험자 사용에 대한 윤리위원회의 승인을 받았습니다(프로토콜 번호: 2023/GOA-8246).

이 연구에는 96명의 환자가 포함되며, 4개 그룹으로 균등하게 나뉩니다.

• 임플란트 주위염이 있는 흡연자
• 임플란트 주위염이 있는 비흡연자
• 건강한 임플란트 주위 조직을 가진 흡연자
• 건강한 임플란트 주위 조직을 가진 비흡연자

흡연 상태는 흡연자와 비흡연자(흡연하지 않음)의 두 그룹으로 분류됩니다. 비흡연자 그룹에는 최소 6년 전에 흡연을 중단한 이전 흡연자가 포함됩니다.

하루에 피우는 담배량, 흡연 지수(자가 보고한 일일 평균 담배 수 x 담배 사용 년수) 및 흡연 포켓 연도(자기 보고한 일일 평균 담배 수 x 담배 사용 년 수/담배 수)를 계산합니다. 포켓). 흡연 여부는 자가 보고를 통해 감지됩니다. 흡연 상태는 나중에 타액 코티닌 수치를 통해 검증됩니다. 흡연 시 타액 코티닌 농도는 5-7ng/ml로 허용됩니다. 흡연의 심각도는 농도가 높을수록 결정됩니다.

치주 매개변수 임상 치주 측정은 치주 진단을 위해 다음을 사용하여 평가됩니다. 측정은 Williams 치주 프로브(Hu-Friedy, Chicago, IL, USA)를 사용하여 수행되며 프로빙 포켓 깊이(PPD), 임상 부착 수준(CAL), 플라크 지수(PI) 26, 치은 지수(GI) 27, 및 각 치아의 치아당 6개 부위(심측 협측, 협측, 원위 협측, 근심 설측, 설측 및 원위 설측)에서 탐침 시 출혈 비율(BOP) 28.

치주 질환 및 상태의 진단은 2017 치주 및 임플란트 주위 질환 및 상태 분류에 관한 세계 워크숍에서 제안된 방사선학적 및 임상 진단 기준에 따라 이루어집니다.29 임플란트 주위 건강은 다음과 같은 시각적 징후가 없음으로 평가됩니다. 염증, 탐침 시 출혈, 초기 치유 후 추가 뼈 손실(2mm 이상이어서는 안 됨). 임플란트 주위염 환자의 기준은 다량의 출혈과 ≥3mm의 뼈 손실과 관련된 PPD≥6mm입니다.

환자 인구통계 및 임상 치주/임플란트 주위 검사

다음 변수가 수집됩니다.

• 성별
• 나이
• BMI
• 임플란트 연령
• 임플란트 개수 및 위치
• 수술 단계 단계
• 임플란트 치료와 관련된 합병증
• 임플란트 위치이상
• 임플란트 이동성 및 불편함(Periotest 값의 차이 - PTV)
• 임플란트 장착부터 현재 검사까지의 시간(기능 수행 시간)
• 복원 디자인
• 보철물 유지
• 방사선 촬영 뼈 수준
• 골결손의 종류와 크기
• 각질화된 점막의 존재
• 칫솔질 빈도
• 치간 치실/칫솔질
• 치과 예약 빈도
• 치주염의 역사
• 치아상실의 이유
• 알코올 사용

타액 수집

환자로부터 자극을 받지 않은 상태로 타액 샘플을 채취합니다. 참가자가 자리에 앉은 후 10분 동안 샘플을 채취합니다. 샘플은 분석을 위해 드라이아이스에 담겨 베른 대학교 치의과대학 치주학과로 이송될 때까지 -80°C에서 보관됩니다.

플라크 샘플 수집

임플란트 주위염 그룹에서는 임플란트 주위염 및 치은연하 부위에서, 임플란트 주위 건강 그룹에서는 치주 건강 및 임플란트 주위 건강 치은연하 부위에서 플라크 샘플을 채취합니다. 치은연하 임플란트 및 치과 플라크 샘플은 Eppendorf 튜브의 200μl RNAlater 내에서 가장 깊은 두 개의 치주 포켓과 임플란트 주위 포켓에서 수집됩니다. 샘플링 장소는 타액과 분리되어 약간 공기 건조됩니다. 샘플은 멸균 Gracey 큐렛(HuFriedy, 네덜란드 로테르담)을 사용하여 수집됩니다. 임플란트 주위 건강 그룹과 동일한 방법으로 임플란트 주위 건강 영역에서 샘플을 채취합니다. Eppendorf 미세원심분리 튜브는 분석을 위해 드라이아이스에 넣어 베른 대학 치과 연구소로 옮겨질 때까지 -80°C에서 보관됩니다.

치은 열구액(GCF) 및 임플란트 주위 고랑액(PISF) 샘플 수집

샘플은 임플란트 주위염 환자의 가장 깊은 임플란트 주위 포켓 2개와 가장 깊은 치주 포켓 2개에서 채취됩니다. 면봉으로 각 부위를 격리하고 공기로 약간 탈수함으로써 타액 오염을 피할 수 있습니다. 치주 큐렛을 사용하여 플라그를 부드럽게 제거합니다. 오리피스 방법을 사용하면 표준화된 종이 스트립(Periopaper, Oraflow Inc., Plainview, NY)을 사용하여 30초 이내에 샘플을 얻을 수 있습니다. 부피는 미리 보정된 전자 치은액 측정 장치(Oraflow Inc., Plainview, NY)에서 측정됩니다. 40 전자 장치의 판독값은 표준 곡선을 참조하여 실제 용량(μl)으로 변환됩니다. 혈액이나 타액으로 오염된 검체는 제외됩니다. 6개의 Periopaper 스트립은 모두 플라스틱 Eppendorf 마이크로 원심분리 튜브에 모아지고 분석을 위해 드라이아이스에 넣어 Bern University 치과 연구소로 옮겨질 때까지 -80°C에서 보관됩니다.

실험실 분석

타액 및 플라크 샘플은 베른 대학교 치과의과대학 치주학과 구강 미생물학 실험실로 전송되며 모든 실험실 분석은 학교 치주학과 구강 미생물학 실험실의 Aysegul Sari 박사가 수행합니다. 재료 이전 계약이 체결된 후 스위스 베른 대학교 치과의과 박사 학위를 취득했습니다.

생화학적 분석

환자의 흡연 상태는 타액 샘플에서 효소 면역분석 키트를 사용하여 코티닌 분석을 통해 결정됩니다.

미생물학적 분석

Fusobacterium nucleatum, Campylobacter rectus, Prevotella intermedia, Aggregatinacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Saccharibacteria(TM7), Streptococcus aureus 및 Actinomyces oris의 존재와 풍부함을 플라크 샘플에서 분석합니다. 이러한 박테리아의 표적 식별은 Real Time Q-PCR을 통해 이루어집니다. 16sRNA 시퀀싱은 편견이 없고 표적화되지 않은 미생물학적 분석에 사용됩니다. 전체 genomic DNA를 추출한 후 16S rRNA 증폭을 진행합니다.

GCF 분석

GCF 분석은 두 번째 연구로 계획되어 있습니다. Luminex 비드 기반 다중 면역분석법을 사용하여 GCF 및 타액 샘플 분석을 수행합니다. GCF 및 타액 마커는 이전 문헌에 따라 산화 스트레스 마커 8-OHdG, PARK7/DJ-1 및 NADPH 산화효소 염증 마커 IL-1beta, IL-17A/E, 오스테프로테게린(OPG)으로 광범위하게 선택되었습니다. 결합 조직 분해 마커 MMP-8, MMP-3; 복구/재생 마커 뼈 형태 형성 단백질(BMP)-2, 표피 성장 인자(EGF) 및 혈관 내피 성장 인자(VEGF).

통계 분석

문헌에 유사한 연구가 없기 때문에 효과크기를 기준으로 표본계산을 실시하였다. 네 그룹 간 95% 신뢰 수준에서 효과 크기(큰 효과 크기) 0.4, 검정력 수준 90%에서 유의미한 차이를 탐지하기 위해 각 그룹별로 필요한 표본 크기는 24명이었습니다. 표본 크기 계산에는 Gpower 패키지 버전 3.1이 사용되었습니다. 연속형 변수의 정규성은 Shapiro-Wilk 검정을 통해 평가됩니다. 비모수적 통계 방법은 분포가 치우친 값에 대해 수행됩니다. 두 개 이상의 비정규 분포 변수를 비교하기 위해 Kruskal-Wallis 테스트를 수행하고 사후 쌍별 다중 비교 분석을 위해 Dunn 다중 비교 테스트를 수행합니다. 두 개 이상의 정규 분포 그룹을 비교하기 위해 일원 분산 분석(oneway ANOVA) 테스트를 수행하고, 사후 쌍별 다중 비교 분석을 위해 Tukey 테스트를 수행합니다. 흡연 정도가 임플란트 주위 및 치주 질환에 미치는 영향을 확인하기 위해 일반 선형 모델을 수행할 것입니다.